饱食、饥饿、肾上腺素、胰岛素对肝糖原含量的影响

饱食、饥饿、肾上腺素、胰岛素对肝糖原含量的影响组号：34成员：王阵华、王振国、王瑶实验目的1、实验验证影响肝糖原含量的几种因素2、学习肝糖原的定量测定方法实验原理

肝脏是哺乳动物调节血糖浓度的重要器官，对血糖浓度变化很敏感。当动物饱食后，为防止血糖浓度过高，肝糖原合成增强，储备糖；饥饿时为防止血糖浓度下降，肝糖原分解，释出葡萄糖。血糖浓度的恒定受激素信号的调节控制，如肾上腺素和胰岛素是作用相互抗拮的两种激素，通过一系列酶促机制，调节血糖，影响肝糖原的含量：肾上腺素加速糖原分解，使血糖水平升高；胰岛素则促进糖原合成，是体内唯一降低血糖浓度的激素。糖原是一种高分子化合物，微溶于水，无还原性。提取肝糖原时利用三氯乙酸破坏肝组织中的酶，使肝组织中的蛋白质沉淀，而糖原仍留在溶液中。加热时，糖原被酸水解为葡萄糖。蒽酮试剂中的浓硫酸可使糖原水解的葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，后者和蒽酮作用形成的蓝绿色物质在620nm处有最大吸收值，可与同法处理的葡萄糖标准比色液进行肝糖原含量的测定。实验器材与试剂器材：可见分光光度计、玻璃匀浆器、注射器、50ml容量瓶、移液器、刻度移液管、剪刀、镊子、小漏斗、滤纸、解剖盘、小白鼠（成年，30g左右）试剂：5%（m/v)三氯乙酸溶液0.9（m/v）生理盐水葡萄糖标准液（含纯葡萄糖0.1mg/ml)

肾上腺素：

（将0.1%（m/v）肾上腺素注射液用生理盐水准确稀释50倍，使其浓度为20微克每毫升胰岛素：将市售胰岛素用生理盐水稀释至0.1U/ml蒽酮试剂：取蒽酮2g，溶于1000ml80%（V/V）硫酸中，当日配制使用实验步骤1.处理动物将成年小白鼠（30g左右）分为4组，三组饱喂（饱食），一组禁食（至实验时应禁食18~24h左右）。试验前0.5~1h取两只饱食小白鼠，1只腹腔注射肾上腺素15微克，另1只注射胰岛素0.05~0.1U。2.制备肝匀浆4只小白鼠（饱食、饥饿、注射肾上腺素、注射胰岛素），在解剖盘中断头处死，取肝脏，用生理盐水冲洗并吸干，分别称取0.5g(或1g），置匀浆器中，加入5%三氯乙酸溶液3ml,匀浆。3.水解糖原将匀浆液分别转入4支试管中，沸水浴煮沸15min,使肝糖原水解。水解液冷却后，分别过滤于4支50ml容量瓶中，以去离子水定容。4.显色定量

取试管6支，按下表操作，分别读出各测定管及标准管的A620值。

试剂试管编号1(饿)2(饱)3(肾)4(胰)S(标准)U(对照)V(肝糖原提取液)/ml0.50.50.50.5——V(葡萄糖标准溶液)/ml————0.5—V(去离子水)/ml—————0.5V(蒽酮试剂)/ml5.05.05.05.05.05.0沸水浴10minA620调零5.结果计算按公式：(A测/A标)×(1/1.11)，计算出100g肝脏所含肝糖原的克数。

注：1.11为转换系数，葡萄糖的相对分子质量为180，糖原中葡萄糖残基的相对分子质量为162，葡萄糖转换成糖原需除以1.11。要点提示1、不要戏弄动物，否则影响血糖水平，以致影响肝糖原含量。2、肝脏离体后，肝糖原会迅速分解，故在杀死动物后，所得肝脏须用三氯乙酸溶液处理。思考题1.肝糖原含量的动态变化对维持血糖水平有何意义？当动物饱食后，为防止血糖浓度过高，肝糖原合成增强，储备糖；饥饿时为防止血糖浓度下降，肝糖原分解，释出葡萄糖。血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。2.肾上腺素、胰岛素调节血糖水平的机制是什么？肾上腺素和胰岛素是作用相互拮抗的两种激素，通过