微生物实验细菌培养、接种

第二次实验课当前1页，总共22页。内容1.细菌培养法（录象）2.基础培养基制备（讲解示教）3.细菌接种法（一份/组）讲解4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解6.观察细菌代谢产物（讲解）7.第一次实验报告评讲当前2页，总共22页。基础培养基的制备去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水直接煮沸2小时调整酸碱度至pH7.6过滤，补足失水重新校正pH一次分装，高压灭菌，15磅（121.3℃）15～20分钟检菌如无细菌生长（液体透明）即可应用脱脂纱布过滤，按比例加入1％蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml4℃浸泡过夜煮沸半小时当前3页，总共22页。人体、物品中细菌检查手衣发钱材料：普通平板（1份/组）盖上，标记,置37℃，18-24h后观察。当前4页，总共22页。飞沫、空气中细菌检查材料：血平板

（1份/组）距口15—20cm用力咳嗽三次置空气中（避日光照射）30分钟飞沫空气盖上，标记,置37℃，18-24h后观察。当前5页，总共22页。结果观察——血平板

表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上形成不溶血的菌落。甲型溶血性链球菌形成的α溶血现象也称为甲型溶血现象或草绿色溶血现象，属于不完全溶血。金黄色葡萄球菌形成的β溶血现象也称为乙型溶血现象，属于完全溶血。当前6页，总共22页。细菌培养接种法——平板划线法

菌种：混合菌液材料：普通平板用具：接种环方法：分区划线1区2区3区4区原始区域当前7页，总共22页。半固体培养基斜面培养基

细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液体、半固体培养基用具：接种环、接种针液体培养基当前8页，总共22页。结果观察——普通平板

普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。当前9页，总共22页。结果观察——液体培养基

当前10页，总共22页。结果观察——斜面培养基

琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成的菌苔生长现象菌苔（mossy）指细菌生长繁殖后，在培养基表面形成的一层培养物当前11页，总共22页。结果观察——半固体培养基

1、扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。即无鞭毛的细菌：沿穿刺线生长

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112当前12页，总共22页。细菌代谢产物观察

细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样，产生的代谢产物也不一样。常见：糖发酵试验吲哚（indol）试验甲基红（methylred）实验VP（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验尿素酶试验硫化氢试验当前13页，总共22页。糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。当前14页，总共22页。

甲基红（methylred）实验M-甲基红（methylred）实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇甲基红-葡萄糖→丙酮酸甲基红+当前15页，总共22页。吲哚（indol）试验I-吲哚（indol）试验色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚↑

对二甲基氨基苯甲醛当前16页，总共22页。枸橼酸盐利用试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验利用枸橼酸盐生长+不能利用-当前17页，总共22页。

硫化氢试验硫化氢试验（醋酸铅培养基）某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（＋）。当前18页，总共22页。

尿素酶试验

产生氨使培养基变碱，

指示剂显红色，为阳性。

如：变形杆菌为阳性。当前19页，总共22页。IMViC试验I-吲哚（indol）试验M-甲基红（methylred）试验V-VP（Voges-Proskauer）试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验IMViC试验

IMViC试验大肠埃希菌++--

产气杆菌

--++IMViC试验：是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。当前20页，总共22页。实验小结1、三类培养基液体培养基——用于增菌；

均匀混浊、沉淀、表面生长半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个

月）；穿刺线，扩散生长固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月）

菌落、菌苔2、IMViC试验当前21页，总共22页。第三次实验课内容1、热力对细菌和芽胞