标准解读
GB/T 18634-2002 是一项中华人民共和国国家标准,全称为《饲用植酸酶活性的测定 分光光度法》。该标准详细规定了使用分光光度法测定饲料中植酸酶活性的方法,旨在为饲料工业提供一个统一、准确的检测手段,以确保饲料质量控制和动物营养需求。
标准适用范围
本标准适用于单胃动物饲料中添加的植酸酶活性测定,植酸酶作为一种重要的饲料添加剂,能够有效分解植物性饲料中的植酸磷,提高磷的利用率,减少环境污染。
测定原理
利用植酸酶对植酸的水解作用,产生无机磷酸盐。在特定条件下,无机磷酸盐与钼酸盐反应生成磷钼杂多酸,再与抗坏血酸反应形成蓝色络合物,通过分光光度计在特定波长(一般为700nm)下测定吸光度,根据标准曲线计算出植酸酶活性。
主要步骤
-
样品准备:准确称取一定量的饲料样品,经过适当处理后,制备成适合测定的试样溶液。
-
反应体系建立:在试管或比色皿中,加入适量的试样溶液、缓冲液、植酸钠溶液等,按照标准规定的条件进行预处理和酶促反应。
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显色与测定:向反应体系中加入钼酸盐溶液和抗坏血酸溶液,混匀后,在规定时间内于分光光度计上测定吸光度值。
-
标准曲线绘制:使用已知浓度的磷酸盐标准溶液,按同样步骤处理,得到一系列吸光度值,绘制标准曲线。
-
结果计算:根据试样溶液测得的吸光度,利用标准曲线计算出样品中植酸酶活性的单位,通常表示为每克样品在特定条件下每分钟能释放的无机磷的微克数(μg/min/g)。
注意事项
- 整个实验过程中需严格控制实验条件,如温度、pH值和反应时间,以保证测定结果的准确性与重复性。
- 所有试剂应为分析纯或更高纯度,并注意避光保存,以防变质影响测定结果。
- 实验操作需遵循实验室安全规范,注意个人防护。
结果表示
最终报告应包含样品编号、测定的吸光度值、计算出的植酸酶活性以及必要的重复测定数据,以便于质量控制和数据分析。
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文档简介
ICS.65.120B46中华人民共和国国家标准GB/T18634-2002饲用植酸酶活性的测定分光光度法DeterminationoffeedphytaseactivitySpectrothotometricmethod2002-02-19发布2002-07-01实施中华人民共和发布国家质量监督检验检疫总局
GB/T18634-2002本标准参考美国公职分析化学家协会(AOAC)方法和国外有关文献资料制定。本标准确定了饲用植酸酶的活性单位定义·采用钒钼显色分光光度法测定植酸酶活性。此项标准分为绝对法和相对法,对标准物质和试剂的选择均有详细说明。规定了方法的适用范围,检测原理,检测程序及最佳样品浓度。本标准的附录A是提示的附录本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)、罗氏泰山(上海)维生素制品有限公司、巴斯夫维生素有限公司。本标准主要起草人:马东霞、苏晓鸥、张苏、王云全、张若寒
中华人民共和国国家标准饲用植酸酶活性的测定GB/T18634-分光光度法一2002DeterminationoffeedphytaseactivitySpectrothotometricmethod1范围本标准规定了以分光光度法测定饲用植酸酶活性的方法本标准适用于作饲料添加剂用的植酸酶产品,也适用于添加有植酸酶的配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。样品最低检出量为90U/kg.引用标准下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO3696:1987)植酸酶活性单位定义样品在植酸钠浓度为5.0mmol/L、温度37C、pH值5.50的条件下,每分钟从植酸钠中释放1mol无机磷,即为一个植酸酶活性单位,以U表示。方法原理植酸酶在一定温度和pH条件下,水解底物植酸钠·生成正磷酸和肌醇衍生物,在酸性溶液中,用钒相酸铵处理会生成黄色的(NH,)PO.NH,VO,·16MoO,复合物,在波长415nm下进行比色测定。5试剂和溶液本标准中所用试剂,在没有注明其他要求时.均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水。清洗试验用容器不要用含磷清洗剂。5.1乙酸缓冲液(I),c(CH.COONa·3H.O)为0.25mol/L:称取34.02g三水乙酸钠,0.1g吐温20于1000mL容量瓶中,加入900mL水溶解,用盐酸调节pH至5.50±0.01,并用蒸留水定容至1000mL,室温下存放2个月有效。5.2乙酸缓冲液(I).c(CH.COONa·3H.O)为0.25mol/L:称取34.02g三水乙酸钠.5g吐温20.30g乙二胺四乙酸二钠(EDTA)于1000mL容量瓶中,加入900mL水溶解,用盐酸调节pH至5.50±0.01.并用蒸雷水定容至1000mL,室温下存放2个月有效5.3植酸钠溶液·c(C.H.O.P.Naua)为7.5mmol/L:称取0.6929g肌醇六礁酸钠(C.H.O.P.Naa)于100mL容量瓶中,用乙酸缓冲液(5.1)溶解并定容至刻度,
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