噬菌体的效价测定

噬菌体的效价测定第1页/共23页★噬菌体的效价测定效价(滴度Title)-------是微生物或其产物、抗原与抗体等活性高低的标志。噬菌体效价--------指噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位（plaqueformingunit/ml或pfu/ml)表示其效价。第2页/共23页★一步生长（One-stepgrowth)第3页/共23页高浓度敏感细菌＋适量噬菌体相混合一定时间(5min)除去游离噬菌体进行高倍稀释培养定时取样测定噬菌体数★测定噬菌体生长的方法第4页/共23页★一步生长曲线第5页/共23页

潜伏期（latentphase)＝eclipsephase+intracellularaccumulationphase)—从噬菌体吸附菌细胞至菌细胞释出新噬菌体的最短时间。裂解期（risephasse)—宿主裂解，噬菌体数不断增加的时期。平稳期(plateauphase)—宿主全部裂解，噬菌体达最高点后的时期。裂解量(Burstphase)—每个被感染细菌释放新的噬菌体的平均数。裂解量(Burstphase)=---------------------------------★进行一步生长曲线的测定，能了解噬菌体在菌体内的最短潜伏期，和平均收获量，还可测知理化因素的变化对噬菌体感染循环的时间和对每个被感染噬菌体释放噬菌体的影响。裂解期平均噬菌体数潜伏期平均噬菌体数★裂解量第6页/共23页(2).TheLysogenicLifeCycleofTemperateBacteriophages第7页/共23页

Adsorption

Penetration

ProphageFormation

MaintainingtheProphageduringtheLysogenicLifeCycleReplication

MaturationRelease

But,followingspontaneousinduction,

Thebacteriuminsertsitsgenomeintothebacterium'snucleoidtobecomeaprophage.

Asthebacteriumreplicates,theprophagereplicatesasapartofthebacterium'snucleoid.第8页/共23页Fig.1:LysogenicLifeCycleofaTemperateBacteriophage

第9页/共23页温和噬菌体与溶源性①★温和噬菌体(temperatephage)----吸附并侵入细胞后，噬菌体的DNA整合在宿主的染色体组上，并可长期随宿主DNA的复制而同步复制，因而在一般情况下不进行增殖和引起宿主细胞裂解的噬菌体,如E.coli的

、P1、P2，Salmonellatyphimurium的P22等。★原(前)噬菌体(prophage)----处于整合态的噬菌体核酸。★温和噬菌体的特点——1.其核酸的类型都是dsDNA;2.具有整合能力；3.具有同步复制能力。第10页/共23页Lambda-Phage(E.Coli)Drawingofphagelambda

Lambda-Phage第11页/共23页★溶源性(lysogeny)------温和噬菌体侵染敏感细菌后不裂解它们，而与细菌共存的特性。★温和噬菌体的三种存在形式：游离态整合态营养态②第12页/共23页★溶源性细菌(lysogen或lysogenicbacteria)——在核染色体组上整合有前噬菌体并能正常生长繁殖而不被裂解的微生物。★溶源性菌株的命名：如：E.coliK12()③第13页/共23页★温和噬菌体在细菌染色体上的整合位置：

就目前所知，所有温和噬菌体的核酸都是双链DNA。按照温和噬菌体DNA与细菌DNA结合部位的不同，又可将其分成两类：①只有一个特定结合部位的温和噬菌体：如：大肠杆菌的噬菌体②具有多个或不定部位的温和噬菌体：如：大肠杆菌的P1噬菌体鼠伤寒沙门氏菌P22噬菌体。④第14页/共23页Lambdaattachmentsites第15页/共23页PhagelambdaentersthecellandintegratesintothehostcellbyreciprocalrecombinationatapreferredsitebetweenbioandgalontheE.colichromosome.Aberrantexcisionfromthehostchromosomecangeneratespecialisedtransducingphage.Lambdaattachmentsites第16页/共23页★烈性噬菌体与温和噬菌体的生活史比较：吸附侵入增殖成熟裂解整合同步复制自发或诱导多次循环裂解性循环溶原性循环⑤第17页/共23页第18页/共23页第19页/共23页⑥★溶源性菌株的检验：方法：在合适的培养基中培养待测菌样→→在对数期进行紫外线照射，诱导原噬菌体复制→→进一步培养→→过滤培养物，去处活菌体→→滤液与指示菌混合、倒平板（或将滤液加到敏感性指示菌的液体培养物中）→→观察是否有噬菌斑出现（或使菌液变清）.●敏感性指示菌——遇溶源菌裂解后所释放的温和噬菌体会裂解性生活周期的非溶源性菌株，这些菌株可以从自然界或菌种库中获得。第20页/共23页☆可稳定遗传，即溶源菌的子细胞一般也是溶原性的。☆自发裂解和诱发裂解（具有产生噬菌体的潜在能力）☆具有抗同原噬菌体感染的“免疫性”☆溶源性细菌的复愈☆获得新的生理特性（溶源性转变）☆局限性转导⑦★溶源菌有以下特性：第21页/共23页AmobofbacteriophageattackingE.coliTheovalobjectthatstretchesdiagonallyacrossthemicrographtop-to-bottomisasingle