病原生物与免疫学实验教材 实验四NK2014冬,20141229(407)教学课件_第1页
病原生物与免疫学实验教材 实验四NK2014冬,20141229(407)教学课件_第2页
病原生物与免疫学实验教材 实验四NK2014冬,20141229(407)教学课件_第3页
病原生物与免疫学实验教材 实验四NK2014冬,20141229(407)教学课件_第4页
病原生物与免疫学实验教材 实验四NK2014冬,20141229(407)教学课件_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验四MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性（MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性）原理：1.制备小鼠脾细胞（含NK细胞）2.NK细胞与肿瘤细胞（YAC-1）共孵育，NK活性越强，肿瘤细胞被杀死越多。3.MTT底物可被活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶还原成蓝紫色产物，死细胞无此功能；活细胞越多，颜色越深；据此推断活细胞或死细胞多少。4.经酶标仪比色后，可计算出NK细胞活性。主要方法：（一）免疫细胞（小鼠脾NK细胞）的制备（二）NK细胞活性测定（MTT比色法）MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性[方法]：1、靶细胞制备YAC-1细胞，洗涤，计数，调整至2×105/ml（已制备好，用前摇匀）2、效应细胞（脾NK细胞）制备处死小鼠，消毒取脾，制成脾细胞悬液，过滤，离心洗涤，计数，调整细胞浓度至2×106/ml。（具体操作如下）2、效应细胞（脾NK细胞）制备（1）脱颈椎处死小鼠，放入中号平皿；（2）酒精棉球消毒，无菌取出脾脏，放入小平皿；（3）脾脏用Hanks液冲洗一次；（4）轻轻拉碎脾脏，并悬浮于约3mlHanks液中；稍倾斜静置5分钟，使大块组织沉降；（5）吸上清过120目或200目滤网，滤液滤入试管；（6）滤液1500转/min离心5min，倒去上清；

（7）脾细胞沉淀用Hanks液洗2次（加入3mlHanks液，混匀，1500r/min，离心5min，倒去上清；重复上述步骤1次）；（8）用1ml1640培养液溶解脾细胞沉淀，混匀，配成脾细胞悬液（原液），计数（吸取10ul加入390ul白细胞稀释液中，稀释40倍，用血球计数板在显微镜下计数），根据P53页公式计算脾细胞悬液原液中脾细胞浓度；（9）吸取一定量脾细胞悬液原液，用1640培养液配制2×106/ml浓度的脾细胞悬液1毫升至2毫升，待用。3、细胞毒试验按表7-3加样，

4、孵育二氧化碳培养箱孵育2小时；加MTT，继续孵育2小时。5、测OD值轻轻吸弃上清，加二甲亚砜150ul，振荡10min，测OD值。6、结果分析

表7-3MTT法测NK细胞活性试验各组成分(3复孔/组)实验组靶细胞对照组效应细胞对照组空白对照靶细胞100ul100ul————效应细胞100ul——100ul——1640培养基——100ul100ul200ul（1-实验组OD值-效应细胞对照组OD值靶细胞对照组OD值）×100%NK细胞活性（%）=（1-实验组OD值-效应细胞对照组OD值靶细胞对照组OD值）×100%NK细胞活性（%）=附：

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论