12综合实训配套奶粉中环丙沙星兽药残留检测

奶粉中环丙沙星兽药残留检测农产品质量安全检测技术

综合实训1实训背景、目的1材料、仪器与设备2实训任务3实训考核4目录页CONTENTSPAGE实训背景、目的我国绝大多数的动物在其一生中或多或少的均使用过兽药抗生素，而残留在动物性食品中的兽药抗生素，将随着食物链进入人体，对人类的健康构成潜在的威胁。为了确保食品安全和国民身体健康，促进畜禽产品的发展，本实训项目参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1751.3-2011对市售奶粉进行环丙沙星兽药残留检测。1.实训背景2.实训目的实训背景、目的巩固高效液相色谱仪器使用；全面熟悉动物源性食品中兽药残留检测要求与方法；熟悉样品预处理、检测和数据处理各环节关键操作；能独立运用高效液相色谱技术对食品进行兽药残留检测实训目的1.实训背景2.实训目的材料、仪器与设备材料（每小组）：新鲜市售牛肉仪器设备：高效液相色谱仪（配荧光检测器）托盘天平（感量0.01g）分析天平（感量0.00001g）漩涡振荡器、组织匀浆机离心机、30mL匀浆杯50mL离心管固相萃取柱（C18，100mg/mL）微孔滤膜（0.45μm）实训任务试剂配制样品预处理样品检测数据处理过渡页TRANSITIONPAGE任务一：试剂配制请参照实训指导，完成下列试剂的配制。（1）5.0mol/L氢氧化钠溶液（2）乙腈饱和正己烷溶液（3）洗脱液和定溶液（4）磷酸盐缓冲溶液（5）环丙沙星标准储备液（6）环丙沙星标准工作液任务二：样品预处理1、试样制备从原始样品取出有代表性样品约500g，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。任务二：样品预处理2、样品提取称取约2g（精确至0.01g）均质后的试样于50mL离心管中。加入20mL样品提取液，振荡提取20min后，10000r/min，离心10min，取上清液10mL于50mL分液漏斗中。30mL乙腈饱和正己烷分三次液-液分配除脂，振荡5min，静置后收集下层。任务二：样品预处理3、样品净化——C18固相萃取柱净化C18固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水预淋洗后，转入10mL提取液。用5mL水进行淋洗，弃去。用5mL洗脱液1进行洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在50℃下用氮气吹至约1mL后加入9mL磷酸盐缓冲液，涡旋混匀1min，超声波助溶1min，待过MAX固相萃取柱。任务二：样品预处理3、样品净化——MAX固相萃取柱净化MAX固相萃取柱依次用2mL甲醇、2mL5mol/L的氢氧化钠溶液、2mL水预淋洗后，转入磷酸盐缓冲液溶解液。依次用2mL25%氨水、2mL甲醇进行淋洗，弃去。用5mL洗脱液2进行洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在50℃下用氮气吹干。用定容液定容至1mL，涡旋混匀1min后，超声波助溶1min，过0.2μm微孔滤膜，供仪器检测。任务三：样品检测1、色谱条件色谱柱：C18250mm4.6mm(i.d)，粒径5μm，或相当者；流动相：A：乙腈，B：0.02mol/L磷酸溶液任务三：样品检测1、色谱条件流速：1.0mL/min检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；柱温：40℃进样量：10μL任务三：样品检测2、测定方法根据样液中待测喹诺酮药物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中喹诺酮药物的响应值应在仪器检测的线性范围内（0.4ng/mL-5μg/mL）。对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，环丙沙星保留时间约为21.1min。在上述色谱条件下，对照溶液和试样溶液的高效液相色谱图分别见附录A中图A.1、图A.2。任务三：样品检测2、测定方法任务四：数据处理1、抗生素的质量分数X——试料中抗生素的质量分数，单位为纳克每克（ng/g）；A——试样溶液中抗生素的峰面积；AS——对照溶液中抗生素的峰面积；CS——对照溶液中抗生素的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸盐缓冲液的总体积，单位为毫升（mL）；V2——过固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升（mL）；V3——洗脱用流动相体积，单位为毫升（mL）；M——供试试料的质量，单位为克（g）。注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，平均值保留三位有效数字。任务四：数据处理2、加标回收率P——加标回收率，（%）；m——每个加标样，经预处理以后所剩余抗生素的总质量，单位为纳克（ng）；m0——空白样中抗生素的总质量，单位为纳克（ng）；ms——所加标准样中抗生素的总质量，单位为纳克（ng）。数据结果保留至小数点后2位。任务四：数据处理3、RSD值

——三个平行加标样中抗生素质量分数平均值，单位为纳克每克（ng/g）；n——平行样品个数，为3；xi——每个平行样品加标样中抗生素质量分数，单位为纳克每克（ng/g）。数据结果保留至小数点后2位。实训考核任务1实验准备-