临床血液学检验技术课件抗凝物质与纤溶活性的检验

抗凝系统检验

纤溶活性检验广医二院王忠英止血血管壁血小板凝血凝血因子抗凝细胞、体液抗凝物质纤溶纤溶酶原的活化与抑制物抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）抗凝血酶检测Antithrombinactivity,AT:A发色底物法Antithrombinantigen,AT:Ag免疫火箭电泳ELISA免疫比浊法AT活性检测原理：发色底物法反应原理：InhibitorsTargetprotease(s)AntithrombinThrombin,IXa,Xa,othersa2-macroglobulinNon-specificTrypsininhibitorNeutrophil

elastase,Thrombin,othersHeparincofactorIIThrombin血浆中的凝血酶抑制物肝素辅因子II，凝血酶特异的丝氨酸蛋白酶抑制剂临床意义AT降低：遗传性AT缺陷:AD，易栓症（thrombophilia)TypeⅠ,TypeⅡ，杂合子在40%-60%遗传性AT缺乏的临床特点：年轻（40-45）发生血栓•有静脉血栓家族史•复发性静脉血栓形成•少见部位的血栓形成•怀孕期间血栓形成•肝素抵抗临床意义获得性AT缺乏：合成减少（肝病，早产儿）丢失过多（肾病综合征）消耗增加（DIC）药物诱导（肝素、L-门冬酰胺酶）

AT升高：口服抗凝药，急性出血期等

抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）APCDomainstructureofthrombomodulin→TheproteinCanticoagulantpathway血浆蛋白C（PC）的检测PC:activity,PC:A凝固法（APTT）发色底物法PC:antigen,PC:Ag免疫火箭电泳血浆蛋白C（PC）活性检测凝固法-APTTchromogenicsubstrateassay血浆蛋白C（PC）检测PC活性检测方法评价凝固法影响因素多，如存在狼疮抗凝物质、FⅧ活性升高、FⅤ变异等。若存在APC抵抗时，血浆凝固时间假性缩短。可用乏PC的基质血浆进行稀释以纠正。确诊遗传性PC缺乏，活性测定应选发色底物法。血浆蛋白C（PC）抗原检测ELISAClassificationofproteinCdeficiencytypeⅠ，typeⅡ纯合子0-20%，杂合子<50%1.

HereditaryproteinCdeficiency2.Warfarin-inducedskinnecrosis（WISN)oralanticoagulanttherapywithvitaminK-antagonistssuchas

warfarin

transientbutseverehypercoagulablestate

microvascularthrombosis临床意义3.AcquiredproteinCdeficiencyDICLiverdiseaseVitaminK-deficiencyMalignancyAdultrespiratorydistresssyndromeNeonatalperiod4.ElevatedPClevelsDiabetesNephroticsyndromeLatepregnancyOralcontraceptives临床意义抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）TheproteinCanticoagulantpathwayfreePS:activity,FPS:A凝固法：PTfreePS:antigen,FPS:Ag

胶乳凝集比浊法免疫火箭电泳血浆蛋白S（PS）检测FreePSactivityassayPT＋PSPSPSPSPSPSPSPSPS＋PSPSPSPSPSPSPSPSFreePSactivityassay胶乳凝集比浊法C4bBPClassificationofproteinSdeficiencyTypeⅠ——insufficientquantityTypeⅡ——abnormalfunctionTypeⅢ——increasedclearanceoffreePS临床意义1.Increasewithage2.AcquiredproteinSdeficiencyDecreasesduringpregnancy,inneonatesanduseoforalcontraceptivesDecreasesduringDIC,liverdiseaseDecreasesduringanti-vitaminKtherapy临床意义3.Hereditary

proteinSdeficiencyTypeIIdeficiencyrareTypeIandTypeIIIdifferentphenotypicexpressionsofthesameproteinSgenotypeabout140differentmutationshavebeenreportedNomutationsfoundinabout40%ofthepatients抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）血浆肝素及类肝素物质的检测检测原理：1.甲苯胺蓝纠正试验——TT+甲苯胺蓝2.血浆肝素定量——发色底物法，抗Ⅹa活性检测UFH：抑制thrombin、FXaLMWH：抑制FXa临床意义：1.肝素增多：抗凝治疗、体外循环、血液透析等

肝素浓度监测，0.2-0.4U/ml。2.类肝素物质增多：严重肝病、SLE、DIC、某些恶性肿瘤、肾病综合征等抗凝系统检验抗凝血酶（AT）蛋白C（PC）蛋白S（PS）组织因子途径抑制物（TFPI）（自学）肝素、类肝素物质血浆狼疮抗凝物血浆凝血因子抑制物（自学）狼疮抗凝物（Lupusanticoagulant，LA）狼疮抗凝物是一种针对带负电荷磷脂的自身抗体，是抗磷脂抗体的一种抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白1抗体在体外，可阻断凝血酶原转变成凝血酶，进而延长磷脂依赖性凝血试验的凝固时间在体内，促进血液凝固检测原理RVVT

orAPTTLAC筛查试验

延长加入正常血浆后，仍延长LAC确认试验

加入过量磷脂中和LAC后，凝固时间缩短或恢复正常，确认血浆中存在LAC比值计算：SR、CR、NLR临床意义LA阳性可见于：自身免疫性疾病、复发性流产、磷脂综合征、易栓性疾病、动静脉栓塞、恶性肿瘤纤溶活性的检验1.纤溶有关组分的检测血浆纤溶酶原，PLG血浆组织型纤溶酶原活化剂血浆纤溶酶原活化抑制物血浆α2-抗纤溶酶血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物2.纤溶降解产物的检测血浆纤维蛋白（原）降解产物，FDPsD-二聚体血浆鱼精蛋白副凝固试验，3P血浆纤维蛋白肽Bβ1-42与Bβ15-42血浆纤溶酶原（PLG）的检测检测原理：PLG:A发色底物法PLG:AgELISA临床意义降低：纤溶活性增高合成减少：肝实质损伤消耗增多：DIC、溶栓治疗、原发性纤溶亢进等异常PLG血症：活性降低，含量一般正常遗传性PLG缺乏：极少见升高：纤溶活性降低血栓前状态、血栓性疾病，某些恶性肿瘤、糖尿病方法评价：发色底物法简便、快速，影响因素多，反映纤溶的灵敏度较低血浆组织型纤溶酶原活化剂（t-PA）检测检测原理：t-PA:A发色底物法t-PA:AgELISA临床意义增高：纤溶活性增强原发性与继发性纤溶亢进减低：纤溶活性减低

高凝状态、血栓性疾病、手术、口服避孕药溶栓治疗监测血浆纤溶酶原活化抑制剂（PAI）检测检测原理：PAI:A发色底物法PAI:CSDS利用t-PA-PAI形成1:1无活性复合物临床意义增高：提示发生血栓的风险增加

减低：提示出血的风险增加PAI-1是急性时相反应蛋白，与t-PA联合检测

纤溶活性的检验1.纤溶有关组分的检测血浆纤溶酶原，PLG血浆组织型纤溶酶原活化剂血浆纤溶酶原活化抑制物血浆α2-抗纤溶酶血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物2.纤溶降解产物的检测血浆纤维蛋白（原）降解产物，FDPsD-二聚体血浆鱼精蛋白副凝固试验，3P血浆纤维蛋白肽Bβ1-42与Bβ15-42

凝血酶因子ⅩⅢa

非交联交联纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白

纤溶酶纤溶酶纤溶酶

X、Y、D、E，Bβ1～42，A、B、C、HX’、Y’、D、E’，Bβ1～42，Bβ15～42，A、B、C、HX’、Y’、D、E’，D-二聚体DD/E、DY/YDYY/DXD等FPA,FPBFDPsD-二聚体Bβ1～42Bβ15～42临床应用：升高：血栓前状态与血栓性疾病，eg.DVT、DIC、肺栓塞、心梗、脑梗等，妊娠期原发性与继发性纤溶鉴别：D-二聚体、Bβ15～42治疗监测：溶栓治疗有效时，D-dimer先增高，后逐渐下降；含量持续升高或下降缓慢，提示药物用量不足。

DIC抗凝治疗中，高水平的D-dimer持续下降，间接说明凝血过程在减缓或中止，治疗有效；而持续升高说明治疗无效。D-dimer与FDPs组合分析FDPs（－）D-D（－）FDPs（－）D-D（＋）FDPs（＋）D-D（－）FDPs（＋）D-D（＋）纤溶活性正常原发性纤溶DIC,溶栓治疗FDPs假阴性？血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P）原理：继发性纤溶时，形成可溶性FM-FDP复合物。鱼精蛋白可使FM-FDP解离，FM-FM自行聚合沉淀，出现副凝固。临床意义：阳性：DIC早、中期阴性：DIC晚期，原发性纤溶亢进原发性与继发性纤溶鉴