标准解读

《NY/T 678-2003 猪伪狂犬病免疫酶试验方法》是一项针对猪伪狂犬病（Aujeszky's disease）检测的标准，由中华人民共和国农业部发布。该标准详细描述了如何使用免疫酶技术来检测猪血清中的伪狂犬病毒抗体或抗原，适用于疾病监测、疫苗效果评估以及流行病学研究等领域。

根据此标准，试验主要基于酶联免疫吸附测定(ELISA)原理进行，这是一种高灵敏度和特异性的生物化学分析方法。整个过程包括样品准备、包被板制备、加样与孵育、清洗、显色反应及结果判读几个步骤。其中，关键试剂如包被有特定抗原或抗体的微孔板、标记酶结合物、底物溶液等的选择与正确使用对于保证测试准确性至关重要。

在操作过程中需要注意的是，所有涉及的实验室设备都必须经过校准并处于良好工作状态；同时，为了确保数据可靠性和重复性，实验室内应建立严格的质量控制体系，并定期参加外部质量评价活动以验证自身检测能力。此外，工作人员需接受专业培训，熟悉相关理论知识和技术规范，严格按照SOP执行每一步骤。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2003-07-30 颁布
  • 2003-10-01 实施
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文档简介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中华人民共和国农业行业标准

犖犢／犜６７８—２００３

猪伪狂犬病免疫酶试验方法

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２００３０７３０发布２００３１００１实施

中华人民共和国农业部发布

书

犖犢／犜６７８—２００３

前言

本标准的附录Ａ是规范性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。

本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。

本标准主要起草人：王宏伟、吴清民、童光志、田克恭、陈西钊、苏敬良、王传彬。

Ⅰ

书

犖犢／犜６７８—２００３

猪伪狂犬病免疫酶试验方法

１范围

本标准规定了猪伪狂犬病Ｅ糖蛋白（ｇＥ，即ｇｐⅠ）酶联免疫吸附试验和免疫酶组织化学试验方法。

本标准适用于检测猪血清中的猪伪狂犬病病毒ｇＥ特异性抗体和组织中的猪伪狂犬病病毒抗原。

２犈糖蛋白酶联免疫吸附试验（犵犈犈犔犐犛犃）

２．１材料准备

２．１．１试剂

ａ）ＥＬＩＳＡ抗原包被板；

ｂ）标准阳性血清：伪狂犬病病毒ｇＥ单克隆抗体；

ｃ）标准阴性血清：无伪狂犬病病毒ｇＥ抗体的猪血清；

ｄ）酶结合物：辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的抗伪狂犬病病毒ｇＥ单克隆抗体；

ｅ）磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）：配制见第Ａ．１章；

ｆ）洗涤液：配制见第Ａ．２章；

ｇ）样品稀释液：配制见第Ａ．３章；

ｈ）底物溶液：配制见第Ａ．５章；

ｉ）终止液：配制见第Ａ．６章。

２．１．２器材

ａ）酶联检测仪；

ｂ）微量加样器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｃ）３７℃恒温培养箱。

２．１．３样品

采集被检猪血液，分离血清，血清应新鲜、透明、不溶血、无污染，密装于灭菌小瓶内，４℃或－３０℃保

存或立即送检。试验前将被检血清统一编号，并用样品稀释液作２倍稀释。

２．２操作方法

２．２．１取出包被板，并将样品位置准确记录在记录单上。

２．２．２向Ａ１、Ａ２、Ａ３孔中分别加入１００μＬ未经稀释的阴性对照血清，Ａ４、Ａ５、Ａ６孔中分别加入

１００μＬ未经稀释的阳性对照血清，其他各孔加入１００μＬ稀释好的待检样品。

２．２．３置室温１ｈ。

２．２．４弃去孔内液体，再在纱布或吸水纸上拍干。

２．２．５用洗涤液将反应板洗涤（３～５）次，每次洗涤后均弃去孔内液体。最后一次洗涤后，除净孔内液

体，拍干。

２．２．６每孔加入１００μＬ酶结合物溶液，室温下作用２０ｍｉｎ。

２．２．７重复２．２．４和２．２．５。

２．２．８各孔加入１００μＬ底物液。

２．２．９室温放置１５ｍｉｎ。

２．２．１０各孔加入５０μＬ终止液，立即用酶标仪于６５０ｎ

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