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文档简介
培养基适用性验证
大肠埃希菌金黄色葡萄球菌(枯草芽孢杆菌
(Bacillussubtilis)
白色念珠菌(Candidaalbicans)
黑曲霉(Aspergillusniger)
备料单(菌落计数)一、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌营养琼脂培养基200ml、*30.9%无菌氯化钠溶液100ml*3平皿10套*31ml移液管9支*3、10ml移液管2支*3试管7支*3二、白色念珠菌、黑曲霉玫瑰红钠200ml、*20.9%无菌氯化钠溶液100ml*2平皿10套*21ml移液管9支*3、10ml移液管2支*2试管7支*2菌液制备1)金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,30℃、159r/min摇床培养24h做①代,上述培养物24h后接1ml至新鲜营养肉汤培养基中30℃、159r/min摇床培养24h做②代4)白色念珠菌菌液的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基,30℃150r/min培养24小时,做①代,上述培养物24h后接1ml至新鲜改良马丁培养基中30℃、159r/min摇床培养24h做②代5)黑曲霉菌液的制备接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁培养基上,30℃、150\min培养2天4.2适用性检查4.2.1试验步骤a.菌液制备:按稀释度10-5,10-6,10-7等依次类推稀释菌悬液,接种培养后取50~100cfu计数。接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上;至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35℃,培养18~24小时;接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上25~28℃,培养24~48小时,上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100CFU的菌悬液,备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上,23~28℃,培养5~7天,加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能通过滤菌丝的无菌巴氏吸管)至无菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。菌液制备后在室温2h内使用,在2~8℃可再24h内使用。b.适用性检查:接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌各50-100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾入营养琼脂培养基,每株试验菌平行制备3个平皿,混匀,凝固,置30~35℃培养48h,计数;取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu,分别注入无菌平皿中,立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基,每株试验菌平行制备3个平皿,混匀,凝固,置23~28℃培养72h,计数。同时,用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。结果判定:若被检培养基上得菌落平均数不小于对照培养基上得菌落平均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上得菌落一致,判改培养基的适用性检查符合规定。4.2.2验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计算个试验菌每次试验的回收率。a.平皿法计数时,取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50~100cfu试验菌,分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌数。薄膜过率法计数时,取规定量试验可能用的最低稀释剂供试液,过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中加入50~100cfu试验菌,过滤,按薄膜过滤法测定其菌数。b.菌液组
测定所加的试验菌数。
c.供试品对照组取规定量的供试液,按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
d.稀释剂对照组
若供试液制备需要分散、乳化,中和、离心或薄膜过滤等待处理时,应增加稀释剂对照组,以考察供试液替代供试验品,加入试验菌,使最终菌浓度为每1ml供试液含50~100cfu,按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。
表1微生物验证方法组数加样加样量(mL)回收率(%)是否合格试验组供试液+菌液1菌液组菌液供试品对照组供试液稀释剂对照组稀释液+菌液e.结果判断
在3次独立的平行试验中。稀释剂对照组的平均菌落数稀释剂对照的菌回收率= ×100%菌液组的平均菌落数试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数时间阴性对照结论金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌菌种类型培养基培养条件温度铜绿假单胞白色念珠菌黑曲霉检验人复核人日期备注:2:培养基适用性
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