分枝杆菌属课件

分枝杆菌属鉴定概述分枝杆菌与放线菌属放线菌目（Actinomycetates）分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳性。多数细菌在生长的一定时期抵抗酸-醇（acid-alcohol-fast），故又称抗酸杆菌（acid-fastbacillus）放线菌（Actinomyces）是一群在生物学特性上与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、棒状杆菌等有着亲缘关系分枝杆菌属分类结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌牛型分枝杆菌非洲分枝杆菌田鼠分枝杆菌麻风分枝杆菌非结核分枝杆菌

根据生长速度快生长菌慢生长菌流行病学结核病的病原菌1882年德国细菌学家Koch证明全球性卫生问题是艾滋病高发区人群的首要死因世界防治结核病日3月24日MTB包括人结核分枝杆菌（M.tuberculosis）牛分枝杆菌（M.bovis）非洲分枝杆菌（M.africanum）坎纳分枝杆菌（M.canettii）田鼠分枝杆菌(M.microti)等前四种对人类致病，其中人型MTB感染率最高分类结核病的国际形势WHO统计世界1/3的人口感染结核世界范围每年死亡人数为200万人↘140万（2010年）90%以上在发展中国家每年新病例为800万-1000万人我国结核病人450万人，每年死亡人数约25万WHO已把结核病与AIDS、疟疾一起列为人类的最主要杀手形态与染色细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。无芽胞无鞭毛,无内外毒素抗酸染色阳性(Zeihl-Neelsenacid-faststain)齐-尼氏抗酸染色法

Ziehl-Neelsenmethodforacidfastbacteria涂片、固定、干燥初染：石炭酸复红脱色：3%的盐酸酒精复染：美篮染液干燥、镜检培养特性专性需氧，最适pH6.5-6.8生长缓慢：繁殖一代耗时18h营养要求高罗氏培养基：甘油、天门冬素、蛋黄、马铃薯、无机盐类、孔雀蓝液体培养基吐温-80(Tween80)培养特性细菌在罗氏培养基上菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。在液体培养基中由于接触营养面大，细菌生长较为迅速。一般1～2周即可生长。临床标本检查液体培养比固体培养的阳性率高数倍。

抵抗力Resistantto干燥酸碱碱性染料青霉素等Sensitivity紫外线酒精湿热抗结核药物异烟肼利福平等致病物质类脂蛋白质多糖致病性致病物质类脂（lipid）分枝菌酸（mycolicacid）…….抗酸染色特性索状因子（cordfactor)………..慢性肉芽肿磷脂（phosphatide）………….结核结节，干酪样坏死蜡质D（wax-D）………………迟发型超敏反应硫酸脑苷酯（sulfatide）……...细胞内寄生蛋白质…结核结节形成、全身中毒多糖（polysaccharide）…….胞内寄生所致疾病感染类型肺部感染：肺结核（原发感染、继发感染）肺外感染传播途径呼吸道消化道破损皮肤黏膜等侵犯多种组织器官原发结核原发综合征：原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大致病性肺结核-继发感染：成人多发诱发因素原发病灶中潜伏的结核分枝杆菌引起外界的结核分枝杆菌再次入侵感染特点病灶局限，不累及临近淋巴组织易发生慢性肉芽肿和干酪样坏死和空洞肺结核-继发感染病程呈慢性渐进性，伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节，若结节破溃，则可形成空洞，传染性强。致病性右下干酪样肺结核右下干酪性肺炎并空洞形成临床表现咳嗽，咳痰(血痰）全身倦怠感微热盗汗胸痛食欲低下体重减少免疫机制：主要是细胞免疫感染免疫、有菌免疫（infectionimmunity）感染TB或接种BCG后，机体可产生对该菌特异性免疫力，维持依赖于TB在体内的存在细胞免疫迟发型超敏反应

结核菌初次感染（10-14d)既往感染(1-2d)皮下注射红肿、溃疡、坏死红肿、浅表溃烂淋巴结肿大

全身播散死亡病灶局限无播散，无死亡获得免疫力郭霍现象结核菌素试验结核菌素试剂旧结核菌素（oldtuberculin，OT)纯蛋白衍化物

(purifiedproteinderivative，PPD)结核菌素试验方法取两种PPD5单位注入两前臂皮内48～72小时后观察红肿直径结果阴性：＜5mm阳性：＞5mm强阳性：≥15mm结核菌素试验结果、临床意义阳性强阳性

阴性硬结、红肿直径5～15mm之间既往感染过结核分枝杆菌卡介苗接种成功硬结直径超过15mm以上表明可能有活动性结核，应进一步检查注射部位有针眼大的红点或稍有红肿，硬结直径小于5mm原发感染的早期严重结核病或其他传染病（麻疹）老年人免疫力低下病人微生物学检验标本采集据感染部位的不同采集不同的标本疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀10～15ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通常需3～5份标本）采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无菌注射器抽取送检其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取凝块作涂片或接种培养微生物学检查涂片染色镜检：抗酸染色须与非结核分枝杆菌进行鉴别加热法：非结核分枝杆菌加热2分钟即失去抗酸性，而结核分支杆菌则不然结核菌素皮肤试验：检测潜伏结核感染的唯一的方法细菌学基因诊断：PCR动物试验结核分枝杆菌痰标本抗酸染色结核分枝杆菌尿标本抗酸染色荧光金胺染色结核分枝杆菌

涂片镜检的报告方式半定量报告石炭酸复红染色：抗酸杆菌（1000×）荧光染色：抗酸杆菌（450×）未找到抗酸菌可疑抗酸杆菌；再送标本检测01～2/300视野01～2/70视野1＋1～9/100视野2～18/50视野2＋1～9/10视野4～36/10视野3＋1～9/视野4～36/视野4＋>9/视野>36/视野结核病快速诊断方法用PCR法快速诊断MTB感染PCR法检测DNA特异性更强，敏感性更高PCR须按法规要求规范操作，应防止标本污染出现假性结果全自动核酸扩增试验被世界卫生组织认可约100分钟内可为多名病人做出准确诊断分离培养与鉴定

培养特性

专性需氧3％～5％CO2能促进其生长营养要求高:须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养基上才能生长良好。常用罗氏培养基最适生长温度为35～37℃，最适pH6.5～6.814～18h分裂1次，在固体培养基上2～5周才出现肉眼可见的菌落典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样分离培养标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长)37℃，5％～10％CO2培养8周结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落涂片染色为抗酸阳性三、微生物学检验鉴定

菌种鉴定

(1)生化反应（烦琐、费时（4～8周）,影响因素多）（2）噬菌体鉴定法（3）分子生物法菌种鉴定

(4)高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸生化反应--烦琐、费时（4～8周）,影响因素多结核分枝杆菌不发酵糖类能产生触酶人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB则不能人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无毒株则为阴性，并失去索状生长现象特异性防治卡介苗预防接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童免疫时间：3～5年药物治疗五项原则早期、联合、规则、足量、全程二、麻风分枝杆菌Mycobacteriumleprae麻风分枝杆菌（M.leprae）麻风病的病原菌慢性传染病主要侵及皮肤、粘膜和神经引起关节的畸形性病变世界各地均有报道主要分布在亚、非洲拉丁美洲生物学形状形态与染色细长略弯曲无芽胞，无荚膜，无鞭毛抗酸染色阳性典型的胞内寄生菌麻风细胞抵抗力抗干燥：可存活7天低温环境生存良好紫外线及加热敏感培养特性不能在人工培养基中生长小鼠足垫：传代动物模型：犰狳（armadillo)致病性易感人群：人传播途径：密切接触和呼吸道传播潜伏期：平均2-5年发病慢、病程长麻风分为3种类型瘤型麻风结核样型界线类、未定类瘤型麻风传染性强病情严重侵犯部位皮肤和粘膜神经眼睛及内脏镜检病变部位麻风细胞肉芽肿结核样型传染性小侵犯部位皮肤外周神经很少累及内脏Mycobacteriumleprae结核样型麻风皮肤损害界线类麻风引起的手变形微生物学诊断显微镜检查，抗酸染色PCR：尚在研究阶段麻风细胞抗酸染色麻风分枝杆菌组织切片（Triff染色）防治原则特异的预防尚无有效的菌苗早期发现、早治疗目前多采用二三种药联合治疗氨苯砜（dapsone，DDS）LepromatousLeprosyPre-andPost-Treatment三、非结核分枝杆菌一、概述与分类二、临床意义三、微生物学检验概述与分类非结核分枝杆菌（ＮontuberculosisMycobactericum，NTM）

:指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分枝杆菌)和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。

NTM种类众多，现已被鉴定的有150余种,包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）分为三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能培养菌三种类型。概述临床意义迄今为止已发现NTM有150余种，其中约1/3与人类疾病有关。条件致病菌毒力低于结核分枝杆菌自然界中广泛存在可以在人体某些部位定植结核病和NTM感染的治疗不同

为何要关注NTM？自然界中广泛存在，如水、土壤和气溶胶，可导致免疫力低下的患者感染。近年来，因手术器械、注射器具及医疗用水等灭菌不合格、使用不规范造成患者手术切口、注射部位NTM感染暴发事件。如：广东省某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件。该事件是由于手术器械灭菌不合格导致的手术切口感染，病原菌为快速生长型分枝杆菌。警钟长鸣——NTM潜在杀手？

卫生部关于严重医院感染事件通报—1.关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报2.卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报3.关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报4.关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报5.关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报6.卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报7.关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的通报

———摘自江苏省卫生厅《严重医院感染事件通报与处罚规定选编》（2010年7月）光产色分枝杆菌（RunyonⅠ群）堪萨斯分枝杆菌（M.kansaii）：能引起肺内和肺外类似结核样的病变海分枝杆菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起冷血动物（如鱼）感染外，亦能引起人的感染。通过皮肤微小创口侵入皮肤而引起所谓的“游泳池肉芽肿”。渔业工人可经受损皮肤遭受感染猿分枝杆菌（M.simiae）：首先从猿分离到此菌，形态同结核分枝杆菌，可感染人类暗产色分枝杆菌（RunyonⅡ群）瘰疬分枝杆菌（M.scrofulaceum）：可引起人的淋巴结炎或肺部感染。斯氏分枝杆菌(M.szulgai)：可引起成人肺部的慢性感染。不产色分枝杆菌（RunyonⅢ群）鸟-胞内分枝杆菌复合体(M.avium-intracellularecomplex,MACorMAIC)：鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌有许多相似之处，故合起来称之为MAC。近年来发现HIV感染和AIDS患者易感染MAC。溃疡分枝杆菌（M.ulcerans）：对人可通过创伤局部感染，常在四肢伸侧形成无痛性溃疡，叫做Buruli溃疡，缓慢愈合或出现继发感染。蟾蜍分枝杆菌（M.xenopi）：是蟾蜍肉芽肿的病原菌，对人则多引起老年男性的慢性肺部感染。快速生长分枝杆菌（RunyonⅣ群）⑴偶发分枝杆菌（M.fortuitum）：可引起人的局部感染或肺部感染，对现有的抗结核药物均耐药。⑵龟分枝杆菌（M.chelonei）：该菌在引起免疫力低下患者感染的快速生长非结核分枝杆菌中最常见，外伤引起的软组织病变及手术后继发感染，亦可引起肺部感染。⑶脓肿分枝杆菌（M.abscessus）：以前曾作为龟分枝杆菌脓肿亚种。常存在于自来水中，引起注射后医院感染的暴发。该菌也可散发引起丰胸术后、中心静脉插管、动脉插管以及透析导管所致的菌血症。另外，该菌可导致：近90%由快速生长分枝杆菌引起的肺部感染，外伤后感染以及超过90%鼓膜切开管植入术后耳炎。与龟分枝杆菌相似，该菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染脓肿分枝杆菌引起的注射后感染难于愈合的伤口潮湿治疗室曾导致肌肉注射感染表现：

1998年4月1日～5月31日共手术292例，4月22日～7月14日发生切口感染166例。潜伏期为20～30天。切口部位开始为小结节，继而化脓成窦道，有线头挟出。清创换药后创面清洁但不愈合，或愈合后又复发，并有淋巴结炎倾向。调查：20份切口分泌物标本培养出龟分枝杆菌（脓肿亚型）。医院环境和无菌物品细菌学检查合格。使用中和未启用的戊二醛半小时不能杀灭金葡菌、1小时不能杀灭龟分枝杆菌，测浓度为0.137%。结论：戊二醛浓度错配导致手术器械分枝杆菌污染，从而引起切口感染。某医院手术切口分枝杆菌感染暴发

（广东深圳，1998）

深圳孕妇感染事件开庭：

46人索赔2000多万元

肌注部位偶发分枝杆菌感染暴发

（福建南平，1998）表现：

1998年8月～11月某诊所59例患者发生肌注部位感染，潜伏期2～80天。起初肌注无明显不适，少数针孔持续疼痛，多数在洗澡或接通知后抚摸发现注射处肿块长期不消。15天约长0.5～1.0cm，后期硬块出现波动感，压痛明显，出现水样脓液。继发腹股沟淋巴结炎4例。脓液或病理标本43份中33份检出偶发分枝