高效液相常遇到问题及解决对策

涡流集中〔Eddydiffusion〕，装柱要松紧均一，这样涡流集中小，柱效率高。分子集中〔Moleculardiffusion〕慢，被分别物质停留时间长，则集中严峻。质量转移〔Masstransfer〕的非平衡移动，使区带变宽。动相流速影响大，流速咖大会降低柱效率。固定相颗粒大小。1、开泵后压力即上升至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试，确定为检测池堵塞。2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，疑心进样环或管路漏夜，经由气味、景象和声音可以觉察的问题A、溶剂的气味1、漏液1、见前2、溅出2、a、检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净B、热气味1abc查找修理手册C、读数不正常1、压力不正常1、见前2、柱温箱问题2、a、检查并调整设定b、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯D、灯警告1、压力超出极限值1、a、检查是否堵塞b、检查并调整极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、警告音1、溶剂泄漏/溅出1、找到并解决2、其它警告音2、见用户手册F、刺耳的短音或长音1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进展恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册进样阀可能发生的问题A、手动进样阀，转动不灵:1、转子密封损坏1、更换或调整转子密封2、转子太紧2、调整转子的松紧度B、手动进样阀，载样困难：1、进样阀安装不当，重安装2、定量环堵塞，清34管路1、无压力〔或电源：供给恰当的压力〔电源2、转子太紧：调整转子的松紧度3、进样阀安装不当：重安装D、自动进样阀，其它问题：1、堵塞，清洗或更换堵塞部件2、机械故障，见随机修理手册3、掌握器故障，修理或更换掌握器液相色谱系统的很多问题都能在谱图上反映出来到好的色谱图的关键。A、峰拖尾1、筛板堵塞：a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷：填充色谱柱3、干扰峰：a、使用更长的色谱柱b、转变流淌相或更换色谱柱4PHPHPH值更有利于得到对称峰5、样品与填料外表的溶化点发生反响：a、参加离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延1、柱温低：上升柱温2、样品溶剂选择不恰当：使用流淌相作为样品溶剂3、样品过载：降低样品含量4A1、A2C、峰分叉1、保护柱或分析柱污染能被堵塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流淌相：转变样品溶剂。假设可能实行流淌相作为样品溶剂。D、峰变形1、样品过载：削减样品载量E、早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当：a、削减进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应：a、调整系统连接〔使用更短、内径更小的管路〕b、使用小体积的流通池G、K增加时，脱尾更严峻1、二级保存效应，反相模式a、参加三乙胺〔或碱性样品〕b、参加乙酸〔或酸性样品〕c、参加盐或缓冲剂〔或离子化样品〕d、更换一支柱子2、二级保存效应，正相模式a、参加三乙胺〔或碱性样品〕b、参加乙酸〔或酸性样品〕c、参加水〔或多官能团化合物〕d、试用另一种方法3、二级保存效应，离子对参加三乙胺〔或碱性样品〕H、酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不适宜：a50-100mM的缓冲液bPkaPH值的缓冲液I、额外的峰1、样品中有其他组份：正常2、前一次进样的洗脱峰：a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰：a、检查流淌相是否纯洁b、使用流淌相作为样品溶剂c、削减进样体积J、保存时间波动12、流淌相组分变化，防止变化〔蒸发、反响等。3、色谱柱没有平衡，在每一次运行之前赐予足够的时间平衡色谱柱K、保存时间不断变化1、流速变化，重设定流速；2、泵中有气泡，从泵中除去气泡；3、流淌相选择不恰当a、更换适宜的流淌相b、选择适宜的混合流淌相L、基线漂移1、柱温波动〔测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器〕掌握好柱子和流淌相的温度，在检测器之前使用热交换器图2〔：使用级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流淌相在使用前进展脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N〔不要用盐酸〕4〔高压造成流通池窗口裂开，产生噪音基线取出堵塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5及流速。6、柱平衡慢，特别是流淌相发生变化时：用中等强度的溶剂进展冲洗，更改流淌相时，在10-20倍体积的流淌相对柱子进展冲洗。7、流淌相污染、变质或由低品质溶剂配成：检查流淌相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保存的物质〔高K值〕线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。重设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用的流淌相。10、检测器没有设定在最大吸取波特长：将波长调整至最大吸取波特长M、基线噪音〔规章的〕1、在流淌相、检测器或泵中有空气：流淌相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2更换泵密封。3、流淌相混合不完全：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响〔柱温过高，检测器未加热：削减差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动：在系统中参加脉冲阻尼器N、基线噪音〔不规章的〕1、漏液：检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流淌相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流淌相的组成。3、流淌相各溶剂不相溶：选择互溶的流淌相4、检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡：清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调整器7、流通池污染〔即使是极少的污染物也会产生噪音：用N的硝酸〔不能用磷酸〕清洗流通池8、检测器灯能量缺乏：更换灯9、色谱柱填料流失或堵塞：更换色谱柱10、流淌相混合不均匀或混合器工作不正常：修理或更换混合器，在流淌相不走梯度时议不使用泵的混合装置O、宽峰1、流淌相组成变化：重制备的流淌相2、流淌相流速太低：调整流速3、漏液〔特别是在柱子和检测器之间：以及不正常的噪音。假设必要更换密封。4、检测器设定不正确：调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反响时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长5、a、小体积进样〔例如：10ul100ul〕以1：10或1：100bc、使用内径为0.007-0.01的短管路d、削减响应时间6、缓冲液浓度太低：增加浓度7、保护柱污染或失效：更换保护柱8色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷：翻开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分别的物质的峰：选择其它类型的色谱柱以改善分别效果11、柱温过低：提高柱温。除非特别状况，温度不宜超过75℃12、检测器时间常数太大：使用较小的时间常数P、分别度降低1、流淌相污染或变质〔引起保存时间变化：重配置流淌相2生程序。假设问题仍旧存在，进口可能堵塞了，更换入口