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文档简介

PCR引物设计软件

primerPremier5.0

应用简介一.引物设计的基本原则

引物长度(primerlength)产物长度(productlength)序列Tm值(meltingtemperature)ΔG值(internalstability)引物二聚体及发夹结构(duplexformationandhairpin)错误引发位点(falseprimingsite)引物及产物GC含量(composition)

1.引物的长度

一般为15-30bp,常用的是18-27bp,但不能大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适温度3.引物的GC含量

一般为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。4.引物所对应模板序列的Tm值最好在72℃左右5.ΔG值(自由能),

反映了引物与模板结合的强弱程度。一般情况下,引物的ΔG值最好呈正弦曲线形状,即5’端和中间ΔG值较高,而3’端ΔG值相对较低二.PrimerPremier5.0

引物设计软件简介

PrimerPremier5.0用途:

引物分析评价

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