第四章植物组织培养技术二

第三节植物离体繁殖

植物离体繁殖（propagationinvitro）又称植物快繁或微繁，是指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。一、概念和特点（一）概念2I概述

1、繁殖效率高。2、培养条件可控性强。3、占用空间小。4、管理方便，利于自动化控制。5、便于种质保存和交换。（二）特点3二、植物快繁器官形成方式（再分化形成植株的方式）根据器官形成方式的不同，将植物器官的再生分为五种类型，即短枝发生型（不定芽型）、丛生芽发生型（器官型）、器官发生性、胚状体发生型和原球茎发生型。（一）短枝发生型（不定芽型）

短枝发生型是指外植体携带的带叶茎段，在适宜的培养环境中萌发，形成完整植株，再将其剪成带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。5特点：①繁殖率高，利用外植体的芽特别是原受到抑制的腋芽和大量形成不定芽。②能保持该种植物遗传稳定性。③可使繁殖周期长的林木缩短其童年期（二）丛生芽发生型(器官型)

丛生芽发生型是指使外植体携带的顶芽或腋芽在适宜培养环境中不断发生腋芽而呈丛生状芽，或者直接从外植体上长出多个从芽，将单个芽转入生根培养基中，诱导生根成苗的繁殖方法。丛生芽发生型是大多数植物快繁的主要途径，它不经过愈伤组织，能使无性系后代保持原品种的特性，在生产中普遍应用。67特点：①繁殖率非常高，但繁殖速度较慢。②遗传性稳定。（三）器官发生型（已讲过）是指外植体在适宜培养基和培养条件下，经过脱分化形成愈伤组织，然后经过再分化诱导愈伤组织产生不定芽，或外植体不形成愈伤组织而直接从其表面形成不定芽，将芽苗转移到生根培养基中，经培养获得完整植株的繁殖方法。①繁殖速度较快。②遗传性不稳定，已产生变异。③愈伤组织是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料器官发生型也是许多植物快繁的主要方式。由于不定芽形成的数量与腋芽数目无关，其增殖率高于丛生芽发生型。但经过愈伤组织途径或者多次继代培养后，容易导致细胞分裂不正常，增加变异植株发生频率。如香蕉继代次数控制在8代之内，再生植株的变异率则可控制在3%左右。9表现嵌合性状的植株通过此方式再生时，往往导致嵌合性状发生分离而失去原有价值。如观赏植物色彩镶嵌的叶子、带金边或者银边等性状的植物，通过器官发生性途径再生植株时，可能导致这些观赏性状消失。这类植株快繁时，应通过丛生芽途径进行。10ABEC花烛叶片片离体培培养及植植株再生生11（四）胚胚状体发发生型胚状体发发生型是指外植植体在适适宜培养养环境中中，经诱诱导产生生体细胞胞胚的繁繁殖方法法，从从而形成成小植株株的繁殖殖方法。。分为间接途径径（经愈伤伤途径））和直接途径径两种。胚状体发发生途径径具有成成苗数量量大、速速度快、、结构完完整的特点，因而是是外植体体增殖系数数最大的的途径。12胚状体发发生型特点：①①胚状体体发生数数量多、、速度快快、结构构完整、、繁殖系系数高。。②遗传传性稳定定13菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察14（五）原原球茎发发生型原球茎发发生型是兰科植植物的一一种快繁繁方式，，它是指指茎尖或或腋芽外外植体经经培养产产生原球球茎（即即扁球状状体、基基部生假假根）的的繁殖类类型。15原球茎是是兰花种种子发芽芽过程中中的一种种形态学学构造。。种子萌萌发初期期并不出出现胚根根，只是是胚逐渐渐膨大，，以后种种皮的一一端破裂裂，肿胀胀的胚呈呈小圆锥锥状，故故称为原球茎。原球茎是是短缩的的、呈珠珠粒状的的、由胚胚性细胞胞组成的的、类似似嫩茎的的器官，，它可以以增殖，，形成原球茎丛丛。由茎尖或腋腋芽外植体诱诱导产生生原球茎茎，切割割原球茎茎进行增增殖，或或停止切切割使其其继续培培养而转转绿，产产生毛状状假根，，叶原基基发育成成幼叶，，将其转转移培养养生根，，形成完完整植株株。1617植物快繁繁的程序序包括四四个阶段段：无菌（或或初代））培养的的建立繁殖体增增殖芽苗生根根小植株的的移栽驯驯化II植物快繁繁程序18一、无菌菌培养的的建立这个阶段段的任务务是母株和外外植体的的选取、、无菌培培养物的的获得及及外植体体的启动动生长，以利于于离体材材料在适适宜培养养环境中中以某种种器官发发生类型型进行增增殖。1921二、增殖殖培养1.培养材料料的增殖殖方式五种方式式。(取决于培养目的的和材料自身身的可能能性。)一般大多多数植物物采用无菌短枝枝或腋芽芽萌发或或诱导不不定芽产生，再再以芽繁殖芽芽的方式进进行增殖殖；兰科科植物、、百合等等则采用用原球茎增增殖途径径，以保障障繁殖材材料的遗遗传稳定定性。222.增殖培养养基增殖率是植株快快速繁殖殖特别是是商业性性繁殖的的重要指指标。外外植体在在每次继继代培养养中，应应能产生生最大数数量的有有效繁殖殖体。基本培养养基一般般与启动动生长培培养基相相同，而而细胞分分裂素和和矿物元元素的浓浓度水平平则高于于启动生生长培养养基。一一般MS+BA1~3mg/ml+NAA0.1~1mg/ml。233.增殖体的的大小和和切割方方法一般携带带一个茎茎节，但但第一次次增殖的的茎段一一般都有有2~4个茎节。。茎段可以以垂直插插入培养养基中，，但插入入的深度度不应淹淹没茎节节；或水水平放入入培养基基表面，，以刺激激侧芽的的萌动。。24青花菜增增殖枇杷增殖殖2627三、芽苗苗生根将单个芽芽苗转移移到生根根培养基基或适宜宜环境中中诱导生生根。1.离体生根根（试管管内生根根）降低无机机盐浓度度（1/2MS或者1/4MS），减少少或不需需要细胞胞分裂素素，增加加生长素素的浓度度。对有些植植物，如如果芽苗苗在含有有生长素素的培养养基中生生长1～2d，再转移移至无生生长素的的培养基基中，或或芽苗在在含生长长素的生生根溶液液中浸蘸蘸后直接接插入无无生长素素的培养养基中，，湿度85%以上，温温度25℃，弱光或或黑暗条条件。28292.活体生根根（试管管外生根根）芽苗先在在生长素素中快速速浸蘸或或在含有有相对高高浓度生生长素的的培养基基中培养养5~10天，然后后在温室室中栽入入培养基基质，经经常喷雾雾，给予予高湿度度环境，，几天后后便可自自行生根根。30四、移栽栽驯化试管小植植株的移移栽驯化化是试管管苗从异异养到自自养的转转变，有有一个逐逐渐适应应过程。。移栽前前需对试试管植株株进行高高光强炼炼苗，使使植株生生长粗壮壮，并打打开瓶口口，降低低湿度，，使其逐逐渐适应应外界环环境。1.移栽2.驯化管理理31１.移栽首先应洗洗去小植植株根部部附着的的培养基基，避免免微生物物的繁殖殖污染，，造成小小苗死亡亡。然后将小小植株栽栽入人工工配制的的混合培培养基质质中，基基质用保保湿又透透气的材材料，如如蛭石、、珍珠岩岩、粗沙沙、泥炭炭等按比比例混合合，以利利小植株株生长。。几天后后小植株株可形成成新的功功能根系系。322.驯化管理理移栽的试试管小植植株和活活体生根根的小植植株，其其湿度的的控制十十分重要要。因试试管苗在在高湿（（90％～100％的相对对湿度））环境中中生长，，茎叶表表面防止止水分散散失的角角质层等等几乎全全无，根根系又不不发达，，移栽后后难以保保证水分分平衡，，即使根根系周围围有足够够的水分分也不行行。所以以，应采采用加覆覆塑料薄薄膜、经经常喷雾雾的方法法，提高高小植株株周围的的空气湿湿度，减减少叶面面蒸腾。。同时，，逐渐降降低空气气相对湿湿度，使使其适应应自然环环境条件件。33移栽小植植株还应应注意光光、温控控制。移栽初期期光照强强度应较较弱，经经过一段段时间适适应后，，增加光光照强度度（漫射射），如如1500～4000lx，甚至10000lx。移栽小植植株生长长所需的的适宜温温度与植植物种类类有关，，喜温性性植物以以25℃左右为宜宜，喜凉性性植物则以以18～20℃为好。温温度过高导导致蒸腾作作用加强，，水分失衡衡，微生物物滋生等；；温度过低低则使幼苗苗生长迟缓缓或不易存存活。如使使基质温度度高于空气气温度2～3℃，则有利利于生根和和促进根系系发育，提提高存活率率。34此外，在移移栽小植株株的驯化管管理阶段，，还应防止止菌类滋生生，适当喷喷一定浓度度的杀菌剂剂（杀菌灵灵）可有效效保护移栽栽小植株的的正常生长长。3536III影响植物快快繁的因素素37植物快繁的的目的是以以尽可能高高的效率生生产试管苗苗，获得最最大的经济济效益。因因此，在快快繁时应使使各种影响响因素处于于最适合快快繁的状态态。一、外植体体38外植体的来来源：最适的为为茎尖、带带芽茎段，，也可以利利用叶片、、子叶、根根段、花器器官组织等等。外植体生理理年龄：幼嫩组织织分化能力力更强。外植体大小小：不能太小小，否则影影响成活率率。除非是是用于脱毒毒苗的生产产。二、培养基基39基本培养基基：MS培养基应用用最为广泛泛。对于某某些植物及及生根阶段段，以1/4或1/2MS较好。蔗糖糖和葡萄糖糖浓度为2-4%。生根时稍稍低。植物生长调调节剂：主要以细细胞分裂素素和生长素素的配合使使用，调节节外植体的的生长和分分化。另外外ABA、GA、CCC等也具有不不同的作用用。培养基的物物理特性：以固体培培养较为普普遍，也有有采用液体体培养，如如兰花原球球茎的增殖殖。三、培养条条件40温度：与植物的原产地相应。一般为25±2℃。有时可进行高温或低温的预处理。湿度：要求环境相对湿度不能太低，一般在70-80%。气体：要求培养基及培养瓶通气良好，同时及时转接。液体培养要求振荡培养，促进氧气交换。四、继代培培养主要指对阶阶段Ⅱ增殖形成的的芽丛、胚胚状体或原原球茎等进进行转接继继代。继代代间隔时间间一般为20天左右。41五、移栽根系结构不不完善的试试管苗移栽栽后不易存存活。要求求根系结构完完整，具根根毛，再生生根的吸收收能力强。叶表皮组织织不发达的的试管苗也也不易移栽栽存活。移移栽要求打打开瓶口驯驯化2-3天；或在瓶瓶内添加一一些生长延延缓剂如PP333、CCC等培育壮苗苗。42IV植物快繁的的商业化应应用植物快繁最最重要的用用途是进行行植物的商商业化生产产。世界上快繁繁商业化开开始于上个个世纪美国国的兰花工业。我国的香香蕉快繁苗苗占全国组组培苗的2/3。其次有甘甘蔗、兰花花、马铃薯薯、甘薯等等。43园艺植物种苗工厂化生产44一、商业化生生产规模及工工艺流程1.试管苗生产规规模的确定商业化生产规模的确定应应以市场需求为标准。试管苗生产规模的确定是是以无菌工作台和和培养架的数量来衡量量的。年产100万株，接种室室40~50m2，超净工作台台8~10台，培养室100-120m2。452.商业化实验室室的设计根据已确定的的生产规模和组织培养的的生产程序，试管苗生产产的实验室应应尽量布局合合理，使生产产程序能连续续、有效地进进行。46（1）环境要求远远离污染源（（2）水电、交通通（3）工艺流程（（4）节能（5）无菌3.商业化生产的的配套设施相应配套设施施包括过渡培养室和和露地炼苗场场。474.商业化生产的的工艺流程试管苗商业化化生产的工艺艺流程是以其其快繁程序为为基础建立起起来的，如最最成熟的草莓莓脱毒苗生产产流程和葡萄萄试管快繁流流程。通过茎茎尖脱毒建立立起来的草莓莓商业化试管管苗生产，除除必须配备的的培养和驯化化等条件外，，还应增加病毒鉴定室。48二、商业化生生产及效益分分析1.试管苗增殖率率的估算试管苗的增殖殖率多数以芽芽或苗为单位位，但原球茎茎或胚状体多多以瓶为单位位。（1）增殖率的理理论值是指接种一个个芽或一块增增殖培养物，，经过一段时时间培养后得得到的芽或苗苗数。49Y=mXn（Y—年繁殖数，m—无菌母株苗数数，X—每个培养周期期增殖的倍数数，n—全年可增殖的的周期数）（2）增殖率的实实际值是指接种一个个芽或一个苗苗，经过实际际繁殖周期，，得到的实际际芽或苗数。。实际增殖数与与理论增殖数数出现很大差差异的原因是：①污染淘汰；②出售、转让和和实验所用；；③移栽死亡；④培养容器等设设备的限制。。2.生产计划的制制定和实施（1）生产计划的的制定商业化生产计计划制定的依依据是市场对对试管苗的种种类、品种及及数量的需求求及趋势，实实验室具备的的生产条件和和规模。首先先应提出全年年销售目标，，再根据实际际生产中各个个环节的消耗耗，制定出相相应的全年生生产计划，一一般生产数量量应比计划销销售的数量增增加20％～30％。50（2）生产计划的的实施生产计划实施施的步骤为：：①准备繁殖材料料。②合格繁殖材料料的快速增殖殖。存瓶增殖总瓶瓶数＝月计划生产产苗数／每个个增殖瓶月可可产苗数月计划生产苗苗数＝每个操作人人员每天可接接苗数×月工作日×人员数控制试管苗生生产中的增殖殖总瓶数，便便于在一个周周期内全部更更新一次培养养基，使增殖殖材料处于不不同生长阶段段的最佳状态态，提高其质质量。513.产品质量监控控52如接种状况、、污染率、生生长情况、生生根苗数量、、出瓶苗质量量等，并建立立试管苗出瓶瓶标准。4.商业化生产效效益分析通过成本核算算可以了解：：①生产过程中的的各种消耗；；②管理工作的质质量；③各项技术措施施的效果；④产品价格的制制定标准。53试管苗商业化化的生产成本应包包括：①人工费用。②生产物资费用用。③设备折旧费用用。④水电费用。⑤其他费用。54三、降低商业业化生产成本本的措施针对试管苗生生产所需的费费用，应采取取相应措施降降低生产成本本，增强产品品竞争力，提提高试管苗经经济效益。1.提高劳动生产产率2.减少设备投资资，延长使用用寿命3.降低消耗4.降低污染，提提高繁殖率和和成活率5.简化培养基55四、离体快繁繁商业性生产产的范围及应应用1．用于稀缺或或急需良种植植物的繁殖2．用于茎尖脱脱毒及无病毒毒苗木试管快快速繁殖3．用于自然界界无法用种子子繁殖或难以以保持后代一一致的三倍体体、单倍体及及基因工程植植株的快速繁繁殖4．濒临植物的的拯救5．用于种质的的试管保存及及交换56兰科植物生产产57无菌苗快速繁繁殖58无菌苗驯化596061五、商业化生生产应注意的的问题（一）污染1.污染概念：在组培过程中中培养基和培培养材料滋生生杂菌，导致致培养失败的的现象。2.污染原因：细菌、真菌菌为病源菌；；污染途径有有外植体带菌菌，培养基及及器皿灭菌不不彻底，操作作人员未遵守守操作规程，，环境不清洁洁。（1）真菌污染的的特点：污染部分长有有不同颜色的的霉菌，在接接种后3～10天才能发现。。（真菌菌落大，，颜色多样，，表面呈毛绒绒状，嗅之一一般有霉味，，真菌会产生生菌丝）原因：周围环环境不清洁超净工作台的的过滤装置失失效培养用器皿的的口径过大等等为了减少损失失，提高工作作效率，必须须在每个操作作环节注意防防止污染的发发生。3.污染特点（2）细菌污染的的特点：菌斑呈粘液状状物，而且在在接种后1～2天即可发现。。（细菌菌落小，，表面呈乳脂脂状光泽，嗅嗅之一般有酸酸臭味，细细菌污染没有有菌丝）原因：材料带带菌培养基灭菌不不彻底操作人员未遵遵守操作规程程因此接种人员员的手应经常常用70%洒精擦净，镊镊子和接种针针在使用前必必须在火焰上上烧红。4.预防措施（1）防止材料带带菌：避免阴阴雨天在室外外采集外植体体；材料预培培养。（2）严格外植体体灭菌（3）接种用具灭灭菌彻底（4）严守无菌操操作规程（5）保持培养室室清洁（6）做好超净工工作台检修、、养护防止材料带菌菌的措施（1）用茎尖作外外植体时，可可在室内或无无菌条件下对对枝条先进行行预培养。枝条→水水洗净→插插入无糖的的营养液或自自来水抽枝，，以这种新抽抽的嫩枝条作作为外植体接接种。这样便便可大大减少少材料的污染染。在无菌条件下下对采自田间间的枝条进行行暗培养，待待抽出徒长的的黄化枝条时时采枝，经灭灭菌后接种也也可明显减少少污染。（2）多次灭菌法法：如咖啡成熟叶片的灭灭菌即用这种种方法。首先先除去主脉（因因主脉与支脉脉交界处常有有真菌休眠孢孢子存在），，同时去掉叶叶的顶端、基基部和边缘部部分，这样可可大大减少污污染；其次，将切好的外外植体放入1.3%的次氯酸盐溶溶液中（商品品漂白粉25%的溶液），灭灭菌30min；第三，在无菌蒸馏水水中冲洗3次；第四，将材料封闭在在无菌的培养养皿中过夜，，保持一定温温度；第五，次日将叶片用用2.6%次氯酸钠灭菌菌30min，然后，用蒸蒸馏水洗3次。对层积过的种种子也可用多多次灭菌法，在种子吸胀胀前后都要灭灭菌，在层积积贮藏的第一一周还应增加加1次灭菌处理。。（3）多种药液交交替浸泡法对容易污染而而难灭菌的材材料：1.取茎尖、芽或或器官外植体体，用自来水水及肥皂充分分洗净，表面面不可附着污污垢、灰尘，，用剪刀修剪剪掉外植体上上无用的部分分，剥去芽上上鳞片；2.将材料放入70%—75%医用洒精中灭灭菌数秒钟；；3.1：500RoccalB（一种商品灭灭菌剂名）稀稀释液中浸5min4.放入5%—10%次氯酸钠溶液液中并滴入““吐温80”数滴，灭菌15—30min，或浸入0.1%—0.2%升汞溶液中并并加入“吐温温80”数滴，灭菌5—10min；5.用无菌水冲洗洗5次。也可以在在从次氯酸钠钠溶液中取出出后，再放入入无菌的0.1mol盐酸（HCl）中浸片刻，，再用无菌水水冲洗数次。。5.组培苗污染的的处理（1）发现污染的的材料应及时时处理，否则则将导致培养养室环境污染染。（2）对一些特别别宝贵的材料料，可以取出出再次进行更更为严格的灭灭菌，然后接接入新鲜的培培养基中重新新培养。（3）要处理的污污染培养瓶最最好在打开瓶瓶盖前，先集集中进行高压压灭菌，再清清除污染物，，然后洗净备备用后的处理理（二）褐变1.褐变的概念是指外植体在在培养过程，，自身组织从从表面向培养养基释放出褐褐色物质，以以致培养基逐逐渐变成褐色色，外植体也也随之进一步步变褐而死亡亡的现象。2.褐变原因

木质素→→→→醌→积累造成毒害。多酚氧化酶[O]3.影响褐变的因因素（1）植物品种（（基因型）木>草（2）生理状态材料年龄：幼幼龄期＜成年年型材料大小：小小材料＜大材料组织：细嫩组组织＜老熟组组织（3）培养基成分无机盐浓度过过高、CTK水平过高外植体在最适适宜的脱分化化条件下，细细胞大量增增殖，抑制褐褐变。液体培养不容容易褐变。PH高容易褐变。。（4）培养条件光照过强，温温度过高，培培养时间过长长，加速褐变变。（5）材料转移时时间长>短4.褐变的防止措措施（1）选择适宜的的外植体（2）选择合适的的培养条件（3）外植体预处处理（还原剂剂浸泡）（4）加快继代转转接的速度（5）加抗氧化剂剂（VC、PVP、牛血清、牛牛蛋白）（6）0.1－0.5%活性炭（三）玻璃化化1.概念玻璃化是试管苗的一一种生理失调调症，在植物物材料进行离离体培养时，，有些培养物物的嫩茎或叶叶片呈现半透透明或水渍状状的现象。形态：植株矮矮小，节间短短，叶水渍状状、半透明、、脆易碎。2.原因：（1）激素浓度（（尤其CTK）增加或或CTK╱╱IAA高（2）琼脂浓浓度低（3）光照时时间大于于15h（4）温度低低，湿度度大（5）通风条条件不好好（6）培养基基离子种种类及比比例不适适宜3.预防措施施：（1）适当控控制培养养基中无无机盐成成分，适适当提高高蔗糖和和琼脂浓浓度，减减少含氮氮化合物物的用量量，降低低培养基基的水势势。（2）适当降降低CTK和GA的浓度。。考虑加加入适当当的脱落落酸。（3）增加自自然光照照，控制制光照时时间；增增加容器器通气，，控制温温度。（4）加入其其他物质质（如活活性炭、、多效唑唑、间苯苯三本分分、根皮皮苷）。。（四）组组培其它它常见问问题1.材料死亡亡2.黄化3.变异和畸畸形4.增殖率低低下或过过盛5.组培苗瘦瘦弱或徒徒长6.不生根或或生根率率低7.过渡苗死死亡率高高1.材料死亡亡原因与与预防外植体灭菌过度灭菌浓度和时间适宜污染注意环境和个人卫生，严格操作培养基不适宜或配制有问题选用合适培养基培养环境恶化改善培养环境，及时转移和分瓶；加强组培苗的过渡管理2.黄化（1）原因：培养基中中Fe含量不足足；矿物营养养不均衡衡；培养环境境通气不不良，瓶瓶内乙烯烯量高；；激素配比比不当；；光照不足足；糖用量不不足，长长期不转转移；培养温度度不适（2）预防：：针对黄化化原因对对症下药药3.变异和畸畸形（1）原因：：激素浓度度和选用用的种类类不当；；环境恶化化和不适适。（2）预防：：降低CTK浓度，调调整生长长素与CTK的比例；；改善环境境条件。。4.增殖率低低下或过过盛（1）原因：：与品种特特性有关关；与激素浓浓度和配配比有关关。（2）预防：：确定一定定范围的的激素比比试验，，根据长长势确定定配方，，并及时时调整；；交替使用用两种培培养基；；考虑品种种的田间间表现和和特性，，调整培培养环境境。5.组培苗瘦瘦弱或徒徒长原因CTK过高，过过多不定定芽未及时转转移和和分切温度过高高通气不良良光照不足足培养基水水分过多多预防措施施减少CTK用量加速转瓶瓶，降低低接种量量降低环境境温度用透气膜膜做封口口提高光强强，延长长光照时时间适当增加加培养基基硬度6.不生根或或生根率率低原因：种类和品品种间的的差异激素种类类和浓度度环境条件件繁殖苗基基质受损损预防：对难生根根品种，，从激素素种类和和水平、、环境条条件综合合调控掌握种类类操作要要领和质质量要求求切割苗基基部时，，刀要快快，用力力均匀，，平整无无损伤生根苗基基部尽量量不带愈愈伤组织织常用的策策略：a、降低培培养基盐盐浓度；；b、适当增增大IAA用量，不不用或少少用CTK；c、减少糖糖供应、、增加光光照以增增强植株株的自养养能力；；d、对难生生根材料料采取微体嫁接接、化学刺激激等方法处处理；7.过渡苗死死亡率高高原因：组培苗质质量差环境条件件不适管理不精精细预防：培育高质质量组培培苗及时出瓶瓶，尽快快移栽改善环境境条件采取配套套的管理理措施，，加强过过渡苗的的肥水水管理和和病虫害害防治（五）遗遗传稳定定性1.影响遗传传稳定性性的因素素①基因型。。培养材料料的基因因型不同同，发生生变异的的频率也也不相同同。②继代次数数。试管苗继继代培养养次数和和时间是是造成遗遗传变异异的关键键因素，，一般随随继代次次数和时时间的增增加，变变异频率率呈上升升趋势。。③器官发生生方式。。离体器官官5种发生方方式中，，以茎段段、茎尖尖等形成成的丛生生芽、单单芽、不不定芽的的方式繁繁殖，不不易发生生变异或或变异率率极低。。852.降低遗传传变异的的措施①选用不易易发生遗遗传变异异的基因因型材料料；②缩短继代代时间，，限制继继代次数数，继代代一定时时间后，，重新开开始外植植体的继继代培养养；③采用不易易发生遗遗传变异异的增殖殖途径；；④采用适当当的生长长调节物物质和较较低的浓浓度，减减少或不不使用易易引起诱诱变的物物质，及及时剔除除生理和和形态异异常苗。。869、静夜四四无邻，，荒居旧旧业贫。。。1月-231月-23Sunday,January1,202310、雨中黄叶叶树，灯下下白头人。。。13:14:5513:14:5513:141/1/20231:14:55PM11、以我我独沈沈久，，愧君君相见见频。。。1月-2313:14:5513:14Jan-2301-Jan-2312、故故人人江江海海别别，，几几度度隔隔山山川川。。。。13:14:5513:14:5513:14Sunday,January1,202313、乍见见翻疑疑梦，，相悲悲各问问年。。。1月-231月-2313:14:5513:14:55January1,202314、他他乡乡生生白白发发，，旧旧国国见见青青山山。。。。01一一月月20231:14:55下下午午13:14:551月月-2315、比不不了得得就不不比，，得不不到的的就不不要。。。。。一月231:14下下午午1月-2313:14January1,202316、行动出出成果，，工作出出财富。。。2023/1/113:14:5513:14:5501January202317、做前，能够够环视四周；；做时，你只只能或者最好好沿着以脚为为起点的射线线向前。。1:14:55下午1:14下下午13:14:551月-239、没没有有失失败败，，只只有有暂暂时时停停止止成成功功！！。。1月月-231月月-23Sunday,January1,202310、很多事情情努力了未未必有结果果，但是不不努力却什什么改变也也没有。。。13:14:5513:14:5513:141/1/20231:14:55PM