实验果蝇唾腺染色体

实验果蝇唾腺染色体第一页，共三十三页，2022年，8月28日1果蝇的染色体第二页，共三十三页，2022年，8月28日2唾腺染色体第三页，共三十三页，2022年，8月28日3一、实验目的1.观察果蝇的唾腺染色体形态特征；2.练习果蝇幼虫唾腺分离技术；3.掌握果蝇唾腺染色体的制片方法。第四页，共三十三页，2022年，8月28日4二、实验材料果蝇三龄幼虫越肥越好：多加酵母膏，低温18℃培养第五页，共三十三页，2022年，8月28日5三、仪器药品解剖镜显微镜镊子、解剖针载玻片、盖玻片吸水纸生理盐水(0.7)、1mol/L盐酸、改良苯酚品红第六页，共三十三页，2022年，8月28日6四、原理果蝇幼虫期唾腺的细胞核非常大，唾腺染色体比其他细胞染色体大200多倍。它们是通过核内有丝分裂形成的多线染色体，是由于重复分裂后的众多染色线没有分开的结果，一条染色体内含有染色体线多达千条以上。一般来说，多线染色体是处于永久性前期中的一种体细胞染色体配对形式。它普遍存在于双翅目昆虫某些物种的幼虫唾腺细胞内，是研究唾腺染色体常用的材料。第七页，共三十三页，2022年，8月28日7四、原理果蝇的体细胞中有4对染色体。果蝇（三龄）幼虫唾腺细胞的染色体叫做唾腺染色体。这种染色体比正常的处于有丝分裂期的染色体大得多，因而又称为巨大（多线）染色体。巨大染色体上有许多横纹，这些模纹的数目和位置是相对恒定的。由于果蝇唾腺细胞中的同源染色体两两配对时总是紧密结合在一起，当其中一条染色体发生结构变异时，就很容易被识别出来。因此，果蝇唾腺染色体是观察染色体形态、研究染色体结构变异的好材料。第八页，共三十三页，2022年，8月28日8四、原理通常认为果蝇唾腺染色体处于体细胞同源染色体的配对状态，所以染色体看上去只有半数(n)。它们的巨大性是染色体多次复制而不分开的结果。每条染色体大约有1000～4000条复制成的染色体细丝组成，因而又叫做多线染色体。第九页，共三十三页，2022年，8月28日9果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体第十页，共三十三页，2022年，8月28日10果蝇唾腺染色体第十一页，共三十三页，2022年，8月28日11五、实验步骤1.选取三龄幼虫2.拉唾腺3.低渗水解4.染色5.压片6.镜检7.永久片的制作第十二页，共三十三页，2022年，8月28日12五、实验步骤1、辨别头尾选取肥大的果蝇三龄幼虫作为实验材料。在一块洁净的载玻片的中央滴一滴0.75%的NaCl溶液，将爬到瓶壁上的肥大并行动迟缓的三龄幼虫放在载玻片上的NaCl溶液中，在放大镜下辨认幼虫的头部和尾部，可以看到幼虫的头部有一个小黑点（神经节）。第十三页，共三十三页，2022年，8月28日13五、实验步骤第十四页，共三十三页，2022年，8月28日14五、实验步骤2、幼虫的解剖将幼虫置于生理盐水内，一手（左手）持解剖针按住幼虫末端的1/3处，以固定幼虫。另一手（右手）持针揿住幼虫头部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而出。如果头部被拉断，腺体没有拉出，可以用右手持解剖针从左手的解剖针附近的腹部缓缓向头部挤压，这样也可以压出唾液腺。唾腺为半透明的小囊状，低倍镜下为两层规则排列的细胞组成。其上附有白色的脂肪带，食道两侧各有一个。找到唾腺后尽可能把腺体上的脂肪剔除。第十五页，共三十三页，2022年，8月28日15五、实验步骤第十六页，共三十三页，2022年，8月28日16五、实验步骤第十七页，共三十三页，2022年，8月28日17五、实验步骤

解剖针解剖针第十八页，共三十三页，2022年，8月28日18五、实验步骤第十九页，共三十三页，2022年，8月28日19五、实验步骤3、染色前处理清除残体，使载片上只留下唾腺。4、低渗处理往唾液腺上滴一滴0.4%的NaCl溶液，低渗处理2min，使唾液腺膨胀。5、水解用小片吸水纸吸除水分及破碎组织（当心切勿将唾液腺吸走）在唾液腺上滴两滴7%的盐酸（1mol/LHCl），水解2min（不超过3min）。然后用清水反复滴洗几次,洗去盐酸（一边滴清水，一边用吸水纸从材料旁边吸水），再用吸水纸吸干周围的水分。第二十页，共三十三页，2022年，8月28日20五、实验步骤第二十一页，共三十三页，2022年，8月28日21五、实验步骤加入盐酸后的唾腺第二十二页，共三十三页，2022年，8月28日22五、实验步骤6、染色滴上几滴改良苯酚品红于唾腺上，染色8~12分钟。7、压片在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以母指适当用力压片，要求将唾腺细胞核压破，染色体伸展开来而不破碎为好。第二十三页，共三十三页，2022年，8月28日23五、实验步骤8、显微镜下观察压好的玻片标本，用显微镜可以看到四对染色体，第一对染色体（X-）组成一个长条，第二和第三对各自组成了具有左右两臂的染色体对，它们都以中部的着丝区聚集，而第四对染色体很小，分布在着丝区呈点状或盘状。这样，从压好的较为模式的片子中便可看到五条弯曲展开的染色体臂（X-、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一个点状的第四染色体对，它们在着丝区构成染色中心并向四周伸开。第二十四页，共三十三页，2022年，8月28日24果蝇唾腺染色体第二十五页，共三十三页，2022年，8月28日25果蝇唾腺染色体果蝇唾腺染色体第二十六页，共三十三页，2022年，8月28日26五、实验步骤9、永久片的制作（方法一）（1）使盖片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1:1）的培养皿中。一端垫上一玻棒，使玻片稍为倾斜，约过5~10分钟，可见盖片与载片分离。用镊子轻轻取出盖片于吸水纸上。（2）有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇（1:1）的培养皿中三分钟。（3）换入纯叔丁醇中三分钟。（4）用中性树胶封片。第二十七页，共三十三页，2022年，8月28日27五、实验步骤9、永久片的制作（方法二）依此将具有叫好图象的片子移入下列染色缸中：Carnoy固定液（在固定液中的时间以盖片脱下为标准）100%乙醇，1min100%乙醇，1min二甲苯，5min加一滴加拿大树胶封片，封胶干后观察，贴上标签。第二十八页，共三十三页，2022年，8月28日28六、注意事项1.在整个装片制作过程中应防止唾液腺干燥（加生理盐水，但不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃，吸水时勿将唾腺一起吸走）。2.为了得到更好的染色体标本，应在20~25℃和营养良好的条件下饲养果蝇，这样可以得到较大的幼虫。3.染色时间不可过长，否则背景也着色。4.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。5.用摇蚊幼虫（即鱼饵红虫子）可以代替果蝇三龄幼虫做实验材料。第二十九页，共三十三页，2022年，8月28日29七、实验报告绘出你所观察到的唾腺和唾腺染色体图像，注意绘出唾腺细胞排列及唾腺染色体显示的明暗带。第三十页，共三十三页，2022年，8月28日30八、思考题唾腺染色体有哪些特点？为什么选用三龄虫？试分析。第三十一页，共三十三页，2022年，8月28日31唾腺染色体唾腺染色体salivaryglandchromosomealivarychromosome双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。（1881）首次看到了它的带状结构，但到后来，E.Heitz和H.Bauer（1933）以及（1933）才指出它在细胞学上的意义。小知识第三十二页，共三十三页，2022年，8月28日32唾腺染色体唾腺染色体的显著特征是：（1）形状为带状，宽达5毫微米，长达400毫微米它相当于普通染色体的100～150倍；（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密