案例成果讲稿

2011级开题报REV3L对宫颈癌细胞化疗敏感性影响的研：导师：导师签名一、课题的主要依据及国内外研究动全世界范围内，颈癌的居女性的第三位，占全球女性因肿瘤致死病因的第四位化疗作为局部晚期宫颈癌的主要治疗对于控制肿瘤预防肿瘤复发转移具有重要作用。疗药物抗拒的分子生物学机制，建立新的分子靶向治疗联合化疗模式以提高传疗的疗效和减少等。这些因素造成了正常或抑癌的突变或缺失、癌的异常扩增和表达。机体通过DNA损伤修复的多种修复途径参与了损伤的修复并保持组的稳定性。而这些也会造成DNA损伤修复系统的主要作用是针对DNA错误、环境损伤以及的积累效应等保持基复以及DNA双链断裂损伤修复。近年来，DNA损伤修复的另一途径跨损伤DNA合成通路在DNA损伤环境下的生DNA合成（TranslesionDNA聚合酶ζ、κ、η、ι、μ[1]。当DNA链在过程中遇到损伤DNA而使停顿时，机体能启动跨产生一定程度的耐受[2-4]。NojimaDT40NER通路、同源重组以及跨损伤DNA合成通的多个分别敲除后发现，当跨损伤DNA合成通路被抑制后,细胞对铂的敏感性增加最多[5]DNA合成途径在化疗药物顺铂的耐受中发挥了最重要的作用[6,7]。近年来对跨损伤DNA合成通路中一些关键的功能研究也证实了这一点。DNA聚合酶REV3L蛋白为催化亚基，REV7L为结构亚基[18]。REV1蛋白是TLS通路的另一重要成员，dCMPREV3L-REV7LDNA合成任务[9,10]。2005年，KuniharuDT40细胞的研究中发现，TLS功能缺陷的细胞对顺铂的敏感性显著高于正常细胞，其中REV3L功能缺陷使得细胞的敏感性提高了20多倍。同时，Howell等人通过功能研究证实REV3L与人纤维原细胞9N58以及肠癌细胞HCT116对顺铂的敏感性密切相关。之后他们又发现REV1在人癌细胞中同样与细胞对顺铂的敏感性有既然跨损伤DNA合成途径在细胞对抗DNA交连中扮演了主要作用,这让学者们想到了抑制跨损伤DNA合成途径来提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性。Wu等用顺铂处理人成纤维细胞1h后,REV3L逐渐增加，24h后到达峰值他们还用顺铂处理荧光素酶表达载体,随后转染细胞,根据荧光素酶表达来评价细胞对于铂类药物的修复能力。随后，他们用反义RNA来降低人成纤维细胞内REV3L表达,观察到荧光素酶报告的表达降低1.4倍Lin等用RNA干扰降低结肠癌细胞REV3L表达后,铂类处理过的荧光素酶报告表达下调2.6倍。而对DNA错配修复途径丧失后，报告表达变化不大，从而证明跨损伤修复途径，尤其是DNA聚合酶ζ在修复铂类引起的DNA损伤中扮演重要作用[14]DolesJ等发现在肺细胞株中利用RNA干扰技术降低REV3L、证实降低REV3L表达后在体内同样可以增加肿瘤细胞对顺铂的敏感性[15]。KnobelPA等发现REV3敲除本身即可抑制多种肺细胞株细胞株、大肠癌细胞株、人间皮瘤细胞株及大鼠间皮瘤细胞株克隆的形成，同时抑制大肠癌细胞株和细胞株的增殖，而对对照组细胞株克隆形成及增殖和正常间皮组织形成无影响[16]。Okuda等用同样的方法抑制REV1表达后,卵巢癌细胞对铂的敏感性增加1.5倍；而增加REV1的表达后，癌细胞对顺铂的耐药性增加1.3-1.7倍[12]。Cheung等用RNAi抑制REV7L(MAD2L2)表达后,多种鼻咽癌细胞株对这表明损伤DNALuREV3LmiRNA介导调节作用影响肺癌易感性[17]U251MG中分别建立REV3L过表达和沉默两种细胞模型，从正反两个角度研究REV3L的表达是否与细胞对顺铂的敏感性有关。结果显示，REV3L的过表达能显著提高细胞对顺铂的耐受力，而其表达的抑制则能显著REV3L能显著降低线粒体介导的细胞凋亡的发生，从而影响细胞对顺铂的敏感性[18]。这些研究均表明通过抑制DNA聚合酶ζ,或跨损伤修复途径,将会增加肿瘤细胞对铂的敏感性[19]。、目前，对跨损伤DNA合成通路中的关键REV3L在宫颈癌化疗能的研究国内外尚未见本课题拟将宫颈癌细胞株REV3L敲除或增强表达后观察癌细胞对顺铂敏感性的变化，以及凋亡相关蛋白的表达，以探讨跨损伤DNA合成通路中关键REV3L在宫颈癌化疗增敏中作LangeSS,TakataK,WoodRD.DNApolymerasesandcancer[J].NatRevCancer,2011,11(2):96-XieK,DolesJ,HemannMT,WalkerGC.Error-pronetranslesionsynthesismediatesacquiredchemo [J].ProcNatlAcadSciUSA,2010,107(48):20792-7.HirotaK,SonodaE,KawamotoT,MotegiA,MasutaniC,HanaokaF,SzutsD,IwaiS,SaleJE,LehmannA,TakedaS.SimultaneousdisruptionoftwoDNApolymerases,PoletaandPolzeta,inAvianDT40cellsunmaskstheroleofPoletaincellularresponsetovariousDNAlesions[J].PLoSGenet2010,6(10):1-13.OkadaT,SonodaE,YoshimuraM,KawanoY,SayaH,KohzakiM,TakedaS.MultiplerolesofvertebrateREVgenesinDNArepairand bination[J].MolecularandCellularBiology,2005,14(25):6103-11.NojimaK,HocheggerH,SaberiA,FukushimaT,KikuchiK,YoshimuraM,OrelliBJ,BishopDK,HiranoS,OhzekiM,IshiaiM,YamamotoK,TakataM,ArakawaH,BuersteddeJM,YamazoeM,KawamotoT,ArakiK,TakahashiJA,HashimotoN,TakedaS,SonodaE.Multiplerepairpathwaysmediatetolerancetochemotherapeuticcross-linkingagentsinvertebratecells[J].CancerRes,2005,65(24):11704-11.BerdisAJ.DNApolymerasesastherapeutictargets[J].Biochemistry,2008,47(32):8253-ofalkylatinganticancerdrugs[J].MolPharmacol,2009,76(4):927-34.WittschiebenJP,PatilV,GlushetsV,RobinsonLJ,KusewittDF,WoodRD.LossofDNApolymerasezetacauseschromosomalinstabilityinmammaliancells[J].CancerRes,2006,66(1):134-42.HicksJK,ChuteCL,PaulsenMT,RaglandRL,HowlettNG,GuerangerQ,GloverTW,CanmanCE.DifferentialrolesforDNApolymeraseseta,zeta,andREV1inlesionbypassofintrastrandversusinterstrandDNAcross-links[J].Molecularandcellularbiology2010,30（5）:1217-30.MurakumoY.ThepropertyofDNApolymerase:REV7isaputativeproteininvolvedintranslationDNAsynthesiscellcyclecontrol[J].MutationRes,2002,1-2(510):37-LinX,TrangJ,OkudaT,HowellSB.DNApolymerasezetaaccountsforthereducedcytotoxicityandenhancedmutagenicityofcisplatininhumancoloncarcinomacellsthathavelostDNAmismatchrepair[J].ClinCancerRes,2006,OkudaT,LinX,TrangJ,HowellSB.SuppressionofhREV1expressionreducestherateatwhichhumanovariancarcinomacellsacquire tocisplatin[J].MolPharmacol,2005,6(67):1852-60.LinX,OkudaT,TrangJ,HowellSB.HumanREV1modulatesthecytotoxicityandmutagenicityofcisplatininhumanovariancarcinomacells[J].MolPharmacol,2006,5(69):1748-54.LinX,HowellSB.DNAmismatchrepairandp53functionaremajordeterminantsoftherateofdevelopmentofcisplatin[J].MolCancerTher,2006,5(5):1239-47.DolesJ,OliverTG,CameronER,HsuG,JacksT,WalkerGC,HemannMT.SuppressionofRev3,thecatalyticsubunitofPolζ,sensitizesdrug-resistantlungtumorstochemotherapy[J].ProcNatlAcadSciUSA,2010,107(48):20786-91.KnobelPA,KotovIN,Felley-BoscoE,StahelRA,MartiTM.InhibitionofREV3expressioninducespersistentDNAdamageandgrowtharrestincancercells[J].Neoplasia,2011,13(10):961-70.ZhangS,ChenH,ZhaoX,CaoJ,TongJ,LuJ,WuW,ShenH,WeiQ,LuD.REV3L3'UTR460T>CpolymorphisminmicroRNAtargetsitescontributestolungcancersusceptibility[J].Oncogeneadvanceonlinepublication,2012.WangH,ZhangSY,WangS,LuJ,WuW,WengL,ChenD,ZhangY,LuZ,YangJ,ChenY,ZhangX,ChenX,XiC,LuD,ZhaoS.REV3Lconferschemo tocisplatininhumangliomas:thepotentialofitsRNAiforsynergistictherapy[J].NeuroOncol,2009,11(6):790-802.BrondelloJM,PillaireMJ,RodriguezC,GourraudPA,SelvesJ,CazauxC,PietteJ.NovelevidencesforatumorsuppressorroleofRev3,thecatalyticsubunitofPolzeta[J].Oncogene,2008,27(47):6093-101.二 课题的研究