高效液相实验报告

篇一：高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告一、实验目的1认识液相色谱的发展历史及最新进展2学习液相色谱的基本构造及原理3掌握液相色谱的操作方法和解析方法，可以经过hplc分别测定来对目标化合物的解析判断。二、实验原理液相色谱法采纳液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的细小差异达到分其他目的。当两相做相对挪动时，被测物质在两相之间进行屡次多次的质量交换，使溶质间细小的性质差异产生放大的成效，达到分别解析和测定的目的。液相色谱与气相色谱对比，最大的长处是可以分别不行挥发而拥有必定溶解性的物质或受热后不稳固的物质，这种物质在已知化合物中据有相当大的比率，这也确立了液相色谱在应用领域中的地位。高效液相色谱可解析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于解析中、高分子量、高沸点及热稳固性差的有机化合物。80%的有机化合物都可以用高效液相色谱解析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。三、高效液相色谱的分类吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法四、高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱最少包含输液系统、进样器、分别柱、检测器和数据办理系统等几部分。1输液系统：包含贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、吻合hplc要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小，经过柱子的流动相遇到的流动阻力很大，所以需要高压泵输送流动相。2进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量颠簸小、便于实现自动化等多项要求。进样系统包含取样、进样两项功能。3分别柱：色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、解析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包含离子交换树脂）等的粒度平时在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采纳的固定相粒度甚至可以达到1μm，而制备色谱所采纳的固定相粒度平时大于10μm。hplc填补柱效的理论值可以达到50000/m～160000/m理论板，一般采纳100-300mm的柱长可满足大多数样品的解析的需要。因为柱效内、外多种要素的影响，所以为使色谱柱达到其应有的效率。应尽量的减小系统的死体积。4检测系统：hplc检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续丈量色谱柱流出物（包含流动相和样品组分）的所有特征变化。这种检测仪器包含示差折光检测器、介电常数检测器、电导检测器和磁光旋转检测器。这种检测器适用范围广，但是对于流动相有响应，受温度变化、流动相流速和构成变化的影响，检测灵敏度低，不可以用于梯度洗脱的分别模式。专用型检测器对样品中组分的某种物理或化学性质敏感，可用于丈量被分别组分某类特征的变化。这种检测器包含紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器、放射性检测器。5数据办理系统：数据办理系统可以分为数据办理系统和专用智能办理系统两类，前者可以达成一般的色谱数据办理任务，有些软件可以实现部分仪器的控制功能。前者即一般的色谱工作站，后者平时称之为专家系统。五、实验数据数据一：数据二：1ｈｐｌｃ－ｌ、高效液相色谱的使用中的注意事项流动相：、流动相应采纳色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需常常更换（一般不超出2天），防范长菌变质；样品：1、采纳过滤或离心方法办理样品，保证样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附加的说明书，注意适用范围，如ph值范围、流动相种类等；2、使用吻合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后密切关闭两端保留；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；篇二：解析实验报告高效液相色谱华南师范大学实验报告学号：专业：年级班级：课程名称：仪器解析实验实验项目：液相色谱解析混杂样品中的苯和甲苯实验时间：一、[实验目的:]1、掌握高效液相色谱定性和定量解析的原理及方法2、认识高效液相色谱的构造、原理及操作技术二、[实验原理:]高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采纳高压输液泵，高效固定相和高矫捷的检测器，而发展起来的迅速分别解析技术。拥有分别效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特色。其基根源理：利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不一样的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配屡次进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有细小差异，跟着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都获取分别，经过检测器时，样品浓度被变换成电信号传递到记录仪。三、[仪器和试剂:]1.主要仪器：岛津液相色谱仪(lc-10at)[配有紫外检测phenomenexo柱]；10μl微量注射器2、试剂：甲醇、水苯和甲苯混杂待测溶液苯标准溶液：2.0μl/ml甲苯标准溶液：2.0μl/ml苯、甲苯混杂标准溶液：1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.0μl/ml、10.0μl/ml四、[实验步骤]12、.选择适合的流动相当比，优化色谱条件经过调理溶剂甲醇和水的混杂比率，从而来优化色谱调剂。调好最正确色谱条件，控制流速为1ml/min。柱温30℃，检测波长354nm3、苯、甲苯定性解析在最正确条件下，待基线走稳后，用10μl微量注射器分别进样10μl苯和甲苯混杂待测溶液，10μl苯标准溶液（2.0μl/ml）和10μl甲苯标准溶液（2.0μl/ml）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确立苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量解析在最正确条件下，待基线走稳后，用10μl微量注射器分别进样1.0μl/ml、2.0μl/ml、5.0μl/ml10.0μl/ml的苯和甲苯混杂标准溶液10μl。观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。绘制苯和甲苯混杂标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线5、苯和甲苯混杂待测溶液解析依据获取的苯和甲苯混杂待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从绘制的标准曲线上查出苯和甲苯混杂待测溶液中苯和甲苯的各自的浓度。六、实验数据办理及解析1、色谱条件优化2.00色谱1.7570%1.500.750.50min解析：本次实验分别选择了甲醇：水=60%：40%，70%：30%，80%：20%的溶剂配比，经过比较不一样溶剂配比条件下，甲苯和苯的峰宽、保留时间从而确立采纳甲醇：水=80%：20%作为本次实验的最正确色谱条件。2、定性解析μmin解析：在同一色谱操作条件和进样量下，分别测定试样溶液中苯和甲苯组分及已知苯和甲苯纯物质的保留时间并将其色谱峰、保留时间与对应的已知苯和甲苯纯物质进行比较，二者基实情同，从而确立混杂样品中含有苯和甲苯。3、定量解析苯、甲苯混杂标准溶液浓度分别为：1ul/ml,2ul/ml,5ul/ml,10ul/ml。4、未知样品浓度七、结果谈论1、实验中为何采纳标准曲线法作为定量的方法？答：因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单。只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采纳操作、计算简略的标准曲线法得出正确的实验结果。若采纳归一化法或内标法，固然能获取准确更高的实验结果，但因为实验操作、计算复杂，不可以迅速解析，故实验中采纳标准曲线法作为定量的方法。2．在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依照。采纳正相液-液分配分别时：第一选择中等极性溶剂，若组分的保留时间很短，降低溶剂极性，反之增添。也可在低极性溶剂中，逐渐增添此中的极性溶剂，使保留时间缩短。3．选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防范微量杂质长远积累损坏色谱柱和使检测器噪声增添。（2）防范流动相与固定相发生作用而使柱效降落或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂损坏氧化铝固定相等。

，（3）试样在流动相中应有适合的溶解度，防范产生积淀并在柱中堆积。（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不该有紫外汲取。4．影响分其他要素与提升柱效的门路1）．液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提升柱效主要门路，降低固定相粒度可提升柱效。2）．液相色谱中，不行能经过增添柱温来改进传质；（恒温）3）．改变淋洗液构成、极性是改进分其他最直接的要素。5.高效液相色谱与气相色谱的主要差异可归纳于以下几点：进样方式的不一样：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气化或裂解；(2)流动相不一样，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着必定的互相作用力；(3)因为液体的粘度较气体大两个数目级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数目级；因为流动相的化学成分可进行广泛选择，并可配置成二元或多元系统，满足梯度洗脱的需要，因此提升了高效液相色谱的分辨率（柱效能）；(5)高效液相色谱采纳5~10lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上浸透性大大缩篇三：高效液相实验报告化学与环境化学科学学院解析化学骆洪伟高效液相实验报告一、实验目的1.认识高效液相的实验原理。2.学习并掌握高效液相色谱仪(hplc)的操作步骤。二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，因为样品溶液中的各组分在两相中拥有不一样的分配系数，在两相中作相对运动，经过屡次多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在挪动速度上产生较大的差异，被分别成单个组分挨次从柱内流出，经过检测器时，样品浓度被变换成电信号传递到记录仪。三、hplc的介绍及操作步骤高效液相色谱仪主要包含高压输送系统、进样系统、分别系统、检测系统、数据办理系统及梯度洗脱等辅助装置。其工作流程如图1所示。1.高压输液系统高压进样系统的作用是供给足够恒定的高压，使流动相以稳固的流量迅速浸透经过固定相。高压输液系统由贮液器、高压泵、过滤器和梯度洗脱装置构成，其核心部件是高压泵，要求高压泵拥有输出压力(1.5×107～4.5×107pa)，输出流量恒定(精度0.1ml·min-1)，流量设定范围可调。梯度洗脱装置的作用是在分别过程中，按必定程序连续改变流动相中多种不一样性质溶剂的配比，以改变流动相的极性、离子强度或酸度等，从而提升试样的分别效率，缩短解析时间，使色谱峰形获取改进，提升测定的矫捷度和定量的正确度。其他，还附有加热脱气、超声波脱气等装置，以除去溶解在流动相或试样中的气体。3.进样系统在高效液相色谱中，一般采纳旋转式六通阀于高压下进样。采纳旋转式六通阀进样的长处是进样量可变范围大耐高压，宜于进样自动化，但易造成色谱峰柱前扩展。4.分别系统液相色谱柱一般采纳内壁抛光的优良不锈钢管或厚壁玻璃管。为使工作压力不致过高，柱长都比较短，一般在5～30cm，柱径为4～5mm。柱子的填补取决于柱填料的性能，对于生物胶或离子交换树脂等，因遇到溶剂会膨胀，所以一定采纳匀浆湿法填补。为防范颗粒大的填料先沉降而产生分层现象，可采纳等密度溶剂(四氯乙烷和四氯乙烯混杂物)配成匀浆。用高压泵将其迅速压入装有流动相的色谱柱中，经冲洗后，即可使用。5.检测记录系统高效液相色谱检测器要求拥有矫捷度高、噪声低、线性范围宽、响应快、死体积小等特色，且对温度和流量的变化不敏感。目前，液相色谱常用检测器有紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光检测器和电化学检测器等

，。hplc操作步骤过滤流动相，依据需要选择不一样的滤膜。对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。(3)打开hplc工作站（包含计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。(4)进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进下手动菜单。(5)有一段时间没用，也许换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超出10ml·min-。调理流量，首次使用新的流动相，可以先试一试看压力，流速越大，压力越大，一般不要超出2000。点击injure，采纳适合的流速，点击on，走基线，观察基线的状况。(7)设计走样方法。点击file，采纳select?users?and?methods，可以采纳现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new?method。采纳需要的配件，包含进样阀，泵，检测器等，依据需要而不一样。选完后，点击protocol。一个完好的走样方法需要包含：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject变换；d.走样时间，随不一样的样品而不一样。进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标志等。所有样品走完后，再用上边的方法走一段基线，洗掉节余物。关机时，先关计算机，再关液相色谱。登记。四、注意事项泵的使用和保护注意事项为了延长泵的使用寿命和保持其输液的稳固性，一定依照以下注意事项进行操作：①防范任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，所以应早先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最幸好玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采纳millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的进口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应常常清洗或更换。②流动相不该含有任何腐化性物质，含有缓冲液的流动相不该保留在泵内，特别是在停泵过夜或更长时间的情况下。假如将含缓冲液的流动相留在泵内，因为蒸发或泄漏，甚至不过因为溶液的静置，即可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒相同损坏密封环和柱塞等。所以，一定泵入纯水将泵充分冲洗后，再换成适合于色谱柱保留和有益于泵保护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。③泵工作时要留神防范溶剂瓶内的流动相被用完，不然空泵运行也会磨损柱塞、缸体或密封环，最后产生漏液。④输液泵的工作压力决不要超出规定的最高压力，不然会使高压密封环变形，产生漏液。⑤流动相应该先脱气，省得在泵内产生气泡，影响流量的稳固性，假如有大批气泡，泵就没法正常工作。假如输液泵产生故障，须查明原由，采纳相应措施除去故障：①没有流动相流出，又无压力指示。原由可能是泵内有大批气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运行，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原由是密封环磨损，需更换。②压力和流量不稳。原由可能是气泡，需要除去；也许是单向阀内有异物，可卸掉单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋长的微生物部分拥堵，这时，可卸掉砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/l硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再马上冲洗。③压力过高的原由是管路被拥堵，需要除去和冲洗。压力降低的原由则可能是管路有泄漏。检查拥堵或泄漏时应逐段进行。梯度洗脱在进行梯度洗脱时，因为多种溶剂混杂，并且构成不停变化