临床血液学检验：血液病MICM检验

血液病MICM检验背景介绍

血液病是原发于造血系统的疾病，或影响造血系统伴发血液异常改变，以贫血、出血、发热为特征的疾病。

出血性疾病贫血症白细胞疾病常见血液病造血系统恶性肿瘤白血病的诊断分型：MICM分型发展由来1827年，法国的AlfredVelpeau描述第一例白血病1847年，Virchow首次提出了“白血病”这个名称1976年，法、美、英3国7位血液学家以光镜下的形态为主，参照细胞化学染色，制定了FAB分型标准，标志着现代白血病诊断与分型的开端

80年代末至90年代初，随着免疫学、细胞遗传学和分子生物学理论和技术的发展，出现了MICM（形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学）分型WHO造血和淋巴组织肿瘤分类方案（2001，2008）FAB分型及WHO分类FAB：主要建立在形态学基础上WHO(2001和2008)骨髓或外周血原始细胞比例≥20%将一些有明确诊断及预后指导意义的细胞或分子遗传学异常作为诊断和分型的重要标志将患者诊断之前的疾病状态和治疗措施纳入考量FAB和WHO分类方案的主要区别急性髓细胞白血病（AML）和相关肿瘤WHO分型伴再现性遗传学异常的AML伴MDS相关改变的AML继发于MDS或MDS/MPN伴有MDS相关细胞遗传学异常2或3系50%以上的细胞有发育异常治疗相关性AML不另作分类的AML髓细胞肉瘤Down’s综合征相关髓系增生疾病母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤伴再现性遗传学异常的AMLAMLwitht(8;21)(q22;q22) RUNX1-RUNX1T1AMLwithinv(16)(p13.1q22)ort(16;16) CBFB-MYH11APLwitht(15;17)(q22;q12) PML-RARAAMLwitht(9;11)(p22;q23) MLLT3-MLLAMLwitht(6;9)(p23;q34) DEK-NUP214AMLwithinv(3)(q21q26.2)ort(3;3) RPN1-EVI1AML-M7witht(1;22)(p13;q13) RBM15-MKL1?AMLwithmutatedNPM1?AMLwithmutatedCEBPA通常AML的诊断标准，原始细胞比例>20%，但如果t(8;21)、t(15;17)或inv(16)阳性，则不论原始细胞比例为多少，AML诊断成立MICMFAB形态学诊断(Morphology)免疫学检查(Immunology)细胞遗传学检查(Cytogenetics)分子遗传学检查(Molecular)MICM分型原则中各检测技术简介形态学：外周血涂片、骨髓涂片±骨髓活检免疫表型检测：多参数流式细胞仪细胞遗传学检测常规核型分析，分子核型分析FISH分子遗传学检测融合基因检测（RT-PCR）：PML-RARA、AML1-ETO、CBFB-MYH11、MLL-…、BCR-ABL……基因突变：FLT3-ITD、CEBPA、NPM1、TET2、IDH1、NOTCH1、IKZF1、FBXW7……拷贝数变化（CNV）:SNP-array高通量测序技术……病史形态学：结构：活检细胞学：涂片骨髓血凝块免疫分型：流式细胞或免疫组化细胞遗传学：核型分析、FISH分子遗传学：融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突变（测序）白血病MICM诊断程序及技术白血病诊断的任务—不仅仅是FAB分类是不是白血病？急性？慢性？系来源FAB分类预后分层治疗、疗效判断MRD

病史+形态形态+免疫形态+免疫+遗传+分子形态+免疫+遗传+分子为什么需要MICM综合诊断？

形态或病理或加细胞化学分析受观察者个体经验及分辨力的限制，一致率仅50-70%；在此基础上增加免疫组化和/或FCM分析大大增加了分型的准确率，可达90%以上；染色体、FISH及基因分析，进一步提高分型的准确率

MICM整合诊断的临床意义

全面正确诊断与分型评估预后确立检测MRD的标志，追踪MRD

帮助建立分层、个性化的治疗定期追踪帮助发现抗原丢失、克隆演变或突变帮助确定病因或发病机制MICM分型原则中各检测技术简介细胞形态及细胞化学分析的优缺点优点：

直观：镜下直接观察细胞形态，对MDS的诊断、一些少见的、大的恶性细胞的确定优于流式细胞分析恶性细胞的比例更准确：简单快速，有显微镜即可完成报告缺点：

人为因素影响大难以鉴别细胞的成熟阶段，B、T等系列的恶性细胞细胞较成熟时，难以鉴别良恶性不能提供太多的预后信息形态M病理及免疫组织化学的优缺点

标本直接固定，不容易损失信息，恶性细胞比例更客观，对一些抽不出或少见细胞，仍可诊断。如伴骨髓纤维化、MM、淋巴瘤、转移癌、组织细胞、巨噬细胞、树突细胞、何杰金细胞等可以直接观察到组织结构，容易确定恶性细胞的组织部位诊断慢、受诊断者个人经验及知识水平影响大对一些组织结构无破坏、细胞形态改变不大的细胞，难以鉴定良恶性及成熟度有些恶性细胞在液体中，难以获取组织标本，难以判断组织结构形态M流式细胞术流式IFCM检测的参数FSC:细胞大小

SSC:细胞内颗粒多少及细胞内构造的复杂性

FL：3-10多种（荧光素耦联的单克隆抗体）流式IR8：幼稚细胞群，正常骨髓中此群细胞数量极低或空缺流式I

流式细胞免疫分型的作用确定系来源原理：不同系有特定的抗原表达髓系/B系/T/NK系/组织细胞和树突状细胞确定细胞分化阶段不同发育阶段细胞，其抗原表达不同预后判断有些抗原表达和淋巴瘤/白血病预后相关治疗方法选择-治疗靶向疗效判断、复发监测诊断双表型、混合性，M0、未分化型等特殊类型白血病髓系分亚型与FAB分亚型有一定差异I：immunology,免疫学TypeofcellCDmarkersstemcellsCD34+,CD31-allleukocytegroupsCD45+GranulocyteCD45+,CD15+,CD24+,CD114+,CD182+MonocyteCD45+,CD14+,CD114+,CD11a,CD91+TlymphocyteCD45+,CD3+ThelpercellCD45+,CD3+,CD4+TregulatorycellCD4,CD25,andFoxp3CytotoxicTcellCD45+,CD3+,CD8+BlymphocyteCD45+,CD19+orCD45+,CD20+,CD24+ThrombocyteCD45+,CD61+NaturalkillercellCD16+,CD56+,CD3-,CD31,CD30

M0CD34,CD33,CD13M1MPO,CD34,CD33,CD13,HLA-DRM2MPO,CD34,CD15,CD13,HLA-DRM3MPO,CD33,CD13、CD9(HLA-DR、CD11b常阴性)

M4MPO,CD33,CD15,CD14,CD13

M5CD68,CD33,CD14,CD13,HLA-DR,CD36，CD64

M6CD33,CD235a,CD71

M7CD33,CD41,CD42b,CD61急性髓系白血病免疫表型与FAB分型相关性形态与免疫表型的符合性不足80%，不能脱离形态学单纯依赖免疫表型进行白血病的诊断与分型。FAB基于形态，两者不符以形态为主。流式I髓系MPO+（用FCM，免疫组织化学染色，细胞化学染色证实）或单核细胞（至少有以下标志中的2项阳性：NSE、CD11c、CD14、CD64、CD36*、溶酶体T细胞系cCD3+(用抗CD3ε链的单抗及FCM分析，不能用免疫组化的抗CD3ζ链多克隆来检测，因为后者不是T细胞特异性抗原)或sCD3+B细胞系CD19强阳性并同时有以下标志中的至少1项阳性：CD79a、cCD22、CD10或CD19弱阳性并同时有以下标志中的至少2项阳性：CD79a、cCD22、CD10混合性白血病的判定如有2系或以上的特异性标志，可诊断为急性混合性白血病流式IMRD流式细胞学检测肿瘤细胞与正常起源细胞免疫表型不同跨系表达抗原表达不同步抗原表达丢失抗原表达减弱其它抗原表达初始免疫分型结果、白血病相关表型特点抗体组合越多覆盖率越高、敏感性越高假阳性、假阴性均存在随访、动态观察更有意义流式IFCM的优缺点优点：一次可检测数万至数十万个细胞上的数十种标记，可同时检测每个细胞的六个以上参数，敏感性高，分析全面

更容易区分良恶性，恶性细胞的系列及成熟度可帮助确定免疫治疗的靶点并监测疗效，如CD20、CD19是监测MRD覆盖面最广的方法。快速、简便、重复性好缺点：不能确定组织结构，一些罕见的大细胞不能分析到，一些细胞粘附性高，难以抽出。因此对HL等难以确诊。判断恶性细胞的比例不如形态准确，对M6、MDS的诊断不如形态预后价值不如染色体和基因的检测流式I诊断误区举例原始细胞增多是诊断前体恶性血液病尤其AL的重要指标，但原始细胞应根据免疫学标志/基因/染色体证实为恶性造血前体细胞一些形态上的原始细胞可以是正常造血细胞（尤其见于儿童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化疗后或移植后）病例3儿童B-ALL,化疗3年后停药，来我院复查，骨髓涂片8%的幼稚细胞流式幼稚B淋巴细胞增生，未见异常表型病例4NK细胞白血病移植后40天，骨髓涂片8%的幼稚细胞流式:未见表型异常细胞，CD34阳性细胞为幼稚B淋巴细胞即染色体异常包括染色体的结构和数量异常根据这些特征性的异常，对恶性血液病进行诊断和分类、预后分层及指导治疗。细胞遗传学C1950196019701980199020002010确定染色体数目=46发现Ph；发现+21各种显带技术出现；发现多数AL患者伴有染色体异常FISH出现；阐明某些染色体异常的分子学改变SKYCGHPCR技术FLT3-ITD(1996)c-KIT突变（1993）…………..芯片技术：cDNAarray、SNP-array、测序技术的发展大量基因突变的发现：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1…………..新一代高通量测序技术；各种遗传学改变间的相互作用白血病遗传学研究的历史细胞遗传学C多数AML患者有非随机性染色体改变，包括易位、倒位、插入、缺失、扩增、等臂染色体等染色体异常在AML诊断、分型、预后评价、发病机制研究及靶向治疗药物研发方面有重要价值一些特殊的细胞遗传学异常在WHO分型建议中已被列为特殊亚型对不同细胞遗传学类型的血液肿瘤患者进行个体化治疗可以获得更好的疗效细胞遗传学CAML的WHO分型伴再现性遗传学异常的AML伴多系发育异常的AML

继发于MDS；无MDS病史治疗相关性AML烷化剂相关；拓扑异构酶抑制剂相关；其它无法分类的AML髓细胞肉瘤Down’s综合征相关AML细胞遗传学C伴再现性遗传学异常的AMLAMLwitht(8;21)(q22;q22)AMLwithinv(16)(p13.1q22)ort(16;16)APLwitht(15;17)(q22;q12)AMLwitht(9;11)(p22;q23)AMLwitht(6;9)(p23;q34)AMLwithinv(3)(q21q26.2)ort(3;3)AML-M7witht(1;22)(p13;q13)RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1?AMLwithmutatedNPM1?AMLwithmutatedCEBPA

通常AML的诊断标准，原始细胞比例为20%，但如果t(8;21)、t(15;17)

或inv(16)阳性，则不论原始细胞比例为多少，白血病诊断成立细胞遗传学C细胞遗传学C——染色体核型分析正常核型：男：46，XY女：46，XX异常核型：46，XY，t(8;21)(q22;q22)46，XX，t(15;17)(q22;q21.1)47,XY,del(6)(q15),+11,-15,add(17)(p13),+mar[16]……MICM分型原则中各检测技术简介标本采集细胞接种阻留中期分裂相收获细胞低渗、固定制片、染色染色体分离显带的步骤1.Collectionofspecimen5mlBonemarrowisnecessaryforpatientwithHematologicMalignancies

Peripheralbloodmaybeusewhenblastcellsaremorethan10%andthenumberofLeukocyteismorethan10×109/LHeparinannticoagulantofspecimenSpecimenmustbetreatedin24h标本采集2.Howtogetcellsinmetaphasedirectmethod

Cellculture50ng/mlColchicine

1h细胞接种阻留中期分裂相3.Howtoisolatechromosome?

0.075mol/LkclLowPermeability

Methanol:aceticacid(3:1)

Fixation

FISHChromosomeexamination收获细胞低渗、固定MountingTechniqueforStudyingCellChromosome

FixedcellsDiffusionFixationAging制片ChromosomeBandingtechnologyConceptionMethodofChromosomeBanding

GBandingtechnology

(EDTA-胰蛋白酶法)

R

Bandingtechnology

RoastsliceEDTA-trypsinGiemsastainingMountedsliceMountedsliceEarle’sliquidGiemsastaining显带、染色

G带

R带StructureandNomenclatureofchromosomebandRegion1Region2Region3pqStructureNomenclature缩写addaceCcencpdelderdicdminduphsriidemider:::意义不明来源的额外物质无着丝粒碎片体质性异常着丝粒混合性核型缺失衍生染色体双着丝粒染色体双微体重复均匀染色体等臂染色体同前的等臂衍生染色体断裂断裂后重接缩写idicinsinvmarmnrrobmlslsdlttac？/

意义等臂双着丝粒染色体插入易位倒位标记染色体众数环状染色体罗伯逊易位主系干系旁系易位端粒联合表示不确定用来分隔两个克隆多拷贝重排染色体GroupandKaryotypefornormalChromosomeFemale

:46，XXMale

:46，XYAbnormalChromosomeanddiseases

约55%的AML患者可检出克隆性染色体异常分子遗传学技术的进展使得多数AML患者检出基因水平的异常，如FLT3、CEBPα及NPM1基因的突变遗传学异常对于理解AML发病机制、建立新的诊断方法、研发治疗药物或指导临床治疗有重要的价值在WHO分型建议中，一些特殊的遗传学异常被列为诊断和分型的依据AML：50%~90%的患者细胞遗传学可检出异常克隆ALL：大约60%～85%的患者可检出克隆性染色体畸变细胞遗传学CAbnormalnumberAbnormalstructureAbnormalstructureofKaryotype：CongenitalandAcquired

CongenitalAcquiredDescriptionofAbnormalKaryotype

themodeofrecordingChromosome1p33.111号染色体短臂3区3带1亚带1DescriptionofKaryotype46,XX,t(8;21)(q22;q22)[20]AML常见染色体异常t(8;21)10%t(15;17)8%inv(16)/t(16;16)5-10%11q23异常3-5%30％45％20％5％单一异常：45%≥2种异常：55%-5/5q-；-7/7q-；＋8；-Y；+11；+13；+21;+223q26；del(9q)t(6;9)；t(9;22)等t(8;21)(q22;q22)见于约10%AML，形成8号染色体上的AML1-ETO融合基因CR率高，EFS长，预后相对较好20%-30%伴KIT突变，复发率增高，预后较差≥75%伴性染色体丢失及del(9q)等附加异常，伴性染色体丢失不影响预后，伴del(9q)提示预后不良AML-M2t(8;21)(q22;q22),9q-,-Yt(8;21)(q22;q22)模式图CommonabnormityofAMLchromosomet(15;17)(q22;q12)见于8-10%AML对全反式维甲酸敏感，生存期长分子生物学特征：易位形成PML/RARα融合基因，是APL特异性的分子生物学标志PML/RARα对APL诊断具有高度特异性，也是治疗的分子基础AML-M3+8,t(15;17)

AML-M3t(11;17)17q22(RARA)4q12FIP1L15q35NMP111q13NuMA115q22PML17q11STAT5b17q24PRKAR1A11q11PLZFATRA敏感ATRA耐药ATRA相对耐药对ATRA敏感性未定

CMLt(9;22)(q34;q11)inv(16)(p13;q22)/t(16;16)(p13;q22)见于约5%AML、20%AML-M4及100%AML-M4Eo遗传学特点：因16号染色体较小及带型的限制，常规核型分析容易漏诊有典型形态学改变及常见继发性异常的患者须行FISH或PCR检测CBFβ/MYH11融合基因常伴继发性异常：+8，+21，+22约30%患者亦存在KIT突变，复发率增高、预后欠佳化疗敏感，预后相对好，易发生CNSLAML-M4Eo骨髓象AML-M4Eo+8,inv(16)FISH检测inv(16)inv(16)模式图一些染色体有诊断价值:如重现性染色体异常，如t(8;21)，inv(16)、t（16；16）、

t(15;17)（q22;q12），t(5;14)(q31;q32)，t(3;3),t(4;11)可直接诊断急性白血病；一些染色体和/或基因有辅助诊断价值，如5q31、CEP7、7q31、CEP8、20q、CEPY、P53高度疑似MDS等；

有-7、5q-、t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、复杂染色体等的急性白血病预后不好染色体的诊断价值细胞遗传学C有丝分裂相少或缺如染色体质量低劣，显带不佳染色体异常复杂如果恶性细胞不分裂，其结果是假阴性由于分析的细胞少，有部分白血病患者无染色体异常，监测残留白血病不敏感白血病染色体分析存在的问题：细胞遗传学C荧光原位杂交（FISH）利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记后与靶DNA进行杂交，最后在荧光显微镜下观察杂交信号，从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析细胞遗传学C荧光原位杂交(FISH)生命科学中的“钓鱼”技术原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交目的：获得细胞内多条染色体或多种基因状态的信息

荧光标记探针探针变性样本DNA变性杂交荧光原位杂交（Fluorescenceinsituhybridization,FISH）细胞遗传学C细胞遗传学C——荧光原位杂交（FISH）探针类型双色单融合（DualColor,SingleFusion）双色双融合（DualColor,DualFusion）双色分离（DualColor,BreakApart）额外信号（ExtraSignal）建议与染色体核型分析同时送检细胞遗传学C双色单融合示意图细胞遗传学C细胞遗传学CFISH检测BCR/ABL融合基因BCR/ABL基因正常BCR/ABL基因融合9号22号双色单融合探针，检测染色体易位ablbcr细胞遗传学CBCR/ABL双色双融合探针细胞遗传学CBCR/ABL额外信号探针RoleofSexChromosomeinALLO-BMT(异基因骨髓移植)X，XX，Y细胞遗传学C有独立的诊断及预后价值可以检测出显微镜下人眼难以分辨的染色体异常诊断时间比染色体短与染色体分析比较，对诊断人员的经验依赖程度低对不分裂的细胞也可以分析，分析的细胞数量比染色体多，更能反映正常和恶性细胞的比例，监测残留白血病比染色体敏感可以对既往的骨髓片回顾分析，进一步明确或排除诊断探针昂贵，每次只能分析1-2种异常，只能分析已知的染色体或基因异常FISH的优缺点细胞遗传学CFISH检测可以弥补染色体不足，染色体检测为阴性，FISH可能为阳性。细胞遗传学C1）染色体是独立的预后指标并有助与治疗方案的选择

与急白预后相关的细胞遗传学亚型预后等级

核型AMLALL低危t(8;21)、t(15;17)、inv(16)正常核型、+8、+21、+22、11q23>50的超二倍体、t(12;21)中危异常、del(9q)、del(12p)、-y正常核型、6q-、t(10;14)、t(11;14)高危-5、-7、del(5q)、3q重排、复杂异常（≥3种异常）t(9;22)、t(8;14)、t(4;11)、亚二倍体/近单倍体细胞遗传学C2）鉴别白血病微小残留病灶

(minimalresidualleukemia，MRL)白血病化疗或骨髓移植后达到完全缓解体内残存微量白血病细胞106-108检测到原已消失的克隆性染色体异常和(或)新的克隆性染色体异常时，往往预示疾病将复发3)在骨髓增生异常综合征(MDS)中的应用

积分值21.510.50染色体核型好（正常，-y，5q-，20q-）中间（其他异常）

预后不佳（-7，或复杂染色体异常）

国际预后积分系统（IPSS）4)在淋巴瘤中的应用5）在其他血液病中的应用真性红细胞增多症（PV）常见的染色体异常有del(2v)(q11)，+8和+9，可见于PV病程的始末。原发性骨髓纤维化常见的染色体异常为-7，-9，+8，+2或lq、13q等结构异常。在多发性骨髓瘤（MM)中的应用预后不良预后中等预后良好

del(17p13)、

1q21复制、t(4;14)、t(14;16)

del(13q14)只有t(11;14)、＋6，＋9，＋17或没有细胞遗传学异常TheroleofchromosomeinDiseaseMonitoring2×Ph，+8，i（17q）

noAbnormalchromosomerecurrenceCMLinblasticphase:

6）新的异常染色体的出现常提示复发有独立的诊断及预后价值可以检测出染色体或FISH不能检测出的异常，联合染色体和FISH，增加了对疾病预后的判断能力。诊断时间比染色体及FISH短与染色体及FISH分析比较，对检测人员的经验依赖程度低

是最敏感的监测残留白血病的指标对试验设计、试验质控要求高对无基因异常的疾病难以诊断疾病是复杂的，仅有基因异常未必完全决定预后基因检测的优缺点分子生物学MDohner,H.etal.Blood2010;115:453-474在AML中,基因突变与细胞遗传学异常一样普遍AML基因突变分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M凝胶电泳检测定性检测定量检测RQ-PCR检测分子生物学M分子生物学M——融合基因BCR/ABL：t(9;22)(q34;q11)PML/RARα：t(15;17)(q22;q21)AML1/ETO：t(8;21)(q22;q22)TEL/AML1：t(12;21)(p13;q22)E2A/PBX1：t(1;19)(q23;p13)……分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M血液病分子诊断的意义补充MIC检查的不足检测相关微小残留病灶（MRD）发现新的亚型研究各类血液病发病机制分子生物学M31种白血病融合基因(122种变异体)筛查1.AML1/EAP(1)2.AML1/ETO(1)3.AML1/MDS1(2)4.BCR/ABL(4)5.CBFβ/MYH11(8)6.DEK/CAN(1)7.dupMLL(5)8.E2A/HLF(3)9.E2A/PBX1(2)10.FIP1L1/PDGFRα(4)11.MLL/AF10(18)12.MLL/AF17(1)13.MLL/AF1p(4)14.MLL/AF1q(4)15.MLL/AF4(12)16.MLL/AF6(4)17.MLL/AF9(8)18.MLL/AFX(4)19.MLL/ELL(8)20.MLL/ENL(4)21.NPM/ALK(1)22.NPM/MLF1(1)23.NPM/RARα(2)24.PLZF/RARα(2)25.PML/RARα(5)26.SET/CAN(1)27.SIL/TAL1(1)28.TEL/ABL(2)29.TEL/AML1(2)30.TEL/PDGFR(1)31.TLS/ERG(5)分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学M分子生物学MFLT3ITD–NPM1+预后较好FLT3ITD+NPM1+或FLT3ITD–NPM1–预后中等FLT3ITD+NPM1–预后较差急髓相关突变检测CEBPA基因位于19q13.11，CCAAT盒/增强子结合蛋白，粒细胞分化过程中起重要作用，预后良好c-KIT基因位于4q11-21，t(8;21)和inv(16)伴c-KIT突变在AML预后危险分级中由“低危”升级为“中危”N-Ras为Ras基因家族成员之一，见于10%左右的M4、M5、M6，该突变预后意义尚不明FLT3-TKD，Fms样酪氨酸激酶3-TK区域点突变，13q12，预后不良分子生物学MAML患者常见基因突变和异常表达的预后意义分子生物学M骨髓增殖性肿瘤检测项目检测平台检测意义JAK2V617F突变荧光PCR90%以上PV以及50%ET/PMF有JAK2V617F突变，鉴别诊断JAK2539-544突变测序少数PV患者有JAK2539-544突变MPLW515K/L突变测序少数ET/PMF患者有MPL突变BCR/ABLP210定量BCR/ABLP230定量定量PCR区分CML和MPNFIP1L1/PDGFRα定量定量PCR见于嗜酸性粒细胞增多综合征，判断TKI治疗效果31种融合基因筛查多重PCR适合临床情况不明的患者分子生物学M骨髓增生异常综合征NCCN提及的MDS分子检测项目TET2突变，见于20%MDS，预后较好ASXL1突变，见于15%MDS，预后较差RUNX1突变、EZH2突变、ETV6突变，预后较差CBL突变、IDH2突变、U2AF1/U2AF35突变、SF3B1突变SRSF2突变、ZRSR2突变，预后较差，增加白血病转化率分子生物学M分子生物学M分子生物学MMRD主要检测方法比较方法覆盖范围敏感度备注实时定量PCR30-40%10-5-10-6只能针对特定的融合基因或基因突变流式细胞术微小残留检测大于90%10-3-10-4不适用于CMPDFISH30%10-3需要特定的染色体或基因异常，且有相应探针染色体核型分析50%10-2需要培养细胞到分裂中期报告时间较长血液肿瘤初诊检测方案建议

MICM整合报告AL——系别不清形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析分子生物学——白血病31种常见融合基因通筛血液肿瘤初诊检测方案建议-AL25个以上抗原，包括粒系、单核系、T系、B系、非系列特异性、干细胞（原始细胞）相关以及其他细胞等各种标志；除可以进行系别鉴定、亚型判断外，还可进行一定的预后评估。FAB分类CD13CD33CD11bCD14HLA-DRCD34CD117MPOM0++/---++++M1++-/+-++++M2++--++/-++M3++----++M4+++++/-+/-++M5a+++/-+/-+/-+-/+M5b+++++-/+M6+/-+/-+或--+/--+M7-+/---++?-可以宏观、全面地检查细胞内所有染色体的各种异常，但对于一些微小异常或隐匿性易位以及低含量的异常难以查出。此外，由于标本本身等各种原因的影响，会有一定比例的无分裂相出现。建议必要时配合行FISH检测。诊断相关类：AML1/ETO：多见于M2，少见于M4和M1；M2b中最多RARα相关融合基因：M3PML/RARαPLZF/RARαNPM/RARαCBFβ/MYH11：M4Eo用药相关类：BCR/ABL：格列卫PML/RARα：全反式维甲酸（ATRA）NPM/RARα：全反式维甲酸（ATRA）AML1/ETO：大剂量的阿糖胞苷CBFβ/MYH11：大剂量的阿糖胞苷ALL——T、B等不清骨髓形态学流式细胞术免疫分型细胞遗传学检测基因诊断——急淋15种常见融合基因筛查或者融合基因BCR/ABL、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL/AF4定量检测血液肿瘤初诊检测方案建议-ALL流式细胞术免疫分型：T系：CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3、TCRαβ、TCRγδ等B系：CD10、CD19、CD20、CD22、cIgM、cCD79a等NK系：CD16、CD56、CD57等ALL-FISH套系：t(9;22)：预后极差11q23重排：预后差t(12;21)：预后好+4：预后好+10：预后好ALL融合基因（建议查定量，但个别基因未开展定量检测）：BCR/ABL：预后极差E2A/PBX1：常见于B-ALL，预后不良TEL/AML1：预后较好MLL/AF4：预后不良1p32染色体内微缺失SIL/TAL1：常见于T-ALL淋巴瘤白血病形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析/FISH套系基因诊断——TCR基因重排/IgH基因重排/t(11;14)bcl-1-JH融合基因定性/t(14;18)bcl-2-JH融合基因定性血液肿瘤初诊检测方案建议-淋巴瘤白血病CLL-FISH探针：ATM：缺失则中位生存期7-9个月P53：缺失中位生存期为32个月RB1：缺失则中位生存期133个月13q14：缺失则中位生存期133个月D13S2512cen正常FISH组合结果中位生存期111个月淋巴瘤FISH探针：Bcl-2重排t(8;14)：Burkitt’s淋巴瘤t(11;14)：套细胞淋巴瘤Bcl-6重排：弥漫大B淋巴瘤t(11;18)：结外边缘带淋巴瘤t(14;18)：滤泡型淋巴瘤、弥漫大B淋巴瘤IgH重排MDS骨髓形态学流式细胞术免疫分型骨髓染色体核型分析基因诊断——WT1基因定量、血液肿瘤初诊检测方案建议-MDSMDS-FISH探针套系：20q-：预后好+8：预后中等-7/7q-：预后差-5/5q-：单独则预后好，伴其他则预后差-Y：预后好CMPD是一组造血干细胞异常增殖性疾病，在髓细胞普遍增生的基础上有某个系列细胞尤其突出，呈现持续不断地过度增殖，临床上常有肝脾大，尤其以脾大多见，病程缓慢。主要介绍：真性红细胞增多症（PV）原发性血小板增多症（ET）原发性骨髓纤维化（PMF）慢性粒细胞白血病（CML）血液肿瘤初诊检测方案