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过氧化氢酶的活性的测定－紫外线吸收法一、原理HO在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，22使反应溶液吸光度（A）随反应时间而降低。根据测量率的变化速240率即可测出过氧化氢酶的活性。二、材料与设备植物材料：植物的叶实验材料：紫光分光光度计、离心机、研钵、250ml容量瓶、0.5ml吸管1支、10ml试管1支试剂：0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液0.1mol/HO（用0.1mol/L高锰酸钾标定）22三、操作步骤1、酶提取液：称取叶片0.5g置于研钵中，加入pH7.0的磷酸缓冲液研磨成为匀浆，并用缓冲溶液清洗研钵数次（共用6ml磷酸缓冲液，缓冲液分几次加入），取上部澄清液在4000rpm下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液。保存备用。2、测定：取10ml试管1支，按表20-2顺序加入试剂。紫外线吸收法测定HO样品配置表22在管中加入0.3ml0.1mol/L的HO，加完后立即计时，并迅速倒入石22英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔一分钟读数一次，共测三分钟，测完后，按下式计算酶活性。四、结果计算以lmin内减少0.1的酶量为一个酶活单位（U）△AXV240T-过氧化氢酶活性（u/gFW/min）=0・1XVXtXFW=0.043X4.6一0.1一0.2一0.3一3=10.99五、实验反思1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些？过氧化氢酶提取自植物的新鲜叶片中，新叶与旧叶的酶活性存在差异，所以叶片的选择会影响酶活性的测定。温度的变化也会引起酶活性的测定研磨是否充分，洗涤是否洗干净也会影响。2、实验测得的吸光度较小（吸光度的起始值较低），酶活性较小，可能是选取的叶片较老，实验中的失误，用滴定管滴定时，滴定的蒸馏水超过

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