大肠菌群的检测

大肠菌群的检验大肠菌群的存在早在19世纪末就有人用检查大肠杆菌的办法来确定水中有无伤寒沙门氏菌。水受到沙门氏菌的污染，有时水中该菌的数量很少，不易直接检查出来。若水中检出一定数量的大肠杆菌，则说明水已被粪便污染正常粪便中的细菌种类很多，但符合理想指标菌条件和特性的细菌主要有3类群，即大肠杆菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌。在粪便中大肠杆菌数量最多，每克粪便中可达30亿个。大肠杆菌容易引发的疾病：肠道外感染多为内源性感染，以泌尿系感染为主，如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者，大肠杆菌可侵入血流，引起败血症。早产儿，尤其是生后30天内的新生儿，易患大肠杆菌性脑膜炎。急性腹泻某些血清型大肠杆菌能引起人类腹泻。其中肠产毒性大肠杆菌会引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。腹泻常为自限性，一般2～3天即愈，营养不良者可达数周，也可反复发作。肠致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死。细菌侵入肠道后，主要在十二指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。此外，肠出血性大肠杆菌会引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。检样稀释乳糖胆盐发酵剂培养（36+1℃），（24+2）h产气伊红美篮琼脂平板培养（36+1）℃，（24+2）h乳糖胆盐发酵管培养（36+1℃）（24+2）h不产气大肠菌群阴性报告革兰氏染色大肠菌群的检验程序革兰氏阴性无芽孢杆菌革兰氏阳性大肠菌群阴性报告产气不产气大肠菌群阳性报告大肠菌群阴性报告测定大肠菌群检验常用器材

测定大肠菌群多用培养基和器材主要有单料乳糖胆盐，伊红美蓝琼脂（EMB），EC肉汤，磷酸盐缓冲溶液，生理盐水，革兰氏染色液，恒温培养箱，恒温水浴锅，天平，显微镜，均质器或乳体，温度计，灭菌平皿（直径90mm），试管，广口瓶或三角瓶，吸管，载玻片，接种针，玻璃珠，酒精灯，试管架。一.检样稀释取样及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成均匀稀释液。同一稀释度在菌落总数测定的同时接种于乳糖胆盐复发酵管。1)以无菌操作取检样25mL（g），放于225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。固体取样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~1000r＼min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。2用以灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有3mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。检验方法另取1mL灭菌试管，按上项操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释液1次即换用1支10mL吸管。二.乳糖发酵试验1）根据食品卫生标准要求或对检样污染程度的估计，选择3个稀释度，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵管。接种量在1mL以上者用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及以下者用单聊乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管。置（36+1.36-1）℃恒温箱内，培养（24+2.24-2）h，如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性。经上述所说，如有产气者，将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂（EM琼脂）平板上划线分离，然后置（36+136-1）℃恒温箱内，培养18~24h后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。大肠杆菌菌落证实试验挑取可疑大肠菌落1~2个进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌时，挑取该菌落的另一部分，接种乳糖复发酵管。置（36+1.36-1）℃恒温箱内，培养22~26H，观察产气情况。凡乳糖管产酸产气，证实有大肠菌群存在，即可报告为大肠菌群阳性。大肠菌群可疑菌落的特点（1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落。（2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落，（3）淡紫黑色，中心色泽深的菌落。注意事项：

1：如果平板上典型菌落甚少或均不够典型，则应多挑菌落做证实实验，以免出现假阳性。2：在检验中应选用伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌落大多呈紫黑色，有金属光泽或无金属光泽。3