仪器分析紫外-可见分光光度法2课件

第二节紫外-可见分光光度计光源吸收池检测器讯号处理与显示器一、主要部件可见光源紫外光源氢灯或氘灯>300nm150~400nm1．光源钨灯或卤钨灯具有连续光谱2．单色器色散元件准直镜（聚光镜）狭缝将复合光色散成单色光棱镜光栅准直镜将进入单色器的发散光变成平行光，又作聚光镜，将色散后的平行单色光聚集于出口狭缝。光栅狭缝入射狭缝—使光线成为一细长条照射到准直镜出射狭缝—使需要的单色光投射到溶液中过宽，单色光不纯，可使A改变过窄，光通量小，灵敏度降低3．吸收池盛放试液可见光区玻璃紫外区石英匹配：T

=0.2%~0.5%光电管放大器指示器阴极（光敏）阳极紫敏光电管200~625nm红敏625~1000nmR光电倍增管阴极阳极挡板共9个倍增极光二极管阵列检测器例：二极管阵列，在190~820nm，由316个二极管组成，即2nm一个二极管。在1/10秒内即可获得全光谱图。样品光源光栅二极管阵列（一）光路类型单光束分光光度计检测器数据处理显示样品光源单色器参比二、分光光度计的光学性能与类型双光束分光光度计光源单色器样品参比检测器同步切光器（旋转扇面镜）（二）光学性能波长范围195~820nm波长准确度≤0.5nm波长重现性≤0.5nm透光率测量范围0~150%（T）吸光度测量范围-0.1730~+2.00（A）光度准确度T满量程误差≤0.5%光度重复性≤0.5%分辨率=0.3(260nm处)杂散光220nm处NaI(1%g/ml)≤0.5%吸光度的校正K2Cr2O7溶液：0.0400gK2Cr2O7溶于1L0.05mol/L的KOH溶液中比色皿厚度为1cm温度为250C测定不同波长下的吸光度

吸收池的校正（配对）a样品b参比A1=A样-A参1.2.a参比b样品A2=A样-A参要求：A=

A1-A2<1%第三节、紫外可见分光光度分析方法①对比吸收光谱特征数据max

吸收系数较大灵敏度高

或E1cm1%不同吸收基团（相同吸收基团）的不同化合物，可有相同的max，但分子量（M）却很难相同。=10/M

=M/10例如3位酮体4位烯键的甾体类化合物在240nm处都有吸收峰A240nm安宫黄体酮炔诺酮=408=571②对比吸收度或吸收系数的比值1处A1=E1Cl2处A2=E2ClA1A2=E1E2如VB12的鉴别，中国药典规定：A361A278=1.70~1.88A361A550=3.15~3.45AAA醋酸泼尼松醋酸氢化可的松醋酸可的松用紫外吸收光谱进行定性时需注意：当两种纯化合物的吸收光谱有明显差别时，可以肯定是两个不同的化合物，而两吸收光谱相同时，不能肯定是同一化合物。2．杂质限量检查药物中杂质，常需制定一个允许其存在的限量。肾上腺素肾上腺酮例如：A310nm在310nm处肾上腺酮有较强吸收肾上腺素吸收很小为控制肾上腺素中肾上腺酮的量，产品用紫外吸收光度法测定时，要求A<0.05。根据A=ECl当A=0.05时C=AEl=0.054351=0.00012g/100ml产品溶液：2mg/ml=0.2g/100ml杂质含量：C杂质C产品100%=0.000120.2100%=0.06%2．杂质限量检查有时用A峰/A谷来控制杂质限量例：碘磷定

max=294nm杂质无吸收

min=262nm杂质有吸收碘磷定纯品：A294A262=3.39若有杂质A262A294A262三、单组分的定量方法（一）吸光系数法配制溶液在一定时测A或T%根据A=-lgT=ECl进行计算求出含量可查手册选择的原则：1.选吸收峰max处2.避免干扰3.不选末端吸收处提高灵敏度许多溶剂在短波长处有吸收。溶剂的极限波长组分的测定波长必须大于溶剂的截止波长例：VB12样品25.0mg用水溶成1000ml后，盛于1cm吸收池中，在361nm处测得吸收度为0.507，已知E值是207，计算其百分含量。解：C测=A/El=0.507/207=0.00245C样=25.0mg/ml=0.0025g/100ml

VB12(%)=C测/C样100%=0.00245/0.0025100%=98.00%（二）标准曲线法ACAxCx对同一台仪器，在相同条件下：A=KC不再是物质的常数，随不同仪器而不同。（三）对照法相同条件下配制标准溶液和样品溶液，相同的选定波长处测定：A标=EC标lA样=EC样lA标EC标l

=A样EC样lA标C标

=A样C样C标A样C样=A标四、多组分的定量方法解联立方程组双波长法

等吸收双波长法系数倍率法导数光谱法双波长法（等吸收双波长消去法）A1xA2x=Axy12选择1、

2使：1处：A1=A1yA1x+2处：A2yA2x+A2=A=A2-A1=A2)y(A2x+A1)y(A1x+-A1yA2y-==E1)

y(E2y-Cyl系数倍率法有时不容易从两组分的吸收光谱中找到合适的等吸收点。AA系数倍率法选择1、

2K=E2xE1x=令：A=KA2-A1

A12A=KA2-A1=A2)yK(A2x+A1)y(A1x+-=(KA1)

yA2y-+(KA1)

xA2x-A2xA1x=0E1)

y=(KE2y-Cylxy导数光谱法如果将一个吸收光谱写成一个波长的函数：

A=Cf()它的导函数的图像就是导数光谱。A（）i=Ai+1-Aii+1-i1.导数光谱的波形和特点：零阶一阶二阶三阶四阶导数阶数，峰数，峰形更锐，分辨能力。峰位：在奇数阶光谱中为0，在偶数阶光谱中为极值。拐点：在偶数阶光谱中为0，在奇数阶光谱中为极值。2.导数光谱对干扰吸收的消除若能把干扰吸收表达为一个幂函数：A干=a0+a1+a22+a33

+…+ann待测组分吸收U与干扰组分共存时：A=a0

+a1+a22+a33+…+ann+

UA’=a1

+2a2+3a32+…+nan

n-1+

U’An+1’=

Un+1’例：组分阶次比干扰阶次高时可消除干扰3.导数光谱的