标准解读

GB/T 17999.5-1999是一项中华人民共和国国家标准，全称为《SPF鸡酶联免疫吸附试验》。该标准规定了使用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对无特定病原体（Specific Pathogen Free, 简称SPF）鸡进行检测的详细操作流程、要求及判定标准，旨在确保实验结果的准确性和可比性，适用于SPF鸡群中特定抗原或抗体的检测。

标准内容概览：

  1. 范围：明确了本标准适用的对象是SPF鸡，以及采用ELISA技术检测的目标，包括但不限于病毒、细菌等病原体的特异性抗体或抗原。

  2. 规范性引用文件：列出了实施本标准时需要参考的其他相关标准和文献，这些文件对于理解与执行测试至关重要。

  3. 术语和定义：解释了在标准中使用的专业术语，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、无特定病原体鸡（SPF鸡）等，确保读者对基本概念有共同的理解。

  4. 试剂与材料：详细说明了进行ELISA测试所需的各种试剂、抗体、酶标板、洗液等的规格要求和质量控制标准，确保实验材料的可靠性和一致性。

  5. 仪器设备：列举了实施ELISA测试所必需的仪器设备，如酶标仪、洗板机、离心机等，并对其性能指标提出了具体要求。

  6. 样品采集与处理：规定了如何从SPF鸡采集血样或其他样本，以及样本预处理的步骤，确保样品的代表性且不影响检测结果。

  7. 试验步骤：详述了ELISA测试的操作流程，包括固相载体的准备、样本和标准品的稀释、加样、孵育、洗涤、加入酶标抗体、底物显色、读取吸光度等关键步骤。

  8. 结果判断：提供了判断阳性或阴性的标准曲线制作方法、临界值确定原则以及结果解读规则，确保检测结果的科学性和准确性。

  9. 精密度与准确度：描述了如何评估试验重复性、再现性以及与参考方法比较的准确性，以验证实验方法的可靠性。

  10. 试验报告：规定了试验报告应包含的信息，如样品信息、试验条件、结果数据、结论及必要的解释等，确保信息的完整性和透明度。


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  • 被代替
  • 已被新标准代替，建议下载现行标准GB/T 17999.6-2008
  • 1999-11-10 颁布
  • 2000-04-01 实施
©正版授权
GB/T 17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验_第1页
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文档简介

TCS.65.020.30B41中华人民共和国国家标准GB/T17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验SPFchickennzyme-linkedimmunosorbentassay1999-11-10发布2000-04-01实施国家质量技术监督局发布

GB/T17999.5-1999酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好,已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF鸡场淋巴白血病病毒感染的监测,本标准在此基础上.规定了SPF鸡酶联免疫吸附试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准.包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡酶联免疫吸附试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分：GB/T17999.1—1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验；GB/T17999.3—1999SPF鸡血清平板凝集试验；GB/T17999.4—1999SPF鸡琼脂扩散试验；GB/T17999.6—1999SPF鸡旺敏感试验;GB/T17999.7—1999SPF鸡鸡白痛沙门氏菌检验：GB/T17999.8—1999SPF鸡试管凝集试验；GB/T17999.9—1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位：农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人：陈德威、张冰、赵立红、黄进、李军。

中华人民共和国国家标准GB/T17999.5—-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验SPFchicken--Enzyme-linkedimmunosorbentassay1范围本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料,操作程序及结果判定等本标准适用于SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。2原理检测SPF鸡蛋清中禽白血病病毒主要群特异性抗原P27的方法为双抗体夹心酶联免疫吸附试验先用抗P27抗体包被酶标板，然后与蛋清作用，蛋清中的P27与包被抗体结合，洗去未结合的物质。再加人日RP-兔抗P27抗体，作用后洗去未结合的酶标物。加入底物溶液，出现颜色变化。颜色变化的速度及程度与样品中P27的含量有关。3试剂和器材3.1试剂3.1.1包被抗体(免抗P27IG）.3.1.2阳性抗原(P27)。3.1.3阴性抗原。3.1.4被检蛋清。3.1.5HRP-兔抗P27。3.1.6包被液：0.05mol/L、pH9.6碳酸盐缓冲液配制：碳酸钠1.59g·碳酸氢钠2.93g.蒸水加至1000mL3.1.7洗涤液：H7.4.PBS-TWeen20配制：0.01mol/L、pH7.4PBS1000ml,吐温-200.5mL。3.1.8底物溶液；H5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液-OPD-H.O。配制：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液25.7mL.0.1mol/L柠檬酸溶液24.3mL·蒸雷水50mL·邻苯二胺(OPD)40mg.30%H.O.0.15mL.3.1.9终止液：2mol/L硫酸。3.2器材3.2.1酶标板3.2.2移液器3.2.3恒温培养箱3.2.4ELISA读数仪。保作程

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