无菌工艺和无菌检验课件

无菌工艺和验证

无菌工艺和验证

指导思想：产品质量是检验出来的标志：抽样检验理论关注点：样品检验质量管理基本方法一：指导思想：产品质量是检验出来的质量管理基本方法一：2抽样检验的应用

抽样检验：通过样本，推断整体。抽样检验是数理统计的分支，它用尽量少的样本尽可能反映全部产品的质量。抽样检验的应用3抽样检验的应用

抽样检验：通过样本，推断整体。抽样检验是数理统计的分支，它用尽量少的样本尽可能反映全部产品的质量。抽样检验的应用4样品抽样检验的结果是判别药品质量的唯一法定依据。样品按USP(美国药典)和USP-NF（国家处方集）的要求检验合格，即判合格；反之，则判为不合格。无菌工艺和无菌检验课件5FDA的观点：一个科学的、庞大的抽样计划，通过扩大抽样检查的办法可以实现保证药品质量的目标。FDA的观点：6FDA面临新的挑战-样品是否有代表性-抽样检验不可能发现药品生产中的污染/

混淆-低剂量高活性药物的混合是否均匀-无菌药物的灭菌是否有效……FDA面临新的挑战7抽样检验的困境：抽查批号的产品、其相应的原料、半成品及成品均经过抽样检验且检验结果符合标准，抽样和检验方法方面毫无问题。但FDA查不到所采用的工艺能始终如一地生产出符合规定质量标准产品的证据。抽样检验的困境：8FDA官员的感慨：“我们这些药政管理的官员，经历了许多年的经验和教训之后终于明白，我们在制订法规过程中并没真正研究过工艺过程的本身，……我们以往的立足点是在质量检验上，而不是在质量保证上”。FDA官员的感慨：9FDA的结论：“工艺验证应当是我们的立足点。”产品质量是生产出来的，不是靠检验来的。FDA的结论：10无菌无菌工艺无菌检验无菌工艺和无菌检验无菌无菌工艺和无菌检验11没有活体微生物（细胞繁殖体）的存在。无菌：无菌：12

无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和无

菌原料药，包括注射剂、眼用制剂、无菌软膏剂、

无菌混悬液等。例如：大容量注射剂、小容量注射剂、无菌粉针、无菌冻干粉针、无菌眼药水、无菌混悬剂、无菌原料药等。无菌药品：无菌药品：131、湿热灭菌法2、干热灭菌法3、辐射灭菌法4、气体灭菌法5、过滤灭菌法6、无菌生产工艺如何达到无菌？

《中国药典》2010年版附录ⅩⅤⅡ

灭菌法1、湿热灭菌法如何达到无菌？

《中国药典》2010年版141.残存概率法（Bioburdenbasedprocess）

2.过度杀灭法（Overkillprocess）3.生物指示剂/残存概率相结合的灭菌工艺（Biologicalindicator/bioburdencombinedprocess）USP灭菌方式:

32版1222章1.残存概率法（Bioburdenbasedproces15

以生物负荷（产品灭菌前微生物污染水平）为基础的方法，用于生产过程中很少检出芽孢，产品稳定性较差，只能适度灭菌的产品。残存概率法

Bioburdenbasedprocess以生物负荷（产品灭菌前微生物污染水残存概率法

16

适用于稳定性很好，能经受苛刻灭菌条件的产品。

过度杀灭法

Overkillprocess适用于稳定性很好，能经受苛刻灭菌条过度杀灭法

O17过度杀灭法VS残存概率法过度杀灭法VS残存概率法18灭菌抉择树：能否121℃、15分钟湿热灭菌能否采用F0≥8的湿热灭菌，SAL≤10-6否121℃、15分钟湿热灭菌是采用F0≥8的湿热灭菌，SAL≤10-6能否对药液除菌过滤否是无菌原料、无菌配制、无菌灌封药液除菌过滤及无菌灌封否是灭菌抉择树：能否121℃、15分钟湿热灭菌能否采用F0≥8的19灭菌工艺的选择：灭菌工艺的选择：20灭菌工艺与生物负荷的关系：灭菌工艺与生物负荷的关系：211、终端灭菌工艺

2、无菌生产工艺无菌药品的生产工艺1、终端灭菌工艺无菌药品的生产工艺22可以最后用热力学方法除去微生物的生产工艺。

如：大容量注射剂、水针等产品生产。终端灭菌生产工艺可以最后用热力学方法除去微生物的生产工艺。终端灭菌生产工艺23严格原料微生物标准严格控制微生物污染、制定灭菌前生物负荷的限度标准控制药液存放温度和时间药液取样、污染菌的鉴别目的：控制生物负荷终端灭菌生产工艺的质量保证：严格原料微生物标准终端灭菌生产工艺的质量保证：24空载热分布满载热分布热穿透试验微生物挑战试验……终端灭菌生产工艺验证要点：空载热分布终端灭菌生产工艺验证要点：25过滤除菌工艺无菌分装工艺如：冻干粉针、粉针、无菌原料药、生物疫苗、血液制品等产品生产。无菌生产工艺：过滤除菌工艺无菌生产工艺：26对进入无菌区的物料充分灭菌，消除污染源。所有接触经除菌过滤的药液的设备都经过清洁和灭菌验证避免人员直接接触除菌后的药液、容器防止人员活动干扰层流目的：以防止污染为目的，消除生产工艺中潜在污染的各种可能性。无菌生产工艺的质量保证：对进入无菌区的物料充分灭菌，消除污染源。无菌生产工艺的质量保27终端灭菌工艺VS无菌生产工艺终端灭菌工艺VS无菌生产工艺28无菌工艺模拟或培养基灌装验证无菌生产工艺工艺验证要点：无菌工艺模拟或无菌生产工艺工艺验证要点：29ProcessSimulationTestingforAsepticallyFilledProducts

无菌灌装产品的工艺模拟试验解读：PDATechnicalReportN0.22

ProcessSimulationTestingfor评价无菌工艺操作能力最有效的方法。完全模拟工艺配制和灌装工艺，用一种可以促进微生物生长的培养基替代无菌产品。确认无菌生产工艺的无菌保证水平（SAL）的方法。工艺模拟实验（培养基灌装）评价无菌工艺操作能力最有效的方法。工艺模拟实验（培养基灌装）31证明采用无菌工艺生产无菌产品的能力无菌工艺人员的资质和保证符合现行GMP要求无菌工艺模拟的目的：证明采用无菌工艺生产无菌产品的能力无菌工艺模拟的目的：32安装干扰容器尺寸容器的密封灌装速度灌装体积灌装持续时间生产批量、工艺模拟批量工艺模拟实验原理1安装工艺模拟实验原理133手动灌装培养条件培养基的选择容器检查惰性气体设施考虑人员考虑工艺模拟实验原理2手动灌装工艺模拟实验原理234工艺人员设备环境

培养基灌装验证包含：工艺培养基灌装验证包含：35模拟工艺的定义:使用促微生物生长的培养基，及与无菌物料生产相似的方法评估无菌工艺的方法。包括工艺的所有步骤，从药物成分、赋形剂（如果有）、容器、密封的灭菌到产品的密封。在无菌灌装之前无菌药物容器和密封后放置的最长时间必须包括在模拟范围内。工艺模拟工艺的定义:使用促微生物生长的培养基，及与无菌物料生产相36非无菌物料进入无菌区域的“切入点”。未经灭菌或消毒的物料，灭菌后进入灌装间的保护手工操作进入灌装间前的防护。设备：非无菌物料进入无菌区域的“切入点”。设备：37生产环境始终符合无菌产品生产的要求保证系统和设备按照设定的目的正常运转无菌保证—环境监测生产环境始终符合无菌产品生产的要求无菌保证—环境监测38取样点的选择取样频率行动限和警戒线方法学和数据解释GMP附录1：无菌药品第十条（二）：

A级区监测的频率及取样量，应能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。环境监测：取样点的选择环境监测：39最长的无菌生产、操作时间无菌生产中每次发生的干预事件冷冻干燥设备的无菌组装人员数目和活动无菌条件的转移交接班变化、中断和衣物更换模拟的无菌工艺应该包含（1）：

（FDA的建议）最长的无菌生产、操作时间模拟的无菌工艺应该包含（1）：

（F40无菌设备连接和断开无菌样品的收集生产线速度和配置重量检查设备、容器密闭检查SOP的特殊规定模拟的无菌工艺应该包含（2）：

（FDA的建议）无菌设备连接和断开模拟的无菌工艺应该包含（2）：

（FDA的41灭菌系统洁净环境系统公用辅助系统生产控制系统设备清洗模拟工艺还涉及：灭菌系统模拟工艺还涉及：42（一）选择标准：

促生长能力、低选择性、澄明度、中等浓度和过滤性。

培养基：（一）选择标准：培养基：43促生长能力

支持少量微生物的复壮和生长，10-100CFU或更少。低选择性

1、适应广谱微生物的生长，细菌、霉菌和酵母菌都可以生长。

2、企业自己的菌种库（环境中分离的微生物）培养基：促生长能力培养基：44澄明

清澈，如果发生浑浊，能够观察到

中等浓度

遵循供应商的建议。其他浓度或经过验证过滤性

培养基应当能够穿过生产过程所使用的同样级别的过滤器培养基澄明培养基45（二）培养基灵敏度检查：1、将无菌培养基分装到一定数量的无菌试管。2、制备好的菌悬液（枯草杆菌、白色念珠菌）

10-100cfu/mL。3、加入上述菌悬液1mL进准备好的培养基内，每份培养基至少加2管。4、培养7天。5、每种培养基50%发生浑浊，长菌。培养基：（二）培养基灵敏度检查：培养基：461、培养基储罐灭菌，移入无菌区域。2、灭菌后的连接件、阀门、过滤器等和培养

基储罐无菌连接。3、灭菌后的培养基经过滤器和储罐无菌连接。4、储罐另一端和灌装机相连，连接时无菌的。〈USP〉培养基的制备：1、培养基储罐灭菌，移入无菌区域。培养基的制备：471、培养基的无菌检验

灭菌后，灌装前的培养基取样，进行无菌检验。确认培养基是无菌的

微生物检验：1、培养基的无菌检验微生物检验：482、瓶子、瓶盖和胶塞的无菌检验

灌装前瓶子、瓶盖和胶塞取样，进行无菌检验。确认进入灌装线的瓶子、瓶盖和胶塞是无菌的。

微生物检验：2、瓶子、瓶盖和胶塞的无菌检验微生物检验：493、灌装后培养基的灵敏度检验

同培养基的灵敏度检验。确认灭菌后的培养基的灵敏度符合规定。

微生物检验：3、灌装后培养基的灵敏度检验微生物检验：504、瓶子培养和破损检查

灌装培养基的瓶子编号后，按照预定的培养温度培养至14天。记录培养结果。

微生物检验：4、瓶子培养和破损检查微生物检验：511、FDA：

20-35℃，目标值±2.5℃，不少于14天；如选择两个温度，则每一温度下至少培养7

天，从低温开始。2、PIC：

20-35℃下至少14天。或先20-25℃下7天，然后30-35℃下7天。培养时间：1、FDA：培养时间：52

发现微生物生长的瓶子污染百分比=100%

灌装瓶数–破损瓶数评估结果：评估结果：53生产部人员

灌装人员（灌装、胶塞、清洗瓶等）、清洁人员质量部人员

QA（IPC、监测人员）、QC(取样、检验)工程部人员运行人员、维护人员人员：生产部人员人员：54上岗前：至少参加一次无菌工艺模拟的考核，为其上岗资质的重要内容。年度资质确认：无菌岗位操作员工每年至少参加一次无菌工艺的模拟。

人员资质上岗前：至少参加一次无菌工艺模拟的考人员资质55严禁“非无菌”仪器或器材接触无菌材料。缓慢、有目的的移动。操作中身体始终处于A级层流之外无菌操作保证无菌工作服不受污染……无菌操作人员行为：严禁“非无菌”仪器或器材接触无菌材料。无菌操作人员行为：56接受培训人员

生产部人员、质量部人员、工程部人员人员培训：接受培训人员人员培训：57首次验证

至少连续成功灌装3个批次。年度验证

每条生产线每年不得少于2次。

6个月生产期间没有有目的停止生产的无菌生产区域生产线退役验证

生产线退役前必须进行一次无菌工艺模拟。验证频率：首次验证验证频率：58环境监测数据水系统检验数据无菌检验数据关键的工艺变更、空调系统变更以上趋势的评估，决定了周期性培养基灌装验证的次数。培养基灌装验证的次数：环境监测数据培养基灌装验证的次数：59

方案、报告和调查无菌工艺和无菌检验课件60定义被模拟的工艺定义使用的房间定义使用的灌装线和设备使用的容器和密封类型线速度灌装单位的数量干扰和中断的数目和类型一起参加的人数使用的培养基模拟方案的内容1：定义被模拟的工艺模拟方案的内容1：61灌装到容器内的培养基体积培养条件同步的环境监测批记录的复印件全部测试的可接受标准最终报告的描述选择“最差条件”的原理阳性数量和编号促生长试验的要求和结果模拟方案的内容2：灌装到容器内的培养基体积模拟方案的内容2：62测试方法应该尽可能的模拟工艺选择的方法和限度必须理由充分并且文件化试验方法必须足够灵敏，限度时可以达到的所有的阳性都应该鉴别全自动生产线发生的污染率接近于零在旧的设施中生产或是较长的生长处理步骤或是手工操作的情况下，污染率不应该超过1个（3000灌装单位内）。在少于3000瓶的批量中，工艺模拟数量至少要等于批量，由于小批量的低灵敏度，不允许有阳性出现。大于3000瓶的批量，可以接受的阳性数量计算是应该谨慎。建立可接受的限度标准：测试方法应该尽可能的模拟工艺建立可接受的限度标准：63是一组达到工艺极限值的上限或下限的情况，和那些在SOP范围内，但与理想情况相比时有最大的可能造成工艺或产品失败的情况。最差条件不一定会导致产品或工艺的失败。最差条件：是一组达到工艺极限值的上限或下限的情况，和那些在SOP范围内64使用的原料、组件和密封在无菌工艺区域保留时间超出范围无菌操作人员的数量，超出正常生产所需的人员数量在特殊线上，以最快的速度灌装最少的数量（操作困难），以最慢的速度灌装最大的数量（最大的暴露）促生长培养基有抑制性或保护性处方……“最差条件”类型使用的原料、组件和密封在无菌工艺区域保留时间超出范围“最差条65污染容器应仔细调查其完整性。阳性应该鉴定到种、属。全面取样，查找污染源。确定潜在的污染源，污染源是如何进入工艺的。回顾生产记录。回顾关键系统：HVAC等对所有的程序和工艺变更进行回顾。失败调查污染容器应仔细调查其完整性。失败调查66失败原因：可以指定。污染为一个清晰、单一的来源。

纠正措施：立刻纠正，而且文件化。调查结果1：失败原因：可以指定。调查结果1：67失败原因：不可以指定。含糊的指定，多种系统和工艺的共同作用。纠正措施：工艺重新验证，进行多次工艺模拟实验来证明可以持续生产出可以接受的产品。调查结果2：失败原因：不可以指定。调查结果2：68发生事件的摘要调查所有的系统，不仅仅是发生失败的系统导致失败的原因和支持文件对以前批次的潜在影响纠正活动额外的试验适当的签名调查进度报告失败调查报告应该包括：发生事件的摘要失败调查报告应该包括：69粉剂的选择：

-可以灭菌

-可以上灌装机灌装

-在培养基中可溶

-对微生物无抑制性粉针剂的灌装验证：粉剂的选择：粉针剂的灌装验证：70把重量确定的性粉剂加入到已灌有灭菌培养基的瓶里，加胶塞，封口。

相对于液体培养基的灌装验证，粉针的灌装增加了一个步骤。粉针剂的灌装验证：把重量确定的性粉剂加入到已灌有灭菌培养基的瓶里，加胶塞，封口71向瓶内加入规定量的灭菌注射用水，接着进行冷冻、干燥，接下来再灌入一定量的灭菌液体培养基，其余同液体灌装方法。相比液体灌装方法，增加了冷冻干燥和传递两个步骤。冻干产品的灌装：向瓶内加入规定量的灭菌注射用水，接着进行冷冻、干燥，接下来再72参考资料：1、PDATechnicialReportNo.22“ProcessSimulationTestingforAsepticallyFilledProducts”2、FDA无菌制剂生产管理规范3、PIC/S无菌工艺验证的建议4、工业指南：用无菌工艺生产无菌产品现行GMP5、欧盟GMP附录一无菌药品6、GMP附录一无菌药品7、PIC/SPI007-2“无菌生产工艺验证指南”参考资料：73每一次的加油，每一次的努力都是为了下一次更好的自己。12月-2212月-22Thursday,December29,2022天生我材必有用，千金散尽还复来。12:57:2312:57:2312:5712/29/202212:57:23PM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2212:57:2312:57Dec-2229-Dec-22得道多助失道寡助，掌控人心方位上。12:57:2312:57:2312:57Thursday,December29,2022安全在于心细，事故出在麻痹。12月-2212月-2212:57:2312:57:23December29,2022加强自身建设，增强个人的休养。2022年12月29日12:57下午12月-2212月-22扩展市场，开发未来，实现现在。29十二月202212:57:23下午12:57:2312月-22做专业的企业，做专业的事情，让自己专业起来。十二月2212:57下午12月-2212:57December29,2022时间是人类发展的空间。2022/12/2912:57:2312:57:2329December2022科学，你是国力的灵魂；同时又是社会发展的标志。12:57:23下午12:57下午12:57:2312月-22每天都是美好的一天，新的一天开启。12月-2212月-2212:5712:57:2312:57:23Dec-22人生不是自发的自我发展，而是一长串机缘。事件和决定，这些机缘、事件和决定在它们实现的当时是取决于我们的意志的。2022/12/2912:57:23Thursday,December29,2022感情上的亲密，发展友谊；钱财上的亲密，破坏友谊。12月-222022/12/2912:57:2312月-22谢谢大家！每一次的加油，每一次的努力都是为了下一次更好的自己。12月-无菌工艺和验证

无菌工艺和验证

指导思想：产品质量是检验出来的标志：抽样检验理论关注点：样品检验质量管理基本方法一：指导思想：产品质量是检验出来的质量管理基本方法一：76抽样检验的应用

抽样检验：通过样本，推断整体。抽样检验是数理统计的分支，它用尽量少的样本尽可能反映全部产品的质量。抽样检验的应用77抽样检验的应用

抽样检验：通过样本，推断整体。抽样检验是数理统计的分支，它用尽量少的样本尽可能反映全部产品的质量。抽样检验的应用78样品抽样检验的结果是判别药品质量的唯一法定依据。样品按USP(美国药典)和USP-NF（国家处方集）的要求检验合格，即判合格；反之，则判为不合格。无菌工艺和无菌检验课件79FDA的观点：一个科学的、庞大的抽样计划，通过扩大抽样检查的办法可以实现保证药品质量的目标。FDA的观点：80FDA面临新的挑战-样品是否有代表性-抽样检验不可能发现药品生产中的污染/

混淆-低剂量高活性药物的混合是否均匀-无菌药物的灭菌是否有效……FDA面临新的挑战81抽样检验的困境：抽查批号的产品、其相应的原料、半成品及成品均经过抽样检验且检验结果符合标准，抽样和检验方法方面毫无问题。但FDA查不到所采用的工艺能始终如一地生产出符合规定质量标准产品的证据。抽样检验的困境：82FDA官员的感慨：“我们这些药政管理的官员，经历了许多年的经验和教训之后终于明白，我们在制订法规过程中并没真正研究过工艺过程的本身，……我们以往的立足点是在质量检验上，而不是在质量保证上”。FDA官员的感慨：83FDA的结论：“工艺验证应当是我们的立足点。”产品质量是生产出来的，不是靠检验来的。FDA的结论：84无菌无菌工艺无菌检验无菌工艺和无菌检验无菌无菌工艺和无菌检验85没有活体微生物（细胞繁殖体）的存在。无菌：无菌：86

无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和无

菌原料药，包括注射剂、眼用制剂、无菌软膏剂、

无菌混悬液等。例如：大容量注射剂、小容量注射剂、无菌粉针、无菌冻干粉针、无菌眼药水、无菌混悬剂、无菌原料药等。无菌药品：无菌药品：871、湿热灭菌法2、干热灭菌法3、辐射灭菌法4、气体灭菌法5、过滤灭菌法6、无菌生产工艺如何达到无菌？

《中国药典》2010年版附录ⅩⅤⅡ

灭菌法1、湿热灭菌法如何达到无菌？

《中国药典》2010年版881.残存概率法（Bioburdenbasedprocess）

2.过度杀灭法（Overkillprocess）3.生物指示剂/残存概率相结合的灭菌工艺（Biologicalindicator/bioburdencombinedprocess）USP灭菌方式:

32版1222章1.残存概率法（Bioburdenbasedproces89

以生物负荷（产品灭菌前微生物污染水平）为基础的方法，用于生产过程中很少检出芽孢，产品稳定性较差，只能适度灭菌的产品。残存概率法

Bioburdenbasedprocess以生物负荷（产品灭菌前微生物污染水残存概率法

90

适用于稳定性很好，能经受苛刻灭菌条件的产品。

过度杀灭法

Overkillprocess适用于稳定性很好，能经受苛刻灭菌条过度杀灭法

O91过度杀灭法VS残存概率法过度杀灭法VS残存概率法92灭菌抉择树：能否121℃、15分钟湿热灭菌能否采用F0≥8的湿热灭菌，SAL≤10-6否121℃、15分钟湿热灭菌是采用F0≥8的湿热灭菌，SAL≤10-6能否对药液除菌过滤否是无菌原料、无菌配制、无菌灌封药液除菌过滤及无菌灌封否是灭菌抉择树：能否121℃、15分钟湿热灭菌能否采用F0≥8的93灭菌工艺的选择：灭菌工艺的选择：94灭菌工艺与生物负荷的关系：灭菌工艺与生物负荷的关系：951、终端灭菌工艺

2、无菌生产工艺无菌药品的生产工艺1、终端灭菌工艺无菌药品的生产工艺96可以最后用热力学方法除去微生物的生产工艺。

如：大容量注射剂、水针等产品生产。终端灭菌生产工艺可以最后用热力学方法除去微生物的生产工艺。终端灭菌生产工艺97严格原料微生物标准严格控制微生物污染、制定灭菌前生物负荷的限度标准控制药液存放温度和时间药液取样、污染菌的鉴别目的：控制生物负荷终端灭菌生产工艺的质量保证：严格原料微生物标准终端灭菌生产工艺的质量保证：98空载热分布满载热分布热穿透试验微生物挑战试验……终端灭菌生产工艺验证要点：空载热分布终端灭菌生产工艺验证要点：99过滤除菌工艺无菌分装工艺如：冻干粉针、粉针、无菌原料药、生物疫苗、血液制品等产品生产。无菌生产工艺：过滤除菌工艺无菌生产工艺：100对进入无菌区的物料充分灭菌，消除污染源。所有接触经除菌过滤的药液的设备都经过清洁和灭菌验证避免人员直接接触除菌后的药液、容器防止人员活动干扰层流目的：以防止污染为目的，消除生产工艺中潜在污染的各种可能性。无菌生产工艺的质量保证：对进入无菌区的物料充分灭菌，消除污染源。无菌生产工艺的质量保101终端灭菌工艺VS无菌生产工艺终端灭菌工艺VS无菌生产工艺102无菌工艺模拟或培养基灌装验证无菌生产工艺工艺验证要点：无菌工艺模拟或无菌生产工艺工艺验证要点：103ProcessSimulationTestingforAsepticallyFilledProducts

无菌灌装产品的工艺模拟试验解读：PDATechnicalReportN0.22

ProcessSimulationTestingfor评价无菌工艺操作能力最有效的方法。完全模拟工艺配制和灌装工艺，用一种可以促进微生物生长的培养基替代无菌产品。确认无菌生产工艺的无菌保证水平（SAL）的方法。工艺模拟实验（培养基灌装）评价无菌工艺操作能力最有效的方法。工艺模拟实验（培养基灌装）105证明采用无菌工艺生产无菌产品的能力无菌工艺人员的资质和保证符合现行GMP要求无菌工艺模拟的目的：证明采用无菌工艺生产无菌产品的能力无菌工艺模拟的目的：106安装干扰容器尺寸容器的密封灌装速度灌装体积灌装持续时间生产批量、工艺模拟批量工艺模拟实验原理1安装工艺模拟实验原理1107手动灌装培养条件培养基的选择容器检查惰性气体设施考虑人员考虑工艺模拟实验原理2手动灌装工艺模拟实验原理2108工艺人员设备环境

培养基灌装验证包含：工艺培养基灌装验证包含：109模拟工艺的定义:使用促微生物生长的培养基，及与无菌物料生产相似的方法评估无菌工艺的方法。包括工艺的所有步骤，从药物成分、赋形剂（如果有）、容器、密封的灭菌到产品的密封。在无菌灌装之前无菌药物容器和密封后放置的最长时间必须包括在模拟范围内。工艺模拟工艺的定义:使用促微生物生长的培养基，及与无菌物料生产相110非无菌物料进入无菌区域的“切入点”。未经灭菌或消毒的物料，灭菌后进入灌装间的保护手工操作进入灌装间前的防护。设备：非无菌物料进入无菌区域的“切入点”。设备：111生产环境始终符合无菌产品生产的要求保证系统和设备按照设定的目的正常运转无菌保证—环境监测生产环境始终符合无菌产品生产的要求无菌保证—环境监测112取样点的选择取样频率行动限和警戒线方法学和数据解释GMP附录1：无菌药品第十条（二）：

A级区监测的频率及取样量，应能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。环境监测：取样点的选择环境监测：113最长的无菌生产、操作时间无菌生产中每次发生的干预事件冷冻干燥设备的无菌组装人员数目和活动无菌条件的转移交接班变化、中断和衣物更换模拟的无菌工艺应该包含（1）：

（FDA的建议）最长的无菌生产、操作时间模拟的无菌工艺应该包含（1）：

（F114无菌设备连接和断开无菌样品的收集生产线速度和配置重量检查设备、容器密闭检查SOP的特殊规定模拟的无菌工艺应该包含（2）：

（FDA的建议）无菌设备连接和断开模拟的无菌工艺应该包含（2）：

（FDA的115灭菌系统洁净环境系统公用辅助系统生产控制系统设备清洗模拟工艺还涉及：灭菌系统模拟工艺还涉及：116（一）选择标准：

促生长能力、低选择性、澄明度、中等浓度和过滤性。

培养基：（一）选择标准：培养基：117促生长能力

支持少量微生物的复壮和生长，10-100CFU或更少。低选择性

1、适应广谱微生物的生长，细菌、霉菌和酵母菌都可以生长。

2、企业自己的菌种库（环境中分离的微生物）培养基：促生长能力培养基：118澄明

清澈，如果发生浑浊，能够观察到

中等浓度

遵循供应商的建议。其他浓度或经过验证过滤性

培养基应当能够穿过生产过程所使用的同样级别的过滤器培养基澄明培养基119（二）培养基灵敏度检查：1、将无菌培养基分装到一定数量的无菌试管。2、制备好的菌悬液（枯草杆菌、白色念珠菌）

10-100cfu/mL。3、加入上述菌悬液1mL进准备好的培养基内，每份培养基至少加2管。4、培养7天。5、每种培养基50%发生浑浊，长菌。培养基：（二）培养基灵敏度检查：培养基：1201、培养基储罐灭菌，移入无菌区域。2、灭菌后的连接件、阀门、过滤器等和培养

基储罐无菌连接。3、灭菌后的培养基经过滤器和储罐无菌连接。4、储罐另一端和灌装机相连，连接时无菌的。〈USP〉培养基的制备：1、培养基储罐灭菌，移入无菌区域。培养基的制备：1211、培养基的无菌检验

灭菌后，灌装前的培养基取样，进行无菌检验。确认培养基是无菌的

微生物检验：1、培养基的无菌检验微生物检验：1222、瓶子、瓶盖和胶塞的无菌检验

灌装前瓶子、瓶盖和胶塞取样，进行无菌检验。确认进入灌装线的瓶子、瓶盖和胶塞是无菌的。

微生物检验：2、瓶子、瓶盖和胶塞的无菌检验微生物检验：1233、灌装后培养基的灵敏度检验

同培养基的灵敏度检验。确认灭菌后的培养基的灵敏度符合规定。

微生物检验：3、灌装后培养基的灵敏度检验微生物检验：1244、瓶子培养和破损检查

灌装培养基的瓶子编号后，按照预定的培养温度培养至14天。记录培养结果。

微生物检验：4、瓶子培养和破损检查微生物检验：1251、FDA：

20-35℃，目标值±2.5℃，不少于14天；如选择两个温度，则每一温度下至少培养7

天，从低温开始。2、PIC：

20-35℃下至少14天。或先20-25℃下7天，然后30-35℃下7天。培养时间：1、FDA：培养时间：126

发现微生物生长的瓶子污染百分比=100%

灌装瓶数–破损瓶数评估结果：评估结果：127生产部人员

灌装人员（灌装、胶塞、清洗瓶等）、清洁人员质量部人员

QA（IPC、监测人员）、QC(取样、检验)工程部人员运行人员、维护人员人员：生产部人员人员：128上岗前：至少参加一次无菌工艺模拟的考核，为其上岗资质的重要内容。年度资质确认：无菌岗位操作员工每年至少参加一次无菌工艺的模拟。

人员资质上岗前：至少参加一次无菌工艺模拟的考人员资质129严禁“非无菌”仪器或器材接触无菌材料。缓慢、有目的的移动。操作中身体始终处于A级层流之外无菌操作保证无菌工作服不受污染……无菌操作人员行为：严禁“非无菌”仪器或器材接触无菌材料。无菌操作人员行为：130接受培训人员

生产部人员、质量部人员、工程部人员人员培训：接受培训人员人员培训：131首次验证

至少连续成功灌装3个批次。年度验证

每条生产线每年不得少于2次。

6个月生产期间没有有目的停止生产的无菌生产区域生产线退役验证

生产线退役前必须进行一次无菌工艺模拟。验证频率：首次验证验证频率：132环境监测数据水系统检验数据无菌检验数据关键的工艺变更、空调系统变更以上趋势的评估，决定了周期性培养基灌装验证的次数。培养基灌装验证的次数：环境监测数据培养基灌装验证的次数：133

方案、报告和调查无菌工艺和无菌检验课件134定义被模拟的工艺定义使用的房间定义使用的灌装线和设备使用的容器和密封类型线速度灌装单位的数量干扰和中断的数目和类型一起参加的人数使用的培养基模拟方案的内容1：定义被模拟的工艺模拟方案的内容1：135灌装到容器内的培养基体积培养条件同步的环境监测批记录的复印件全部测试的可接受标准最终报告的描述选择“最差条件”的原理阳性数量和编号促生长试验的要求和结果模拟方案的内容2：灌装到容器内的培养基体积模拟方案的内容2：136测试方法应该尽可能的模拟工艺选择的方法和限度必须理由充分并且文件化试验方法必须足够灵敏，限度时可以达到的所有的阳性都应该鉴别全自动生产线发生的污染率接近于零在旧的设施中生产或是较长的生长处理步骤或是手工操作的情况下，污染率不应该超过1个（3000灌装单位内）。在少于3000瓶的批量中，工艺模拟数量至少要等于批量，由于小批量的低灵敏度，不允许有阳性出现。大于3000瓶的批量，可以接受的阳性数量计算是应该谨慎。建立可接受的限度标准：测试方法应该尽可能的模拟工艺建立可接受的限度标准：137是一组达到工艺极限值的上限或下限的情况，和那些在SOP范围内，但与理想情况相比时有最大的可能造成工艺或产品失败的情况。最差条件不一定会导致产品或工艺的失败。最差条件：是一组达到工艺极限值的上限或下限的情况，和那些在SOP范围内138使用的原料、组件和密封在无菌工艺区域保留时间超出范围无菌操作人员的数量，超出正常生产所需的人员数量在特殊线上，以最快的速度灌装最少的数量（操作困难），以最慢的速度灌装最大的数量（最大的暴露）促生长培养基有抑制性或保护性处方……“最差条件”类型使用的原料、组件和密封在无菌工艺区域保留时间超出范围“最差条139污染容器应仔细调查其完整性。阳性应该鉴定到种、属。全面取样，查找污染源。确定潜在的污染源，污染源是如何进入工艺的。回顾生产记录。回顾关键系统：HVAC等对所有的程序和工艺变更进行回顾。失败调查污染容器应仔细调查其完整性。失败调查140失败原因：可以指定。污染为一个清晰、单一的来源。

纠正措施：立刻纠正，而