中药质量控制新技术

第4章中药安全性质量控制技术研究及应用实例关于中药有毒、无毒的现代认识一、毒的涵义在本草中是一个广义的概念，有毒无毒是指药物对人体有无毒性而言。《周礼》谓：“聚毒药以共医事”，这里的毒药为中药的总称。明代张景岳认为：“药以治病，因毒为能，所谓毒者，因气味之偏也”。

中药毒性的含义：毒性即为偏性（药性）以偏纠偏是中药治疗疾病的基本原则用之得当即可发挥治疗作用用之不当则可毒害机体

两种误解正确理解中药安全无毒，无不良反应中药有毒，全面禁用中药西药都有不良反应利大于弊者，应用弊大于利者，禁用二、中药安全性的观点国家食品药品监督管理局公布2009年全国不良反应/事件报告638996例。1、不良反应病例中：化学药占86.7%，涉及3100多个品种。中药占13.3%，涉及2600多个品种化学药不良反应中，注射剂占61%。中药不良反应中，注射剂占52%。2、说明：化学药（西药）的不良反应超过中药。注射剂的不良反应超过口服药西药注射剂的不良反应超过中药注射剂例1反应停不良反应近10000例（海豹儿）死亡近5000例三、举例说明例22007年美国FDA对十大药品发出最严重的“黑框警告”药品销售额(美元)主要不良反应处理抗抑郁药，包括舍迪林、氟优沙明等2006年206亿服药后出现自杀倾向黑框警告红细胞生成类药品2006年66亿中风、心肌梗塞、死亡黑框警告再普林2006年44亿代谢障碍、肥胖2006年赔偿7亿美元，2007年又赔偿5亿美元文迪雅2006年34亿心脏病发作及死亡率增高黑框警告，并有两药厂吊销此药生产艾可拓2006年30.5亿增加心力衰竭风险黑框警告另有5种畅销药被黑框警告，或被召回或停产小柴胡汤“肺炎”马兜铃酸“肾衰”鱼腥草注射剂“过敏性休克”双黄连注射液“中毒死亡”活血破血中药脏器出血临床严重毒性报道频频中药不良反应事件关于中药毒性的热点问题“马兜铃”的震撼“小柴胡汤”事件的反思“鱼腥草注射液”的风波“马兜铃”的震撼撼1993年比利时时学者首首先发现现2例女性服服中草药药减肥治治疗后，，出现进进行性肾肾间质纤纤维化，，经调查查发现该该减肥药药中加入入了防己己，患者者服用后后血肌酐酐于3个月内升升高一倍倍，肾活活检显示示广泛间间质纤维维化。经药物成成分分析析发现，，减肥胶胶囊中含含有马兜兜铃酸。。至1998年在比利利时有100人患马兜兜铃酸肾肾病。“马兜铃””的震撼撼比利时学学者报告告了服用用含有马马兜铃酸酸的中草草药致急急进性肾肾功能衰衰竭，并并称这种种肾脏损损害为““中草药药肾病(ChineseHerbNephropathy,CHN)”。此后，有有关马兜兜铃酸引引起肾脏脏损害的的问题，，引起了了国内外外学者的的广泛关关注并陆陆续发表表有关研研究报告告。“马兜铃””的震撼撼国内学者者认为，，不宜笼笼统地将将马兜铃铃类植物物引起的的肾脏损损害称作作“中草草药肾病病”。马兜铃酸酸(aristolochicacid，AA)是引起CHN的一类药药物的主主要毒性性成分之之一，故故称为““马兜铃铃酸肾病病”(AAN)较为合适适，目前国外外学者也也应用了了这一病病名。“马兜铃””的连锁锁反应中药马兜兜铃是马马兜铃科科多年生生植物马马兜铃的的成熟果果实。苦、微辛辛，寒，，归肺、、大肠经经。清肺化痰痰，止咳咳平喘。。用量不宜宜过大，，以免引引起呕吐吐。中药马兜兜铃“马兜铃””的连锁锁反应AA是马兜铃铃科马兜兜铃属植植物中所所含的共共同成分分，含有有或可能能含有马马兜铃酸酸的常用用中药品品种为马兜铃、、天仙藤藤、青木木香、广广防己、、关木通通、寻骨骨风、朱朱砂莲、、细辛等。“马兜铃””的连锁锁反应含马兜铃铃酸的常常见中成成药有：：龙胆泻肝肝丸、耳耳聋丸、、八正丸丸、纯阳阳正气丸丸、大黄黄清胃丸丸、当归归四逆丸丸、导赤赤散、甘甘露消毒毒丹、排排石颗粒粒、跌打打丸、妇妇科分清清丸、冠冠心苏合合丸、苏苏合丸、、辛荑丸丸、十香香返生丸丸、济生生桔核丸丸、止嗽嗽化痰丸丸等。“马兜铃”的连锁锁反应我国发生生了龙胆胆泻肝丸丸的“马马兜铃酸酸事件””原因是用用关木通通替代木木通2003年2月28日国家药药品监管管局发出出《关于加强强对龙胆胆泻肝丸丸监督管管理的通通知》木通为木通科科植物三三叶木通通Akebiatrifoliata(Thunb.)Koidz.的木质茎茎藤。功效：泻泻火行水水通血脉。。关木通为马兜铃铃科植物物东北马马兜铃AristolochiamandshuriensisKom.的茎藤。。功效：清清心火，，利小便便，通经经下乳。。“马兜铃””的连锁锁反应2002年6月，美国国食品药药品管理理局宣布布禁售70多种含马马兜铃酸酸的中成成药。香港卫生生署发言言人宣布布：将从从2004年6月1日起，停停止进口口和销售售含有马马兜铃酸酸的中药药材及其其制剂。。欧盟、澳澳洲等国国也禁止止含马兜兜铃的中中药材及及中成药药进口。。“小柴胡汤汤”事件件“小柴胡汤汤”事件件小柴胡汤汤出自张张仲景《伤寒论》组方：柴柴胡、人人参、黄黄芩、大大枣、半半夏、生姜姜、甘草草，共七七味药功效：疏疏畅气机机、调和和胃肠、、和解表表里主治：伤伤寒少阳阳证。往往来寒热热、胸胁胁苦满，苔苔白，脉脉弦“小柴胡汤汤”事件件常用于感感冒、慢慢性肝炎炎、肝硬硬化、急急慢慢性胆胆囊炎、、胆结石石、急性性胰腺炎炎、胸膜膜炎、淋淋巴腺炎炎、胃炎炎、胃溃溃疡等国内外研研究证明明，小柴柴胡汤对对肝癌、、肺癌、、结肠癌癌等肿瘤瘤，预防防其恶性性转化具具有一定定作用“小柴胡汤汤”曾风风靡日本本20世纪70年代初期期，日本本的津村村顺天堂堂制成了了小柴胡胡汤颗粒粒制剂。1976年，日本本京畿大大学东洋洋医学研研究所主主任有地地滋教授授通过４４年研究究，在和和汉药研研讨会上上发表了了“津村村小柴胡胡汤颗粒粒对慢性性肝炎有有治疗效效果”的的报告，，在日本本引起不不同凡响响。“小柴胡胡汤””曾风风靡日日本此后有有21家汉方方厂家家加入入生产产开发发小柴柴胡汤汤行列列，对对小柴柴胡汤汤进行行多方方面的的研究究，呈呈现了了空前前的小小柴胡胡汤热热。20世纪70-90年代小柴胡胡汤在在日本本是使使用最最多的的药物物，广广泛地地应用用于治治疗慢慢性肝肝炎。。估计计每年年服用用小柴柴胡汤汤者有有100万人，，消费费金额额约90亿～130亿日元元。“小柴胡汤汤”事件件1989年12月《日本胸部部疾患学学会杂志志》首次报道道了小柴柴胡汤引引起药物物性肺炎炎１例，，之后其其他报刊刊也陆续续刊登了了小柴胡胡汤引起起肝功损损伤之类类的报道道，对间间质性肺肺炎尤为为重视。。至1999年底，因因服小柴柴胡汤造造成间质质性肺炎炎已升为为188例，死亡亡22例。“小柴胡汤汤”事件件1996年3月，日本本厚生省省在“紧紧急安全全情报””中发出出了“关关于小柴柴胡汤严严重的副副作用——间质性肺肺炎的警警告”。。日本厚生生省2000年1月14日发出““医药品品医疗用用具等安安全性情情报”通通令：全全面禁止止肝炎、、肝硬化化、肝癌癌患者使使用小柴柴胡汤。。“小柴胡汤汤”事件件的反思思药方无错错辨辨证有误误。滥用小柴柴胡汤是是造成悲悲剧的主主因。中医治病病强调辨辨证论治治。不根据症症状反应应使用小小柴胡汤汤，又长长期服用用一个方方药，脱脱离了中中医辨证证论治理理论。“小柴胡汤汤”事件件的反思思中药必须须在中医医理论指指导下应应用。日本的““小柴胡胡汤副作作用死亡亡事件””实质，，是违反反了中医医辨证论论治的原原则，违违反了中中医治病病必辨方方证的原原则。“鱼腥草注注射液””风波目前上市市的含鱼鱼腥草的的注射剂剂鱼腥草注注射液新鱼腥草草素钠氯氯化钠注注射液新鱼腥草草素钠注注射液注射用新新鱼腥草草素钠复方蒲公公英注射射液炎毒清注注射液鱼金注射射液目前在我我国有100多家生产企业业生产这这类产品品临床使用用主要是是抗感染染治疗鱼腥草注注射液不不良反应应鱼腥草注注射液等等7个注射剂剂在临床床应用中中出现了了过敏性性休克、、全身过过敏反应应、胸闷闷、心急急、呼吸吸困难和和重症药药疹等严严重不良良反应，，甚至有有引起死死亡病例例报告。。鱼腥草注注射液不不良反应应从目前收收到的病病例报告告和文献献资料分分析表表明，含含鱼腥草草的注射射剂与其其所引起起的过敏敏性不良良反应，，存在较较明确的的关联性性。过敏性休休克的病病例报告告来源和和涉及企企业、批批号无明明显集中中现象，，说明过过敏反应应可能是是该类品品种的共共性问题题。2006年6月6日，国家家食品药药品监管管局发出出的《关于暂停停使用和和审批鱼鱼腥草注注射液等等7个注射剂剂的通告告》2006年9月：国家家药监局局发出《关于肌注注用鱼腥腥草注射射液等注注射剂恢恢复使用用申报资资料和程程序的通通知（急急件）》（国食药药监办〔2006〕461号）常见中药药中毒原原因1.剂量过大大或长期期持续服服用。2.用法不当当，没有有按中药药的正确确用法使使用。3.炮制不充充分，有有毒成分分含量过过高。4.患者不遵遵医嘱，，自行服服药。5.中药品种种混乱、、有毒药药物管理理不善。。四、中药药中的有有害物质质（一）外外源性污污染：包包括重金金属和农农药残留留；（二）内内源性毒毒性物质质：一般般是指中中药自身身的一些些毒性次次生代谢谢产物。。（一）中中药材中中重金属属元素含含量测定定技术《中国药典典》2010年版（一一部）要要求，在在中药中中通常监监控的有有害重金金属主要要包括铅铅、镉、、汞、铜铜、砷等等。1.前处理方方法1.1湿法消解解所谓湿法法，是指指借助化化学反应应使固体体试样转转化为溶溶液的分分解方法法。通常常是采用用单一或或混合强强酸，在在适当的的温度下下，将样样品中的的有机成成分氧化化破坏，，使金属属化合物物转变为为离子状状态。1.2干法消解解（灰化化法）该法是通通过高温温方法将将试样中中的重金金属元素素游离。。一般是是将样品品先于小小火炭化化至无烟烟，再移移入马弗弗炉中高高温灰化化完全，，冷却，，用稀酸酸溶解灰灰分，定定量转移移至量瓶瓶中。1.3压力消解解罐消解解法（高高压密封封溶样法法）样品仍采采用强酸酸消解，，与湿法法消解不不同的是是样品要要置于聚四氟乙乙烯罐内密封封，置于于烘箱内内在一定定温度下下保持一一定时间间。1.4微波消解解法将样品和和相应的的试剂放放置于高高温，高高压密闭闭样品罐罐或敞口口容器中中。利用用微波加加热容器器中的消消解液，，使各样样品快速速溶解的的湿法消消化。2.测定方法法2.1原子吸收收光谱法法（AAS）该法已被被《中国药典典》2010年版收载载为测定定中药材材中重金金属的法法定方法法之一。。根据各各种元素素的性质质及原子子化的方方法不同同，该法法又可分分为火焰焰原子化化法、非非火焰原原子化法法和低温温原子化化法。（1）火焰原原子化法法：该法是利利用化学学火焰使使物质分分解并原原子化的的方法。。可用于于铜、铁铁、锌、、锰、钙钙等常量量元素的的检测，，缺点是是原子化化效率不不高，火火焰中中自由原原子浓度度很低，，灵敏度度低。（2）非火焰焰原子化化法该法是利利用石墨管高温下使使样品原原子化通通过炉内内光路产产生吸收收的原原理来测测定的。。与火焰原原子化法法相比，，石墨炉炉原子化化法样品品消耗少少，特别别适用于于分析非非常少量量的试样样，灵敏敏度高；；缺点是是石墨管管昂贵，，不能同同时测定定多个元元素。该该法可用用于除汞以外外的重金属属元素测测定。（3）低温原原子化法法该法是利利用化学学反应方方法预处处理试样样，在室室温至摄摄氏几百百度的条条件下使使其原子子化，因因此又称称为化学学原子化化法。①冷原子子化法：：该法专专用于汞元素的测定。。将样品消消解后还还原生成成汞，在在汞蒸气气发生器器中，用用载气将将汞蒸气气吹出，，通过石石英吸收收池的汞汞蒸气对对汞空心心阴极灯灯的辐射射产生吸吸收，从从而进行行定量分分析。②氢化物物原子化化法：一一般用于于铅、砷砷、汞等等元素的的测定。。将气态分分析物引引入石英英炉内在在较低温温度下实实现原子子化的一一种方法法。它主主要是与与蒸气发发生法配配合使用用。2.2原子荧光光光谱法法（AFS）原子荧光光光谱是介介于原子发射射光谱和原子吸收收光谱之间的光光谱分析析技术。。它的基基本原理理是基态原子子（一般蒸蒸汽状态态）吸收收合适的的特定频频率的辐射射而被被激激发发至至高高能能态态，，而而后后激激发发过过程程中中以以光辐辐射射的形形式式发发射射出出特特征征波长长的荧荧光光，，通通过过测测定定原原子子荧荧光光的的强强度度即即可可求求得得样样品品中中该该待待测测元元素素的的含含量量。。2.3电感感耦耦合合等等离离子子体体原原子子发发射射光光谱谱法法（（ICP-AES）本法法为为《中国国药药典典》2010年版版附附录录新新收收载载的的方方法法。。基本本原原理理是是样样品品由由载载气气引引入入雾雾化化系系统统进进行行雾雾化化后后，，以以气气溶溶胶胶形形式式进进入入等等离离子子体体的的中中心心通通道道，，在在高高温温和和惰惰性性气气氛氛中中被被充充分分蒸蒸发发、、原原子子化化、、电电离离和和激激发发，，使使所所含含元元素素发发射射各各自自的的特特征征谱谱线线。。根根据据各各元元素素特特征征谱谱线线的的存存在在与与否否，，鉴鉴别别样样品品中中是是否否含含有有某某种种元元素素（（定性性分分析析）；；由由特特征征谱谱线线的的强强度度测测定定样样品品中中相相应应元元素素的的含含量量（（定量量分分析析）。。2.4电感感耦耦合合等等离离子子体体质质谱谱法法（（ICP-MS）与ICP-AES相比比，，该该法法最最大大的的优优点点是是检检出出限限极极低低，，达达到到了了pg.ml-1级的的水水平平。。其其次次分分析析精精密密度度高高、、分分析析速速度度快快、、可可同同时时测测定定含含量量差差别别较较大大的的各各组组分分，，可可用用于于绝绝大大多多数数重重金金属属元元素素的的定定性性分分析析和和定定量量分分析析，，同同时时进进行行多种种元元素素及及同同位位素素的测测定定，，是是目目前前痕痕量量元元素素分分析析领领域域中中最最先先进进的的方方法法。。2.5其他他方方法法（1）比比色色法法：：主主要要用用于于重金金属属总总量量和和总总砷砷的测测定定。。（2）紫紫外外分分光光光光度度法法：：该该法法是是利利用用重重金金属属元元素素与与试试剂剂反反应应后后显显色色，，在在紫紫外外光光下下有有吸吸收收的的原原理理来来测测定定重重金金属属的的含含量量。。多多用用于于铅铅、、汞汞的的测测定定。。（3）高高效效液液相相色色谱谱法法（4）极极谱谱法法（5）免免疫疫学学方方法法（6）激激光光诱诱导导击击穿穿光光谱谱法法第二二节节中中药药中中农农药药残残留留测测定定技技术术一.前处处理理技技术术中药药材材的的提提取取与与净净化化：目目的的是是将将中中药药材材中中残残留留的的微微量量农农药药残残留留物物提提取取出出来来，，又又不不能能引引入入新新的的溶溶剂剂污污染染。。实实际际上上是是分分离离与与净净化化技技术术的的综综合合应应用用。。1.超临临界界流流体体萃萃取取技技术术（（SFE）超临临界界流流体体，，是是指指温温度度和和压压力力处处于于临临界界温温度度和和临临界界压压力力之之上上的的流流体体。。常常用用的的萃萃取取剂剂是是二二氧氧化化碳碳，，适适宜宜非极性性和极极性较较小的的物质质的提取取。若若要提提取极极性大大的成成分，，可以以加入入适宜宜的夹带剂剂（如甲甲醇、、乙醇醇和水水等））。2.固相萃萃取（（SPE）和固固相微微萃取取技术术（SPME）固相萃萃取：是利利用固固体吸吸附剂剂将液液体样样品中中的目目标化化合物物吸附附，使使其与与样品品的基基体和和干扰扰化合合物分分离，，然后后再用用洗脱脱液洗洗脱或或加热热解吸吸附，，达到到分离离和富富集目目标化化合物物的目目的。。固相微微萃取取法：根据据吸附附-解吸原原理，，在进进样器器的针针头部部分涂涂一层层固定定液或或键合合一层层固定定相，，直接接将其其插入入液体体样品品或样样品的的顶空空，萃萃取、、浓缩缩有机机化合合物后后，将将进样样器直直接插插入GC进样口口加热热，使使被测测物质质进入入分析析器进进行测测定。。主要要和气气相色色谱以以及液液相色色谱联联用。。3.加速溶溶剂萃萃取（（ASE）加速溶溶剂萃萃取是是在较较高的的温度度（50~200℃℃）和压压力（（1000~3000psi或10.3~20.6MPa）下用用溶剂萃萃取固体或或半固固体样样品的的新颖颖样品品前处处理方方法。。优点：有机机溶剂剂用量量少，，10g样品一一般仅仅需15ml溶剂；；快速速，完完成一一次萃萃取全全过程程的时时间一一般仅仅需15min；基体体影响响小；；萃取取效率率高，，选择择性好好，已已进入入美国国EPA标准方方法；；且使使用方方便、、安全全性好好，自自动化化程度度高。。4.凝胶渗渗透色色谱（（GPC）凝胶渗渗透色色谱基基于体体积排排阻的的分离离机制制，是是利用用有机机溶剂剂和疏疏水凝凝胶大大分子子从样样品中中提取取分离离不同同分子子量干干扰物物的一一种常常用有有效分分离技技术。。被测量量的高高聚物物溶液液通过过一根根内装装不同同孔径径的色色谱柱柱，柱柱中可可供分分子通通行的的路径径有粒粒子间间的间间隙（（较大大）和和粒子子内的的通孔孔（较较小））。当当聚合合物溶溶液流流经色谱柱柱时，较较大的的分子子被排排除在在粒子的小孔孔之外外，只只能从从粒子子间的的间隙隙通过过，速速率较较快；；而较较小的的分子子可以以进入入粒子子中的的小孔孔，通通过的的速率率要慢慢得多多。经经过一一定长长度的的色谱谱柱，，分子子根据据相对分分子质质量被分开开，相相对分分子质质量大大的在在前面面（即即淋洗洗时间间短）），相相对分分子质质量小小的在在后面面（即即淋洗洗时间间长））。二、定定量技技术气相色色谱法法定义：以惰性气气体为流动动相，，以固固定液液或固固体吸吸附剂剂作为为固定定相的的色谱谱法称称为气气相色色谱法法。以固定定液作作为固固定相相的色色谱称称为气液色色谱，以固固体吸吸附剂剂作为为固定定相的的色谱谱称为为气固色色谱。原理：：使混合合物中中各组组分在在两相相间进进行分分配,其中一一相是是不动动的(固定相相),另一相相(流动相相)携带混混合物物流过过此固固定相相,与固定定相发发生作作用,在同一一推动动力下下,不同组组分在在固定定相中中滞留留的时时间不不同,依次从从固定定相中中流出出。通常采采用的的检测测器有有：热导检检测器器，火焰焰离子子化检检测器器，氦氦离子子化检检测器器，超超声波波检测测器，，光离子子化检检测器器，电子子捕获获检测测器，，火焰光光度检检测器器，电化化学检检测器器，质谱检测器器等。。《中国药药典》2010年版一一部附附录收收载气气相色色谱法法用来来测定定农药药残留留量，，包含含了3中有机机氯类类、12种有机机磷类类和3种拟除除虫菊菊酯类类农药药。定量分分析与与方法法学验验证生药中中化学学成分分的定定量分分析是是评价价生药药质量量的重重要手手段。。常用用：分分光光度法法和色色谱法法。用于生药药定量分分析的方方法必须须进行验验证，以以证明采采用的含含量测定定符合相相应的分分析要求求。验证证内容：：准确度度、精密密度、专专属性、、检测限限、定量量限、线线性、范范围和耐耐用性。。（一）准准确度指用该方方法测定定的结果果与真实实值或参参考值接接近的程程度，一一般用回回收率表表示。应应在规定定的范围围内测试试。测定方法法的准确度度用已知纯纯度的对对照品做做加样回回收率测测定，加加入对照照品的量量要适当当对照品的的加入量量与供试试品中已已知含有有量之和和必须在在标准曲曲线线性性范围之之内。数据要求求同一浓度度供试品溶溶液，6个测定定结果或或3不同同浓度分分别制备备3份不不同溶液液。一般中间间浓度为为所取供供试品含含量的100%水平，80%120%（二）精精密度一般用偏偏差、标标准偏差差或相对对标准偏偏差表示示。重复性（（批内精精密度））系指同一一分析人人员在同同一条件件下对同同一批样样品至少少制备6份以上或或3个不同浓浓度分别别制备3粉供试品品溶液（（9份），进进行测定定，计算算相对标标准偏差差（RSD），RSD值一般要要求不大大于5。中间精密密度系指在同同一个实实验室，，在不同同时间由由不同分分析人员员用不同同设备测测定结果果之间的的精密度度。考察察随机变变动因素素对精密密度的影影响。3.重现性系指在不不同实验验室由不不同分析析人员测测定结果果之间的的精密度度。（三）专专属性又称为选选择性性。通常以不不含被测测成分的的供试品品作为空空白样品品进行试试验来说说明。（四）检检测限供试品中中被测成成分能被被检出的的最低浓浓度或最最小量，，无需准准备定量量。（五）定定量限指供试品品中被测测成分能能被定量量测定的的最低量量，反应应分析方方法是否否具备灵灵敏的定定量检测测能力。。（六）线线性范围（八）耐耐用性系指在测测定条件件有小的的变动时时，测定定结果不不受影响响的承受受程度。。二、定量量技术2.高效液相相色谱法法（HPLC）定义：高效液液相色谱谱是以液体为流动相，采用高高压输液液系统，，将具有有不同极性的单一溶剂或不同比比例的混合溶剂剂、缓冲液液等流动动相泵入入装有固固定相的的色谱柱，在柱内内各成分分被分离离后，进进入检测测器进行行检测，，从而实实现对试样的分析。。特点：高压、高高效、高高速。尤其适合合于高沸沸点、受受热不稳稳定易分分解的农农药残留留检测，，如取代代脲、氨氨基甲酸酸酯、黄黄酰脲类类农药。。2022/12/29根据流流动相相和固固定相相的相相对极极性的的不同同可以以将HPLC分为2种类类型，，即正相和反相色谱。。在正正相液液相色色谱中中，流流动相相的极极性小小，通通常为为非极极性的的烷烃烃，固固定相相的极极性大大，通通常为为硅胶胶、纤纤维素素等；；在反反相液液相色色谱中中，流流动相相的极极性大大，通通常为为水一一甲醇醇溶液液、水水一乙乙氰溶溶液等等，固固定相相通常常为键键合的的C18、C4等,极极性较较弱。。反相液液相色色谱的的应用用相对对广泛泛。2022/12/29液相色色谱的的定性依依据是保留留时间间的相相对性性，通通常相相对误误差不不能大大于5％。。定量量参数数常常常采用用峰高高、峰峰面积积、相相对峰峰高、、相对对峰面面积等等。定量方方法通常采采用外标法法、内标标法和和面积积归一一化法法。外标法法可分分为外外标一一点法法、标标准曲曲线法法等。。2022/12/29l、外标一点法法(直接比比较法)用与样品类类似的浓度度的标准溶溶液，等量量进样，比比较它们的的峰高或峰峰面积。Cx一未知样浓浓度Cd－标样浓度Ax－未知样峰面面积A－标样峰面积积2022/12/292、外标法法(工作曲曲线法)Cx一未知样浓浓度Ax－未知样峰面面积Kx一直接斜率率（1）柱切换高高效液相色色谱技术柱切换技术术是指用阀阀来改变流流动相走向向和流动相相系统，从从而使洗脱脱液在一特特定时间内内从预处理理柱进入到到分析柱的的在线固固相分离技技术。优点：①提提高色谱系系统的分辨辨率和选择择性；②使待测组组分富集，，提高灵敏敏度；③在一个网网络系统中中实现多个个分离目标标；④在线衍生生化，提高高灵敏度和和重现性；；⑤在线净化化样品，样样本不需预预处理或预预处理大大大简化，可可直接进样样分析。（2）高效液相相色谱柱后后衍生荧光光法该方法主要要是针对氨氨基甲酸酯酯类农药。。衍生化是药药物分析中中常用的一一种分析手手段。其原原理是待测测样品与衍衍生化试剂剂定量快速速反应，并并加入特定定的功能的的基团生成成符合检测测要求的衍衍生化物，，通过检测测生成衍生生化物的量量间接测定定待测样品品的量。通过合适的的化学反应应,生成特殊衍衍生化物，，1.改变待测物物的色谱保保留特性以以改善分离离度；2.改变待测物物的检测特特性，以增增加其对检检测器的响响应（例：紫紫外标记、、荧光标记记、电化学学标记）；；3.生成稳定定的衍生生化物，，改善待待测物的的不稳定定性（例：-SH基团易氧氧化的问问题可通通过酰化化来解决决）。化学衍生生化的目目的:HPLC化学衍生生化分类类在线化学学衍生化化★是否与HPLC系统联机机离线化学学衍生化化柱前衍生生化★发生衍生生化发应应的先后后柱后衍生生化柱前衍生生化在色谱分分离前，，预先将将样品制制成适当当的衍生生物，然然后再进进入色谱谱柱进行行分离检检测。优点：（1）对用作作流动相相的溶剂剂体系没没有限制制；（2）反应条条件，反反应速率率不受限限制；（3）通过选选择合适适的试剂剂以及萃萃取方法法，可以以消除许多多干扰；；（4）过量溶溶剂、试试剂容易易除去；；（5）转变成成合适的的衍生物物，可使使分离度度改进。。缺点:（1）操作过过程繁琐琐，容易易影响定定量准确确性。（2）当一个个复杂组组分样品品经过衍衍生化反反应后，有可可能产生生多种衍衍生化产产物给色色谱分离带带来困难难。柱后衍生生化将样品先先注入色色谱柱，，按选定定的色谱谱条件使使样品组组分得以以分离，，当各个个组分从从色谱柱柱流出后后，分别别与衍生生化试剂剂相遇，，在一定定的反应应条件下下，生成成具有某某种检测测特性的的衍生化化产物再再进入检检测器。。要求：（1）对流动动相的选选择更严严格，必必须考虑虑衍生化化试剂、反反应产物物的溶解解度，以以及它们们与流动相可能能发生的的副反应应；（2）由于在在高效液液相色谱谱中采用用高流速速，因此此反应速率率必须很很快（小小于30s）；（3）检测器器对衍生生化试剂剂不能有有响应。。柱后衍生生流程图图如下：：泵进样阀色谱柱衍生化试试剂泵反应器检测器记录仪紫外衍生生化荧光衍生生化电化学衍衍生化手性衍生生化固定化酶酶反应器器（IMER）衍生化反反应类别别：荧光衍生生反应在液相色色谱法中中，荧光光检测器器是一种种高灵敏敏度、高高选择性性的检测测器，比比紫外检检测器的的灵敏度度要高10到1000倍，因此此，为了了检测痕痕量非荧荧光物质质，常将将它与荧荧光衍生生化试剂剂反应，，生成荧荧光物质质，然后后用荧光光检测器器检测．．3.色谱-质谱联用用方法色谱技术术的特点点在于其其优越的的分离性性能，而而质谱具具有很强强的定性性能力，，可以提提供大量量的分子子结构信信息。将将色谱-质谱联用用技术用用于农药药残留量量检测，，特别是是应用于于农药代代谢物、、降解物物的检测测和多残残留检测测等具有有突出的的特点。。适用于于