酰胺药相关的耐药性革兰阳性球

与B－内酰胺药相关的耐药性革兰阳性球菌 影响MRSA，MRSCoN PBP 所有B-内酰胺MRE PBP PRSP PBP流感嗜血杆菌 青霉素酶卡它莫拉菌 青霉素酶(PRO-1,2)肠杆菌科的耐药性肺炎克雷伯菌,大肠杆菌 ESBLs3,4代头孢…肠杆菌，枸橼酸杆菌 BushI型酶 3代头孢…….非发酵糖的革兰阴性杆菌嗜麦芽窄食单孢菌 通透性，酶绿脓杆菌 通透性，酶不动杆菌 酶，通透性2023/1/131肠杆菌科的耐药性

主要菌 主要酶类 次主要酶肺炎克雷伯菌,大肠杆菌 ESBLs BushI型酶肠杆菌，枸橼酸杆菌 BushI型酶 ESBLs2023/1/132ESBLs现状

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16种)

71种SHV2-31(IRS1种)

28种OXA10-3121种CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/133B-内酰胺酶的演变特征

TEM1

TEM2

TEM3Gly39Ser238Lys39Gly238Gly104lys1042023/1/134每一点变化可能改变底物的亲和力 噻肟 他啶 安曲南TEM-1 0.125 0.25 0.125TEM-3 32 64 16TEM-7 0.5 64 2CTX-M11 64 2 322023/1/135ESBLTREESHV-2TEM-3 PSE

SME NME KOXY

CTX-M-1 TOHO-1 CITD-1 YENT

BLIP CAKCC ROB-1 PC-1

PER-1 PER-2 CBPA CBLA VEB-1 CPXA中国，台湾日本泰2023/1/136ESBLs现状

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16种)71种SHV2-31(IRS1种)

28种OXA10-3121种CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/137SHV-8SHV-1SHV-10SHV-11SHV-2aSHV-12SHV-2SHV-5SHV-?SHV-9SHV-7SHV-?SHV-4SHV-3SHV-61791793513054or140353524024020520524054or1408or438or43238238SHV突变相关图JHeritageJAC，1999，44，309－3182023/1/138SHV酶族的地理分布

JAC，1999，44，309－318B-酶 首例 年 有报告的国家 pISHV-1 瑞士 1974 7.6SHV-2 德国 1983 中国,丹麦,法国,西班牙,南非 7.6 瑞士,英国 SHV-2a 德国 1986 朝鲜,瑞士 7.6SHV3 法国 1986 英国,美国 7.0SHV4 法国 1987 比利时,葡萄牙,英国,美国 7.8SHV5 智利 1987 澳洲,奥地利,丹麦,埃及,法国,希腊 8.2

意大利,波兰,南非,台湾,英国,美国SHV6 法国 1991 7.6SHV7 美国 1993 7.6SHV8 美国 1990 7.6SHV9,10 希腊 1996,97 8.2SHV11 瑞士 1997 7.6SHV12 瑞士 1997 阿尔几利亚，朝鲜 8.2SHV28 中国浙江 2000 2023/1/139ESBLs现状

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16种)71种SHV2-31(IRS1种)28种OXA10-3121种CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/1310CTX－M族 亚组1 亚组2 亚组3 亚组4

CTX-M-1 CTX-M-2 CTX-M-9 CTX-M-8 MEN-1 TOHO-1 CTX-M-13

CTX-M-3CTX-M-4 CTX-M-14 CTX-M-10 CTX-M-5 CTX-M-15

CTX-M-11CTX-M-6 CTX-M-72023/1/1311CTX-M系列的发现历史(美国基因库资料)发现年, 地址, 发现菌 pI 参考文献CTX-M-1 1990,

德国, E.coli 8.9 11Men-1 1992,意大利, K.oxytoca 8.9 9CTX-M-2 1992,

阿根廷, S.typhimurium 7.9 10Toho-1 1995,

日本 E.coli 7.8 13CTX-M-3 1998,

波兰华沙 C.reundii 8.4 8CTX-M-4 1998,

俄罗斯 S.typhimurium 8.4 12CTX-M-5 1998,拉特维亚 S.typhimurium 8.8 16CTX-M-6 1998,西腊 S.typhimurium 8.4 17CTX-M-7 1998,

西腊 S.typhimurium 8.4 17Toho-2 1998,

日本 E.coli 7.7 14CTX-M-8 2000,

布鲁塞尔 E.Cloacae 7.6 18CTX-M-9 2000,

西班牙 E.coli 8.0 3CTX-M-11 2000,北京协和

K.pneumoniae 8.0 19CTX-M-13-15 2001,广州人民

K.pneumoniae 8.0 202023/1/1312ESBL在东南亚1999TEM-52，SHV-2a,12ECOKL-南韩1997TEM-26CTX-M5 ECOKL-日本

SHV-2,12,241999SHV-2a,5,12VEB-1,ECO,KL- 泰国2000T-10CTX-M-3 ECO,KL- 台湾

SHV-2,5,12,25,261992SHV-2，5，12，EN－,KL-, 中国2000CTX-M-11，13,14,15KL-,ECO

中国2000

SHV-28 中国2023/1/1313不同细菌中的ESBL出现特点P.Hawkey

大肠杆菌 肺克 肠杆菌属 枸橼酸杆菌 1 1 1 CTX-M-13 2 CTX-M-13,TEM1B 2 CTX-M-14,TEM1B 1 1 1 CTX-M-14,SHV12 2 CTX-M-15,SHV11,TEM1B 1 1 SHV12,TEM1B2023/1/1314如何测出ESBLs头孢噻肟＋克拉维酸头孢他啶＋克拉维酸头孢噻肟阿莫西林＋克拉维酸头孢噻肟不同程度水解ESB体外可被棒酸抑制但IRT可抑制棒酸作用出现非TEM

非SHV酶MIC＝8MIC＝12023/1/1315抗生素 MIC（μg/ml） 敏感性

MIC50 MIC90 平均MIC R% I% S%头孢他啶 0.25 0.5 0.369 0 0 100头孢噻肟 0.25 0.25 0.302 0 0 100头孢曲松 0.25 0.25 0.298 0 0 100头孢吡肟 0.25 0.25 0.263 0 0 100氨曲南 0.25 0.25 0.278 0 0 100头孢哌酮/舒巴坦 0.25 1 0.338 0 0 100哌拉西林/他唑巴坦 2 4 2.3 6 0 94亚胺培南 0.25 0.25 0.253 0 0 100头孢美唑 0.5 2 0.871 0 0 100环丙沙星 0.062 2 0.141 8 0 92庆大霉素 1 1 1 2 0 9852株ESBL阴性肺炎克雷伯菌的耐药情况2023/1/1316抗生素 MIC（μg/ml） 敏感性

MIC50 MIC90 平均MIC R% I% S%头孢他啶 4 256 4.9 14 0 86头孢噻肟 32 128 34.8 39 36 25头孢曲松 128 256 62.2 68 7 25头孢吡肟 1 4 1.1 0 7 93氨曲南 16 64 13.5 36 32 32头孢哌酮/舒巴坦 8 32 7.8 7 7 86哌拉西林/他唑巴坦 2 4 2.2 0 4 96亚胺培南 0.25 0.25 0.279 0 0 100头孢美唑 1 128 2.1 11 0 89环丙沙星 0.06 64 0.414 13 1 86庆大霉素 1 512 3.7 8 0 9228株ESBL阳性肺炎克雷伯菌的耐药情况2023/1/131728株ESBL阳性Kpn中两种抗生素的MIC比较25612864321684210.50.3

1 2 2 1 1 1 1 2 2 1 4 2 2 1 1 1

1

1

1

.3 .5 1 2 4 8 16 32 64 128256头孢噻肟mg/L头孢吡肟

mg/LRR2023/1/131828株ESBL阳性Kpn中两种抗生素的MIC比较25612864321684210.50.3

1 1 1 4 2 2 3 3 3 2 1 1

2

1

.3 .5 1 2 4 8 16 32 64 128256头孢噻肟mg/L头孢他啶

mg/LRR2023/1/1319大肠杆菌＋肺炎克雷伯菌头孢他啶mm头孢噻肟2023/1/1320大肠杆菌＋肺炎克雷伯菌头孢曲松头孢他啶mm2023/1/1321

头孢他啶 头孢噻肟 等电点pI值 棒酸抑制结合子CK6 4 64 8.8

+结合子CK7 2 64 5.4、7.6、8.8

+结合子CK8 1 16 8.8

+结合子CK10 1 32 7.6、8.8

+结合子CK12 2 64 7.8、8.8

+结合子CK15 2 32 7.6、8.8

+结合子CK16 0.5 16 7.6、8.8

+结合子CK18 1 64 7.8、8.8

+结合子CK21 2 64 5.4、7.6、8.8

+结合子CK23 2 64 5.4、7.6、8.8

+接合子的MIC值和等电点的结果(1)2023/1/1322

头孢他啶 头孢噻肟 等电点pI值 棒酸抑制结合子CK24 1 32 8.8

+结合子CK25 1 32 7.6、8.8

+结合子CK26 2 64 7.6、8.8

+结合子CK4 4 32 5.4、6.3 +结合子CK14 1 64 5.4、7.6、7.8 +结合子CK22 1 32 7.6、7.8 +结合子CK27 2 64 5.4 +结合子CK13 4 0.25 5.4 +结合子CK17 32 0.25 5.4 +结合子CK20 1 0.25 5.4（条带很淡） +接合子的MIC值和等电点的结果(2)2023/1/1323ESBLs及AmpC的等电点差别等电点

TEMSHVOXACTX-MAmpC

ESBLs

2023/1/1324A胶B胶等电聚焦鉴别质粒介导的

ESBL和持续高产AmpC酶AmpC对照2023/1/1325一种新的对头孢噻肟高活性

pI偏碱性的ESBL到当时为止，CTX-M系列的ESBL有10个根据基因序列，分为3组组内同源性很高，97%以上组间有80%的同源性

已知的CTX-M系列ESBL 同源性1组 1，3,10,11 99%2组 2，4，5,6,7 97%3组 9,13,14,15 97%4组 82023/1/1326为克隆ESBL耐药基因所设计的引物引物名 引物序列 位置TEM5’ 5’-GTATCCGCTCATGAGACAATAACCC-3’ (-60至-36) TEM3’5’-GGCACCTATCTCAGCGATCTGTC-3’ (818至840）SHV5’ 5’-GGGTTATTCTTATTTGTCGC-3’ (-67至-48）SHV3’ 5’-TTAGCGTTGCCAGTGCTC-3’ (844至861）CTX51’ 5’-ATGGTTAAAAAATCACTGCGCC-3’ (1至22）CTX52’ 5’-ATGATGACTCAGAGCATTCG-3’ (1至20）CTX53’ 5’-CGGCCTGTATTTCGCTGTTG-3’ (61至80）CTX3’ 5’-TGGGTTACGATTTTCGCCGC-3’ (853至872）CTX51’系1组的5’端通用引物CTX52’系2组的5’端通用引物CTX53’系3组的5’端通用引物2023/1/1327

氨基酸的位点

39 80 117 122 143 278 289CTX-M-1 E V D L S D NCTX-M-3 E A N L A D D

CTX-M-N G A N P A H ND*缩写：A=丙氨酸、D=天冬氨酸、E=谷氨酸、G=甘氨酸、H=组氨酸、L=亮氨酸、

N=天冬酰胺、P=脯氨酸、S=丝氨酸V=缬氨酸CTX-M-N与CTX-M-1、CTX-M-3突变点的比较2023/1/1328产ESBL的临床株的流行情况 (王辉工作)细菌 菌数 ESBL(+)株 发生率(%)E.coli 44 5 11.4K.pneumoniae 43 17 39.5E.cloacae 50 3 6.0C.freundii 25 2 8.0总计 162 27 16.72023/1/1329结合子PCR和序列分析 (王辉工作)结合子 供体b pI CTX-M3-PCR TEM-PCR

序列分析a 序列分析a2T eco 5.4,8.8 CTX-M3 ND15T kpn 5.4,8.6 CTX-M3 ND25T ecl 5.4,7.0,7.2,8.2,8.8

CTX-M3 ND26T cfr 5.4,8.8 CTX-M3 ND1T eco 5.4,7.6,8.3

ND TEM-1b:eco=E.coli,kpn=K.pneumoniae,ecl=Enterobactercloacae,cfr=Citrobacterfreundiia:ND=Notdone

2023/1/1330大肠杆菌为什么高度耐环丙沙星30株基因分析

（王辉工作）旋转酶突变：gyrA

30/30至少2个突变点，parC 30/30有一个突变点gyrB 6/6无突变点逆泵marAsoxS 无过量表达AcrAB 18/30(60%)

有过量表达膜蛋白OmpF 30/30缺无，减少吸收2023/1/1331肠杆菌科的耐药性

主要菌 主要酶类 次主要酶肺炎克雷伯菌,大肠杆菌 ESBLs BushI型肠杆菌，枸橼酸杆菌 BushI型 ESBLs2023/1/1332产气肠杆菌中的ESBLs(1)

AAC，1998，42(3):596-600在抗生素选择性压力下，易产生稳定高产染色体

1型酶近来证实本菌也可产生质粒型ESBLs从美国Virginia州某教学医院分离出31株产气肠杆菌，29株为SHV4，1株SHV3，1株SHV5，这些质粒可转移至大肠杆菌这31株菌对头孢吡肟，亚胺培南均敏感细菌室也要查肠杆菌属中的ESBL，并报告药敏结果2023/1/1333许多阴沟、产气肠杆菌也产ESBL

JClinMicrobiol.2000;38(2):542,希腊阴沟肠杆菌中18/56(25%)产气肠杆菌中7/12(58%)包含cazR,ctxR,croR,ptzR,4代头孢R不同株耐药谱不同2023/1/1334JournalofClinicalMicrobiologyJuly,1999Volume37,(7):2165-2169

法国23家医院：123株产气肠杆菌21家有流行的克隆株：ESBLTEM-242023/1/1335台湾

JCM2000，38:4320-51999年1－9月菌株1999年1－9月，1210株大肠杆菌查18株产ESBLs、耐CAZ、CTX、FOX菌数目 酶种类10 CTX-M-3、TEM-12 SHV-12、TEM-11 SHV-5、TEM-14 未知、TEM-11 TEM-102023/1/1336吴伟元在协和收集的阴沟肠杆菌中3株质粒上载有CTX-M-32023/1/1337讨论产ESBL的耐药是目前抗生素面临的挑战之一监测产ESBL菌株对临床治疗的重要性一种新的CTX-M型ESBL2023/1/1338AmpC的发展现状

当调节基因发生突变，其作用受到抑制，对3代头孢产生高水平、持续的去遏制的耐药80年代前，都报道为染色体型80年代后，有质粒型的，增加了传播力AmpC种类也在不断增加。2023/1/1339协和医院查24株临床株阴沟肠杆菌中的SSBLs

高产AmpC

+

- + 5 4ESBL - 14 18株E.cloacae(阴性对照)均为阴性2023/1/1340吴伟元的工作6株阴沟肠杆菌持续高产染色体AmpC酶的原因是基因组中AmpD基因发生了突变有一株形成无意义密码子终止了蛋白质的形成2023/1/1341AmpC树

1998年总结FOX-1BIL-1LAT-1阴沟肠杆菌MIR-1粘质沙雷菌AmpCCMY-1MOX-1绿脓杆菌

AmpCAmpC大肠杆菌AmpC枸橼酸杆菌AmpCCMY-2I II IIICMY-1(朝) LAT1-4 MIR-1(美)CMY8-11(台,中国) CMY2,4-,7 ACT-1(美)MOX-1(日本) BIL1ACT-12023/1/1342质粒AmpC的最新分类及流行

I II III CMY-1(朝)

LAT1-4 MIR-1(美)

CMY8-11(台,中国)

CMY2,4-7 ACT-1(美,中国)

MOX-1(日本)

BIL12023/1/1343台湾

JCM2000，38:4320-51999年1－9月菌株1999年1－9月，1210株大肠杆菌查18株产AmpC、耐CAZ、CTX、FOX菌数目 酶种类9 未知、TEM-14 CMY-2、TEM-13 未知、TEM-11 未知、CMY-2、TEM-11 CMY-2、CTX-M-3、TEM-12023/1/1344美国：SHV-5[ESBL]

、BIL-1[AMPC]

在同一质粒上ESBL＋质粒AmpC=SSBLSuperSpectrumBetaLactamases2023/1/1345SSBL鉴定有一定困难，

常规难以进行分子水平的方法

CDCTenoverJCM1999,37:4063-703ESBL+1AmpC一株菌美国某城市、38个实验室产加测试假阴性8个(21％)假阳性7个(18％)2023/1/1346陈轶兰的工作:在大肠杆菌中的12号株,发现可转移的大质粒中含有ACT-1ESBL其意义是BushI型AMP-C基因也可存在与其他肠杆菌科菌中2023/1/1347AmpC树

1998年总结FOX-1BIL-1LAT-1阴沟肠杆菌MIR-1粘质沙雷菌AmpCCMY-1MOX-1绿脓杆菌

AmpCAmpC大肠杆菌AmpC枸橼酸杆菌AmpCCMY-2I II IIICMY-1(朝) LAT1-4 MIR-1(美)CMY8-11(台,中国) CMY2,4-,7 ACT-1(美)MOX-1(日本) BIL1ACT-12023/1/1348产AmpC酶菌的等电点和药敏

JCM2000,38:179310株产AmpC酶菌等电点 9.0-9.1对头孢吡肟MIC90： 0.5 mg/L对亚胺培南MIC90： 0.13 mg/L2023/1/1349头孢吡肟对Bush1组B-内酰胺酶稳定. Km,对头孢菌素的亲和力[uM]细菌 头孢吡肟 头孢他啶 头孢噻肟阴沟肠杆菌 58-180 3-17 0.05-0.2弗劳地枸橼酸杆菌属 159 0.9-1.2 --绿脓杆菌 87－941 3－16 0.03Fung-Tomc,clinicalMicroiologyNewsletter1997;19:129-1362023/1/1350头孢西汀E