肿瘤基因突变检测

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癌症是一类难以预防的疾病，中晚期癌症治愈的也许性又非常小，而早期癌症的治愈率可达65%以上，有点肿瘤可达90%以上，所以，战胜癌症的关键是早期发觉癌症。由于癌症早期常无特别症状，甚至毫无症状，故癌症的早期发觉、早期诊断要紧是经过定期健康体检和人群筛查完成。目前筛查癌症的办法要紧是经过化验血肿瘤指标及B超、CT、MRI、PET-CT等检查，但这些办法的敏感性和特异性均别高，发觉有异常时往往已是中晚期。

17种常见高发肿瘤，包括乳腺癌（breastcancer）、结肠癌（colorectalcancer）、子宫癌（endometrialcancer）、脑胶质瘤（glioma）、白血病（leukemia）、肺癌（lunXXXancer）、淋巴癌（lymphoma）、成神经管细胞瘤（medulloblastoma）、黑群素癌(melanoma)、间皮瘤(mesothelioma)、多性骨髓瘤(multiplemyeloma)、卵巢癌(ovariancancer)、胰腺癌(pancreaticcancer)、真性红细胞增多(polycythemiavera)、前列腺癌(prostatecancer)、肾细胞癌(renalcellcancer)和恶性内瘤(sarcoma)，其发病机制涉及与多种肿瘤发生共同相关的肿瘤易感基因群介导的分子改变，参与了肿瘤发生的早期分子事件。系统寻觅和探讨它们在肿瘤发生进展过程中的遗传学变异，对阐明肿瘤早期发生机制及寻觅肿瘤早期预警、早期诊断和早期治疗的分子靶标都具有重要的现实意义。利用高通量分子测序技术平台，可并且开展多个肿瘤基因突变检测项目，如EGFR、K-RAS、N-RAS、B-RAF、PI3K、p53、p16、BRCA1、

BRCA2等。

K-RAS基因(K-ras,p21)突变检测

KRAS基因（K-ras,p21）检测是目前大夫了解大肠癌患者癌基因状况最直截了当、最有效的办法，经过检测别仅能够深入了解癌基因的事情，更重要的是筛选出针对抗表皮生长因子受体靶向药物治疗有效的大肠癌患者，帮助大夫挑选对肿瘤病人最有效的治疗办法。

RAS基因家族与人类肿瘤相关的基因有三种——HRAS、KRAS和NRAS，分不定位在11、12和1号染群体上。在RAS基因中，KRAS对人类癌症妨碍最大，正常时，它能操纵调控细胞生长的路径；发生异常时，则导致细胞持续生长，并阻挠细胞自我毁灭，别能产生正常RAS蛋白，使细胞内信号传导紊乱，细胞增殖失控而癌变。

原癌基因（K-ras）突变发生于多种癌症，例如结肠癌、肺癌、甲状腺癌、胰腺癌、胆

K-RAS的异常激活有关，参与EGFR信号传导通路。结直肠癌患者中K-RAS基因的突变率约为35-40%,而且90%的突变发生在12、13位密码子，可导致p21-ras蛋白的生长信号的异常变化。该基因是TKI治疗的靶分子，携带有K-RAS基因突变的患者对TKI治疗别敏感。过度的生长信号可刺激细胞生长和增殖从而导致了癌症的发生。

K-ras基因检测（K-ras,p21）临床意义:检测K-ras基因突变是深入了解癌基因的事情，了解各种癌症的进展预后，放化疗疗效的重要指标。⑴K-ras基因突变发生在肿瘤恶变的早

期，同时原发灶和转移灶的K-ras基因高度保持一致，普通以为，K-ras基因状态不可能因治疗而发生变化。⑵K-ras基因突变见于20%的非小细胞肺癌(NSCLC)，其中肺腺癌占30%～50%。大肠癌患者K-ras突变率为30%～35%。

【检测位点】

ID突变外显子碱基变化Cosmic

Gly12Asp12GGT＞GAT521

Gly12Val12GGT＞GTT520

Gly12Ser12GGT＞AGT517

Gly12Cys12GGT＞TGT516

Gly12Ala12GGT＞GCT522

Gly12Arg12GGT＞CGT518

Gly13Asp13GGC＞GAC532

BRAFV600E基因突变检测

BRAF是一种癌基因，它编码一种丝/苏氨酸特异性激酶，是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK通路重要的转导因子，参与调控细胞内多种生物学事件，如细胞生长、分化和凋亡等。研究表明，在多种人类恶性肿瘤中，如恶性黑群素瘤、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、肝癌及胰腺癌等均存在别同比例的BRAF基因突变，约66%恶性黑XXX素瘤和15％的结肠癌中BRAF基因存在体细胞错义突变。大约80-90%的BRAF基因突变发生在exon15的1799核苷酸上，T突变为A，导致其编码的谷氨酸由缬氨酸取代(V600E)。目前以为，V600E突变可模拟T599和S602两个位点的磷酸化过程，从而使BRAF蛋白异常激活。BRAF突变状态与多种肿瘤的发生、进展及临床结局有关。随着BRAF突变研究的深入，可望为阐明肿瘤发生的分子机制，寻觅新的治疗途径与靶点提供思路。

BRAF基因突变作为乳头状甲状腺癌（PTC）发生的驱动性突变，差不多成为PTC细针穿刺细胞学标本诊断和病情预后的一具重要指标。BRAF基因突变率在PTC中高达44%，具有非常好的诊断意义。BRAF基因突变阳性的甲状腺癌病人较突变阴性病人预后别良。在黑XXX素瘤的治疗方面，针对BRAF基因突变所研发的新型靶向药物威罗菲尼（Vemurafenib）对BRAF基因V600E突变的患者疗效显著。在结直肠癌中，BRAF基因突变的患者对EGFR靶向药物也许存在原发耐药，所以，美国国家癌症综合治疗联盟（NCCN）《结直肠癌临床实践指南》（2013）建议，在使用爱必妥（Cetuximab）或帕尼单抗（Panitumumab）等靶向药物时，对KRAS基因野生型患者进一步检测BRAF基因状态。

威罗菲尼（Zelboraf,vemuragenib,PLX4032）获准用于治疗别可手术且经FDA批准的BRAFV600E突变检测呈阳性的转移性黑XXX素瘤患者。在批准该药的并且，FDA还并且批准了用于黑群素瘤患者相应突变检测的BRAFV600E突变检测。临床研究发觉，EGFR信号通路中的BRAF基因V600E突变的病人对EGFR单抗原发耐药。所以，推举肿瘤患者同意EGFR靶向药物治疗前，举行BRAF基因V600E突变的检测。而且，2011年版《NCCN结直肠癌临床实践指南》中明确指出结直肠癌患者应举行BRAF基因V600E突变的检测，假如患者存在V600E突变时，一线治疗发展后使用抗EGFR单抗治疗是无效的。BRAF基因突变检测能提高临床治疗的针对性，指导靶向药物的合理使用，幸免无效或治疗别当造成的病人病情延误，落低治疗风险。

有研究证明，在野生型KRAS肿瘤当中，发生BRAFV600E突变的个体，对Panitumumab/帕尼单抗和Cetuximab/西妥昔单抗彻底别反应，而没发生BRAF突变的野生型个体，32%有反应，68%没反应。这提示今后重点检测BRAF的突变可为今后结肠癌临床用药赋予指导，BRAF基因突

变的患者同意EGFR-TKI药物治疗的有效率低。而且，BRAFV600E突变可导致部分KRAS基因野生型患者对EGFR-TKI及EGFR单抗药物治疗别敏感。所以检测肿瘤患者B-RAF基因突变事情可用于指导EGFR-TKI的靶向用药。

检测位点：V600E。

B-raf基因突变检测实例

A．BRAF第600密码子野生型测序图谱

B．BRAF第600密码子突变型测序图谱

EGFR基因突变检测

肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤，并已成为绝大多数国家癌症死亡的要紧缘故。其中以非小细胞肺癌(NSCLC)最常见。目前靶向治疗差不多成为NSCLC临床治疗的重要手段。易瑞沙（Iressa/吉非替尼/Gefitinib,阿斯利康）和特罗凯（Tarceva/厄罗替尼/Erlotinib，罗氏制药）作为表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，是美国FDA批准用于NSCLC

靶向治疗的要紧药物。易瑞莎和特罗凯是近年来开辟的两种特异性较高的治疗NSCLC的肿瘤靶向治疗药物，该类药物经过抑制肿瘤发生、进展中必须的表皮生长因子受体酪氨酸激酶活性，从而达到抑制肿瘤细胞的增生、侵袭、转移、血管生成并促进肿瘤细胞的调亡。然而，临床试验表明易瑞沙和特罗凯仅对10-30%的NSCLC病人有显著疗效。进一步的研究发觉EGFR基因突变与NSCLC靶向治疗的疗效具有相关性，绝大多数携带EGFR基因突变的病人疗效显著。

EGFR基因29种突变：

EGFR第18外显子片段长度为437bp，核苷酸2155G＞A突变（G719S）；

EGFR第19外显子片断长度为411bp，要紧突变有：

核苷酸2235-2249Del（E746－A750del）

核苷酸2236-2250Del（E746－A750del）

核苷酸2254-2277Del（S752－I759del）

其它核苷酸片段缺失、插入、重复现象，如L747-T75linsA，L747-P753insS（747位亮氨酸至第753位苯丙氨酸缺失，插入丝氨酸）和L747-A750del。

EGFR第21外显子，片段长度为399bp，要紧突变有：

核苷酸2576T－G（L858R）

核苷酸2497T－G（L833V）

核苷酸2504A－T（H835L）

核苷酸2556位插入碱基G（q852）

采纳临床突变检测公认的“金标准”——Sanger测序法举行检测：

1、个体化指导：选出对患者效果最佳的药物，为大夫提供个体化用药的科学依据；

2、指导EGFR-TKI类药物的合理使用，帮助大夫为患者挑选最优的治疗方案；

3、幸免别合适药物无效治疗造成的病情延误，落低治疗风险，节约医疗资源。

【检测位点】

ID突变外显子碱基变化Cosmic

G719A182156G>C6239

2155G>A6252

G719S18

G719C182155G>T6253

E746-A750del(1)192235-2249del156223

E746-A750del(2)192236-2250del156225

L747-P753>S192240-2257del1812370

13551

E746-A750>I192235-2252>AAT(complex)

E746-A750del192235-2253del1812728

del1512678

E746-A750>A192237-2251

del1812367

E746-S752>A192237-2254

>T(complex)12384

E746-S752>V192237-2250

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E746-S752>D192238-2255

12422

>GC(complex)

L747-A750>P192238-2248

>GCA(complex)

12419

L747-T751>Q192238-2252

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L747-P753>Q192239-2258>CA(complex)12387

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>C(complex)12383

L747-T751>P192239-2