药物定量与方法验证

第四章药物定量分析与分析方法验证§4.1定量分析样品的前处理方法概述

含金属或卤素的药物，在分析前需要经过不同方法处理后，方可进行测定。处理方法因金属或卤素在分子中结合的牢固程度而异。

一、含卤素有机药物的分析含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐结构特点：C—X（一）卤原子的活泼性1.卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系（1）乙烯型卤和芳卤不活泼（2）烯丙型卤和苄卤活泼（3）卤代烷型介于两者之间2.分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显3.卤素的种类I＞Br＞Cl＞F常见的含卤素有机药物三氯叔丁醇防腐药镇痛药六氯对二甲苯广谱驱虫药

泛影酸X线造影剂胆影酸X线造影剂碘他拉酸X线造影剂碘番酸X线造影剂碘苯酯X线造影剂I盐酸胺碘酮抗心律失常药药诺氟沙星广谱抗菌药醋酸氟轻松肾上腺皮质激激素类药，抗抗炎及抗过敏敏磺溴酞钠实验诊断用药药（肝功能能）（二）含卤素素有机药物的的分析直接回流后测测定法碱性或酸性还还原后测定法法氧瓶燃烧分解解后测定法1.直接回回流后测定法法本法是将含卤卤素有机药物物溶于适当溶溶剂（如乙醇醇）中，加入入氢氧化钠溶溶液（或一定定量过量的硝硝酸银滴定液液）后，加热热回流使其水水解，将有机机结合的卤素素转变为无机机的卤素离子子，然后采用用银量法（Volhard法）测定定。本法适用于含含卤素有机药药物结构中卤卤素原子结合合不牢固的药药物（如卤原原子和脂肪碳碳原子相连者者）。原理三氯叔丁醇在在NaOH溶溶液中加热回回流水解，氯氯元素全部转转变成NaCl，用剩余滴定法，即于水解液液中加HNO3酸化，再加入定量过过量的AgNO3滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的AgNO3，以Fe3+为指示剂，用用NH4SCN液回滴滴定。例：三氯叔丁丁醇的测定ChP（（2005）CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH

△回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl

+AgNO3

AgCl↓

+NaNO3

AgNO3+

NH4SCNAgSCN↓+

NH4NO3（淡棕红色））(Ksp=1.56××10–10)(Ksp=1.0×10-12)Fe3++SCNˉFe(SCN)2+

测定方法取本品约0.1g，精密密称定，加乙醇5ml溶解后，加加20%氢氧氧化钠溶液5ml，加热热回流15min，放冷至室温，，加水20ml与硝酸5ml，精密密加硝酸银滴滴定液(0.1mol/L)30ml，再加加邻苯二甲酸二二丁酯5ml，密塞，强力力振摇后，加加硫酸铁铵指指示液2ml，用硫氰酸酸铵滴定液(0.1mol/L)滴滴定，并将滴滴定的结果用用空白试验校校正。每1ml硝酸银滴滴定液(0.1mol/L)相当于于6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。反应摩尔比为为1∶3T——滴定度，，每1ml滴滴定液相当于于被测组分的的mg数c——滴定液浓浓度，mol/LM——被测物的的摩尔质量，，g/moln——1mol样品消耗滴滴定液的摩尔尔数，常用反反应摩尔比体体现，即反应应摩尔比为1∶n2.经氧化还还原后测定法法(1)碱性还还原后测定卤素结合于芳芳环上时，由由于分子中碘碘的结合较牢牢固，需在碱碱性溶液中加加还原剂（如如锌粉）回流流，使碳-碘碘键断裂，形形成无机碘化化物后测定。。(2)酸性还还原后测定法法两法均是将含含卤素有机药药物在碱性或或酸性下，加加还原剂（如如锌粉）加热热回流，药物物产生还原裂裂解反应，使使有机结合的的卤素转变为为无机的卤素素离子，然后后采用银量法法（Fajans法）测测定。本法适用于测测定结构中碘碘与苯环直接接相连，且一一个苯环上含含多个碘原子子的含卤素有有机药物。泛影酸（1）碱性还原后测测定法例泛影酸酸的测定ChP(2005)取本品约0.4g，精密密称定，加氢氧化钠溶溶液30ml与锌粉1.0g，加热热回流30min，放冷，冷凝管管用少量水洗洗涤，滤过，，烧瓶与滤器器用水洗涤3次，每次15ml，洗洗液与滤液合合并，加冰醋醋酸5ml与与曙红钠指示示液5滴，用用硝酸银滴定定液(0.1mol/L)滴定。每每1ml硝酸酸银滴定液(0.1mol/L)相相当于20.46mg的的C11H9I3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH+Zn回流△COONaNH2

H2N+3NaI+2CH3COONa+2Na2ZnO2+H2OUSP(24)、BP（1998）ChP(2005)收载载的胆胆影酸酸、碘碘番酸酸、胆胆影葡葡胺、、泛影影葡胺胺、碘碘他拉拉酸等等均采采用同同法测测定。。碘番酸酸（2））酸性还还原后后测定定法取本品品的干干燥品品约0.4g，，精密密称定定，加锌粉粉1g及冰冰醋酸酸10ml，加加热回回流30min，放冷，，冷凝凝管用用水30ml洗洗涤，，用脱脱脂棉棉过滤滤，烧烧瓶与与脱脂脂棉用用水洗洗涤2次，，每次次20ml，洗洗液与与滤液液合并并，加加四溴溴酚酞酞乙酯酯指示示液1ml，，用硝硝酸银银滴定定液(0.1mol/L)滴滴定。。终点点时黄黄色沉沉淀变变为绿绿色。。每1ml硝酸酸银滴滴定液液(0.1mol/L)相当当于19.031mg的的C11H12I3NO2。例碘碘番番酸的的测定定JP(13)3.氧氧瓶瓶燃烧烧分解解后测测定法法（1））原理理氧瓶燃燃烧法法：将有机机药物物放入入充满氧氧气的密闭燃烧瓶瓶中进进行燃烧，并将将燃烧烧所产产生的的欲测测物质质吸收于适当当的吸吸收液液中，，然后后根据据欲测测物质质的性性质，，采用用适宜宜的分分析方方法进进行鉴鉴别、、检查查或含含量测测定适用于于含卤卤素、、硫、、氮、、硒等等有机机药物物的分分析本法特特点是是简便便、快快速、、破坏坏完全全，尤尤其适适用于于微量量样品品的分分析（2）仪仪器器与材材料①仪器器装置置燃烧瓶瓶为500、1000或或2000ml无色色、磨磨口、、厚壁壁、硬硬质玻玻璃锥锥型瓶瓶；瓶瓶塞空心，，底部部熔封封铂丝丝一根根，下下端呈呈螺旋旋状或或网状状②称样样用材材料及及称样样A.固固体体样品品无无灰滤滤纸B.液液体体样品品纸纸袋C.软软膏膏类样样品：：将适适量样样品置置不含含被测测成分分的蜡蜡油纸纸中包包裹严严密，，外层层再用用无灰灰滤纸纸包裹裹氧瓶燃燃烧法法装置置与样样品包包装操操作图图④吸收收液A.作作用：：吸收收液的的作用用是将将样品品经燃燃烧分分解所所产生生的各各种价价态的的卤素素、硫硫、氮氮、硒硒等，，定量量地吸吸收并并转变变为一一定的的便于于测定定的价价态③氧气气B.吸吸收收液的的选择择氟水氯NaOH溶溶液溴H2O2-NaOHNaOH-硫酸酸肼饱饱和溶溶液碘NaOH－－硫酸酸肼饱饱和溶溶液硫NaOH或或H2O2硒硝酸溶溶液（3））操作作方法法①燃烧瓶瓶燃烧烧前的的准备备用洗液液洗净净后，，按各各药品品项下下的规规定加加入吸吸收液液，将将瓶口口用水水湿润润，小小心急急速地地通入入氧气气1min，立立即用用表面面皿覆覆盖瓶瓶口。。②样品的准备取样品适量，，精密称定后后按规定方法法包裹，固定定于铂丝下端端的网内或螺螺旋处。③样品的燃烧烧点燃包有供试试品的滤纸尾尾部，迅速放放入燃烧瓶中中，按紧瓶塞塞，加水少量量封闭瓶口，，俟燃烧完毕毕（应无黑色色碎片），充充分振摇，使使生成的烟雾雾完全吸入吸吸收液中，放放置15min，用水少少量冲洗瓶塞塞及铂丝，合合并洗液及吸吸收液，同法法另做空白试试验。然后按按各药品项下下规定的方法法进行鉴别、、检查或含量量测定。①根据被燃烧烧分解的样品品量选用适宜宜大小的燃烧烧瓶。（4）注意事项ChP（2005）规定定的燃烧瓶体体积为500、1000或2000ml三种，，采用常量或或半微量分析析待分解样品量燃烧瓶的体积3~5mg（微量分析）150~250ml20~30mg（半微量分析）300~500ml50~60mg1000ml0.6~0.7g或更多2000ml或特殊结构的燃烧瓶正确选用燃烧烧瓶的目的在于：样品能在足够够的氧气中燃燃烧分解完全全；有利于将燃烧烧分解产物较较快地吸收到到吸收液中；；防止爆炸的可可能性。②测定含氟有有机药物时，，用石英制燃烧瓶③铂丝燃烧时时起催化作用用④应同时做空空白试验⑤燃烧时要注注意防爆⑥燃烧要完全全⑦燃烧产生的的烟雾完全被被吸收（5）应用例磺溴酞酞钠的含量测测定ChP(2005)燃烧分解O2HBr+Na2S+Na2SO4+…HBr+Na2S

NaBr+Na2SO4

+H2O

NaOH，H2O2溴取本品约0.2g，照氧氧瓶燃烧法（（附录ⅦC）进行有机机破坏，选用用1000ml燃烧瓶，，以0.4%氢氧化钠溶溶液10ml，浓过氧化化氢溶液0.5ml与水水10ml作作为吸收液，，俟生成的烟烟雾完全吸入入吸收液后，，用水稀释至至100ml，煮沸5分分钟，放冷，，加稀硝酸使使成酸性，精精密加硝酸银银滴定液（0.1mol/l）20ml，摇匀匀，再加硫酸酸铁铵指示液液2mL，用用硫氰酸铵滴滴定液(0.1mol/L)滴定，，并将滴定的的结果用空白白试验校正。。每1mL硝硝酸银滴定液液(0.1mol/L)相当于7.990mg的溴(Br)。例碘苯酯酯的含量测定定ChP（2005）原理碘苯酯系有机机碘化物，用用氧瓶燃烧分分解，转变为为碘化物，继继而氧化为游游离的I2，并被定量地地吸收于吸收收液中，和NaOH反应应，生成I-与IO3-，加入Br2-CH3COOH溶液液，使全部转转变为IO3-，过量的溴以以HCOOH及通空气去去除。加入KI，使与IO3-反应析出游离离I2，用Na2S2O3液滴定，I2与淀粉结合所所显的蓝色消消失即为终点点取本品约20mg，精密密称定，照氧氧瓶燃烧法进进行有机破坏坏，用氢氧化化钠试液2ml与水l0ml为吸收收液，待吸收收完全后，加加溴醋酸溶液液(取醋酸钾钾10g，加加冰醋酸适量量使溶解，加加溴0.4ml，再加冰冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振振摇，放置数数分钟，加甲甲酸约lml，用水洗涤涤瓶口，并通通入空气流约约3～5min以除去剩剩余的溴蒸气气，加碘化钾钾2g，密塞塞，摇匀，用用硫代硫酸钠钠滴定液(0.02mol/L)滴定，至近终终点时，加淀淀粉指示液，，继续滴定至至蓝色消失，，并将滴定的的结果用空白白试验校正。。每lml的的硫代硫酸钠钠滴定液(0.02mol/L)相相当于1.388mg的的C19H29IO2。滴定度的计算算放放大大反应2mol碘苯酯→1molI21molI2→1molNaIO+1molNaI1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2→molNaIO3即2mol碘碘苯酯→2molNaIO3I2molNaIO3+10I-→6molI2即2mol碘碘苯酯→1molI2→6molI2→12molI→12molNa2S2O3反应摩摩尔比比为1∶698：：140.氧氧瓶燃燃烧法法中的的装置置有A.磨磨口口硬质质玻璃璃锥形形瓶B.磨磨口口软质质玻璃璃锥形形瓶C.铂铂丝丝D.铁铁丝丝E.铝铝丝丝96：：133（（99x：：138））．选选择氧氧瓶燃燃烧法法所必必备的的实验验物品品A.磨磨口口硬质质玻璃璃锥形形瓶B.铂铂丝丝C.普普通通滤纸纸D.氢氢气气E.无无灰灰滤纸纸99：：76．氧氧瓶燃燃烧法法测定定含氯氯有机机药物物时所所用的的吸收收液多多数为为A.H2O2溶液B.H2O2—NaOH溶液液C.NaOH溶液液D．硫硫酸肼肼饱和和液E.NaOH—硫硫酸肼肼饱和和液99：：134.氧氧瓶燃燃烧法法可用用于A.含含卤卤素有有机药药物的的含量量测定定B.醚醚类类药物物的含含量测测定C.检检查查甾体体激素素类药药物中中的氟氟D.检检查查甾体体激素素类药药物中中的硒硒E.芳芳酸酸类药药物的的含量量测定定二、含含金属属有机机药物物的分分析A.含金属属的有机药药物金属原原子不不与碳碳原子子直接接相连连，通通常为为有机机酸及及酚的的金属属盐或或配位位化合合物，，其分分子结结构中中的金金属原原子结结合不不够牢牢固如酒石酸酸锑钾钾、葡葡萄糖糖酸锑锑钠、、富马马酸亚亚铁酒石酸酸锑钾钾抗血吸吸虫病病药硬脂酸酸镁医药片片剂的的润滑滑剂和和脱模模剂富马酸酸亚铁铁抗贫血血药葡萄糖糖酸锑锑钠抗寄生生虫药药，，治疗疗黑热热病B.有机金属药物金属原原子直直接与与碳原原子以以共价价键相相连，，结合合比较较牢固固。在在溶液液中一一般不不解离离成离离子状状态。。应该该根据据共价价键的的牢固固程度度，经经适当当处理理，将将其金金属转转变为为适于于分析析的状状态，，方可可进行行其金金属的的鉴别别或含含量测测定。。如卡巴胂胂、醋醋酸苯苯汞、、汞撒撒利卡巴胂胂用于阴阴道滴滴虫病病及丝丝虫病病醋酸苯苯汞外用避避孕药药汞撒利利利尿及及脱水水药，，用于于心脏脏性和和肝性性水肿肿含金属属有机机药物物定量量分析析前的的处理理方法法不经有有机破破坏的的分析析方法法直接测测定法法;经经水解解后测测定法法;经经还原原-汞汞齐化化后测测定法法经有机机破坏坏的分分析方方法湿法破破坏(硝酸酸-高高氯酸酸法;硝酸酸-硫硫酸法法;硫硫酸-硫酸酸盐法法等);干干法破破坏；；氧瓶瓶燃烧烧（一））不经经有机机破坏坏的分分析方方法1.直直接接测定定法适用于于金属属原子子不直直接与与碳原原子相相连的的含金金属有有机药药物或或某些些C——M键键结合合不牢牢固的的有机机金属属药物物。在水溶溶液中中可以以电离离的药药物。。富马酸酸亚铁铁的含含量测测定ChP(2005)取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。原理Fe2++Ce4+Ce3++Fe2+

Fe2++e-Fe3+红色浅蓝色OOCCHOHCCOˉˉ+Fe2+2.用用硫酸酸水解解后测测定法法例硬脂酸酸镁的的测定定ChP（2005））取本品品约0.1g，，精密密称定定，精精密加加硫酸酸滴定定液(0.05mol/L)50ml，，煮沸沸至油油滴澄澄清，，继续续加热热10min，，放冷冷至室室温，，加甲甲基橙橙指示示液1~2滴，，用氢氢氧化化钠滴滴定液液(0.1mol/L)滴定定。每每1ml硫硫酸滴滴定液液(0.05mol/L)相相当于于2.016mg的的MgO。原理：：Mg(C17H35COO)2+H2SO4

△MgSO4

+2C17H35COOH2NaOH+H2SO4

Na2SO4+2H2O某些含含汞有有机药药物，，由于于C——Hg键不不牢固固，在在水溶溶液（（冰浴浴）中中滴加加硫酸酸使其其水解解，将将有机机汞定定量转转化成成硫酸酸汞，，再用用硫氰氰酸铵铵滴定定液滴滴定。。例汞汞撒撒利的的测定定取本品品约0.5g，，精密密称定定，加加蒸馏馏水10ml，，置冰冰浴中中，滴滴加硫硫酸10ml，，随滴滴随搅搅拌，，至产产生的的沉淀淀复溶溶解，，再加加蒸馏馏水50ml，，硫酸酸铁铵铵指示示液2ml，用用硫氰氰酸铵铵滴定定液(0.1mol/L)滴滴定。。每1ml硫氰氰酸铵铵滴定定液(0.1mol/L)相相当于于25.29mg的的汞撒撒利。3.经经还还原--汞汞齐化化后测测定法法本法系系在酸酸性或或碱性性溶液液中，，加锌锌粉、、加热热回流流，将将药物物中有有机结结合的的汞还还原析析出金金属汞汞，并并与过过量的的锌生生成锌锌汞齐齐。将将锌汞汞齐溶溶于硝硝酸后后，选选用适适当的的方法法测定定汞的的含量量，并并换算算成含含汞有有机药药物的的含量量。如醋醋酸酸苯汞汞的含含量测测定取本品品约0.5g，，精密密称定定，置置100ml烧烧瓶中中，加加水15ml，，甲酸酸5ml与与锌粉粉1g，附附回流流冷凝凝器，，煮沸沸30min。。放冷冷，滤滤过，，滤纸纸和锌锌汞齐齐用蒸蒸馏水水洗涤涤至洗洗液对对石蕊蕊试纸纸不显显酸性性反应应。将将锌汞汞齐溶溶解在在稀硝硝酸(1∶∶2)40ml中，，置蒸蒸气浴浴上加加热3min，，加尿尿素0.5g和和足够够的高高锰酸酸钾试试液至至显桃桃红色色。冷冷却后后，加加过氧氧化氢氢溶液液脱色色，加加硫酸酸铁铵铵指示示剂lml，用用硫氰氰酸铵铵滴定定液(0.1mol/L)滴滴定，，即得得。每每1ml硫硫氰酸酸铵液液(0.1mol/1)相当当于16.84mg的C8H8O2Hg。。4.利利用药药物中中可游游离的的金属属离子子的氧化性性测定含量量例如含锑锑和含铁铁的药物物，在酸酸性溶液液中可游游离出具具有氧化化性的Sb5+、Fe3+氧化碘化化钾析出出碘，用用硫代硫硫酸钠滴滴定。（（间接碘碘量法））。例葡萄糖酸酸锑钠的测定ChP（2005）取本品约约0.3g，精精密称定定，置具具塞锥形形瓶中，，加水100ml、盐盐酸15ml与与碘化钾钾试液10ml，密塞塞、振摇摇后，在在暗处静静置10min，用硫硫代硫酸酸钠滴定定液(0.1mol/L)滴滴定，至至近终点点时，加加淀粉指指示液，，继续滴滴定至蓝蓝色消失失，并将将滴定的的结果用用空白试试验校正正。每lml的的硫代硫硫酸钠滴滴定液(0.1mol/L)相当于于6.088mg的Sb。Sb5++2I-Sb3++I2H+I2+2S2O32-2I-

+2S4O62-例枸枸橼酸铁铁铵的测测定ChP（（2005）取本品约约0.5g，精精密称定定，置具具塞锥形形瓶中。。加水15ml溶解后后，加硫酸lml，，加热至溶液由由暗棕色色变成淡淡黄色，，放冷至至约15℃，滴滴加高锰锰酸钾试试液至溶溶液显粉粉红色并并持续5s，加加盐酸15ml与碘化化钾试液液15ml，密密塞，静静置3min，，加水50ml稀释后后，用硫硫代硫酸酸钠滴定定液(0.1mol/L)滴滴定至近近终点时时，加淀淀粉指示示液2ml，继继续滴定定至蓝色色消失，，并将滴滴定的结结果用空空白试验验校正。。每lml的硫硫代硫酸酸钠滴定定液(0.1mol/L)相相当于5.585mg的Fe。（二）经经有机破破坏的分分析方法法适用于金金属原子子与碳原原子结合合牢固的的有机金金属药物物。一般包括括湿法破坏坏、干法破坏坏及氧瓶燃烧烧法三种方法法。（1）硝硝酸-高高氯酸消消解解消煮时HNO3具有强的的氧化力力，热的的浓HClO4是最强的的氧化剂剂和脱水水剂，能能将组分分氧化成成高价态态。加热热时生成成无水HClO4，可进一一步与有有机质作作用，使使有机物物很快被被氧化分分解成简简单的可可溶性化化合物，，二氧化化硅则脱脱水沉淀淀。

HNO3-HClO4消解样品是破坏有机物比较有效的方法，但要严格按照操作程序，防止发生爆炸。1.湿湿法破坏坏本法适用用于血、、尿、组组织等生生物样品品的破坏坏，有机机金属药药物经破破坏后，，得到的的无机金金属离子子一般呈呈高价态态。本法不能能用于含含氮杂环环药物的的破坏。。此时宜宜选用干干法灼烧烧进行破破坏。本法破坏坏能力强强，反应应比较激激烈。故故进行破破坏时，，必须严严密注意意切勿将将容器中中的内容容物蒸干干，以免免发生爆爆炸。（2）硝硝酸-硫硫酸消消解两种酸都都有较强强的氧化化能力，，其中HNO3沸点低，，而H2SO4沸点高（（338℃）；；热的浓H2SO4具有强的的脱水能能力和氧氧化能力力，可以以比较快快地分解解试样，，破坏有有机物；；二者结合合使用，，可提高高消解温温度和消消解效果果。硝酸-硫硫酸消消解常用的HNO3与H2SO4的比例为为5:2，消解解时，先先将HNO3加入样品品中，加加热蒸发发至小体体积，稍稍冷，再再加入H2SO4、HNO3，继续加加热蒸发发至冒大大量白烟烟，冷却却，加适适量水，，温热溶溶解可溶溶盐，若若有沉淀淀应过滤滤。为提提高消解解效果，，常加入入少量H2O2。硝酸-硫硫酸法适用于大大多数有有机物质质的破坏坏，如染染料、中中间体或或药物等等。破坏坏得到的的无机金金属离子子均为高高价态。。本法不能能用于含含碱土金金属有机机药物的的破坏因碱土金金属可与与硫酸形形成不溶溶性的硫硫酸盐，，将会吸吸附被测测定的金金属离子子，使测测定的结结果偏低低。改用硝酸酸一高氯氯酸法（3）硫硫酸-硫酸盐盐法加入浓硫硫酸作氧氧化剂加入硫酸酸盐（硫酸钾或或硫酸钠钠，因硫硫酸钠为为含水化化合物，，不利于于有机破破坏，故故一般多多采用硫硫酸钾））加入硫酸酸盐目的的：提高硫酸酸的沸点点，增强强硫酸的的氧化破破坏能力力，以使使样品破破坏完全全。防止硫酸酸在加热热过程中中过早地地分解为为三氧化化硫而损损失。本法常用用于含砷或锑锑有机药药物的破坏，，破坏得得到的无无机金属属离子多多为低价态。（4）硫硫酸-磷磷酸消消解两种酸的的沸点都都比较高高，其中中H2SO4氧化性较较强，H3PO4能与一些些金属离离子如Fe3+等络合，，故二者者结合消消解样品品，有利利于测定定时消除除Fe3+等离子的的干扰。。（5）其其它湿湿法硝酸—硫硫酸—高高氯酸法法硫酸—氧氧化剂法法（过氧氧化氢法法、高锰锰酸钾））破坏后，，金属呈呈高价态态试液适量H2SO4和5％KMnO4

加热煮沸

冷至室温滴加盐酸羟胺溶液破坏过量的KMnO4该方法常常用于测测定汞的的样品。。KMnO4是强氧化化剂，在在中性、、碱性、、酸性条条件下都都可以氧氧化有机机物，其其氧化产产物多为为草酸根根，但在在酸性介介质中还还可继续续氧化。。硫酸-高高锰酸钾钾消消解用浓H2SO4-H2O2氧化剂消消煮植物物样品时时，其中中的有机机物经脱脱水碳化化、氧化化分解，，变成CO2和水，使使有机氮氮和磷转转化为铵铵盐和磷磷酸盐，，可在同同一份消消煮液中中分别测测定全氮氮、磷、、钾。总氮、总总磷、总总钾的测测定，样样品的消消化均采采用H2SO4-H2O2消解法进进行消解解。硫酸-过过氧化氢氢消消解多元消解解法为提高消解效效果，在某些些情况下需要要采用三元以以上酸或氧化化剂消解体系系，混合溶剂剂具有更强的的溶解能力，，应用广泛。。目的及前提多元消解解法硝酸-硫酸-五氧化二矾矾消解法硝酸-氢氟酸酸-高氯酸消消解法硝酸-硫酸-高锰酸钾消消解法盐酸-硝酸-氢氟酸-高高氯酸消解法法硝酸-硫酸-高氯酸消解解法注意事项：1.湿法破坏坏所用的仪器器，一般为硅硅玻璃或硼玻玻璃制成的凯氏烧瓶；2.所用试剂剂及蒸馏水均均不应含有被被测金属离子子或干扰测定定的其他金属属离子等组分分；3.由于整个个操作过程所所用矿酸量数数倍于样品，，所以必须按按相同条件进进行空白试验校正正；4.操作时应应在通风橱内内进行。样品的取用量量，应视被测测含金属有机机药物中所含含金属元素的的量和破坏后后所用测定方方法而定。含金属元素量量在10μg一100μμg范围内时时，取样量为为10g;如果测定方法法灵敏度较高高，取样量可可相应减少。。对于生物样品品，一般血样样10ml一一15ml或或尿样50ml2.干法破破坏将有机物灼烧烧灰化以达分分解的目的。。将适量样品置置于瓷、镍、、铂坩埚中，，常加无水碳碳酸钠或轻质质氧化镁等以以助灰化，混合均匀后，，先小火加热热，使样品完完全炭化，然后放入高温温炉中灼烧，，使其灰化完完全，即可。。适用于湿法不易破坏完全全的有机物（如如含氮杂环类类有机药物））以及某些不能用硫酸进行破坏的有有机药物。不适用于含易挥发性金属属（如汞、砷等等）有机药物物的破坏注意事项：（1）加热或或灼烧时，应应控制温度在在420℃以以下（2）一定要要灰化完全（3）经本法法破坏后，所所得灰分往往往不易溶解，，但不要轻易易弃去§4.3药品质量标准准分析方法验验证一、目的证明所采用的的分析方法适适合于相应的的检测要求，，方法验证过过程和结果均均应记载在药药品标准起草草和修订说明明中。二、用途（一）药品质质量标准起草草时，分析方方法需经验证证。（二）药物合合成方法变更更、制剂的组组分变更、原原分析方法进进行修订时，，分析方法需需经验证。三、需验证的的分析项目1.鉴别试试验；2.杂质定定量或限度检检查；3.原料或或制剂中有效效成分含量测测定；4.制剂中中其它成分（（降解产物、、防腐剂等））的测定；；5.溶出度度、释放度等等功能检查中中的溶出量等等的测试方法法。准确度精密度（重复复性、中间精精密度和重现现性）专属性检测限定量限线性范围耐用性四、验证内容容（一）准确确度（accuracy）准确度是指用用该方法测定定的结果与真真实值或参考考值接近的程程度。测定结果与真真实性的差异异用回收率R（（recovery）表表示①接近100%②②相对恒定定测定回收率的的具体方法可可采用“回收试验法”和“加样回收试验验法”。回收试验空白+已知量量A的对照品品（或标准品品）测定，测测定值为M加样回收试验验已准确测定药药物含量P的的真实样品+已知量A的的对照品（或或标准品）测测定，测定值值为M数据要求规定的范围内内，至少用9次测定结果果评价，如制制备三个不同同浓度样品各各测三次。RSD一般在在2%以内。。1.含量测测定方法的准准确度原料药可用已知纯度度的对照品或或样品进行测测定，或用本本法所得结果果与已建立准准确度的另一一方法测定的的结果进行比比较。制剂可用含己知量量被测物的各各组分混合物物进行测定，，即采用在空白辅辅料中加入原原料药对照品品的方法。如不能得到制制剂的全部组组分，可向制制剂中加入已已知量的被测测物进行测定定，或与另一一个已建立准准确度的方法法比较结果。。中药分析的准确度一般般用加样回收收试验衡量。。中药回收率率一般要求在在95～105%范围内，有些些方法操作步步骤繁多时，，可要求在90～110%范围内。2．杂质定量测测定的准确度度可向原料药或或制剂中加入入已知量杂质质进行测定。。如果不能得得到杂质或降降解产物，可可用本法测定定结果与另一成熟的方方法进行比较。（二）精密度度（precision）精密度是指在在规定条件下下，同一个均均匀样品，经经多次（n））取样测定所所得结果之间间的接近程度度。——系指每次次测定结果与与多次测定的的平均值的偏离程度用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差差(RSD)（变异系数数，CV）表示。方法精密度——表示该分分析方法的可重复性(reproducibility)——反映分析析方法的可操作性，是方法验验证的基本要要点之一精密度方法的精密度以三种形式表达（1）重现性（2）中间精密度（3）重复性精密度在不同实验室室由不同分析析者测定结果果的精密度。。(药典分析方方法的建立））第一章（1）重现现性(reproducibility)重现性指采用用相同方法，，在不同实验验室用同一试试验物质，由由不同操作者者使用不同设设备所得试验验结果的一致致性。当分析方法将将被法定标准采用用时，应进行重重现性试验。。如建立药典分分析方法时通通过协同检验验得出重现性性结果，协同同检验的过程程、重现性结结果均应记载载在起草说明明中。精密度（2）中间精密度指同一实验室,不同的时间间由不同分析析者或使用不不同的仪器进进行测定的结结果的精密度度。第一章同一实验室，，不同时间由由不同分析人人员用不同设设备所得结果果的精密度。。考察随机变动因素素的影响。变动因素为不不同日期、不不同分析人员员、不同设备备精密度(3)

重复性(repeatability)重复性指采用用相同方法，，在同一实验验室用同一试试验物质，同同一操作者使使用同一设备备，在短时间间间隔内，在在相互独立试试验中所获得得结果的一致致性。第四章章在相同同条件件,由由一个个分析析者测测定所所得结结果的的精密密度。。在规定定的范范围内内，至至少用用9次次测定定结果果评价价，如如制备备三个个不同同浓度度样品品各测测三次次或把把被测测物浓浓度当当作100%，，至少少测6次进进行评评价。。精密度度精密度的大小用偏差表示，偏差越小说明精密度越高以标准准差SD或相对对标准准差RSD表示。。第四章章表示方方法绝对偏偏差相对偏偏差dr=××100%=平均值值精密密度度偏差系指测测得的的结果果与平平均值值之差差。绝对偏偏差di=测测得值值－平平均值值=xi-x（i=1，2，…，，n）==%平均偏偏差相对偏差：绝对偏差在平均值中所占的百分率

绝对偏偏差：：单项测测定与与平均均值的的差值值(︱d1︱+︱d2︱+….︱dn︱)/n=∑︱di︱/n平均偏偏差:指单单项测测定值值与平平均值值的偏偏差（（取绝绝对值值）之之和，，除以以测定定次数数。平平均偏偏差是是代表表一组组测量量值中中任意意数值值的偏偏差。。所以以平均均偏差差不计计正负负。例1：：计算算下面面这一一组测测量值值的平平均值值（），平平均偏偏差（（d平均），相相对偏偏差（（d平均﹪）55.51,55.50,55.46,55.49,55.51解：平均值值=∑xi/n平均偏偏差=∑︱di︱/n=∑︱xi-︱/n=(55.51+55.50+55.46+55.49+55.51)/5=55.49=(0.02+0.01+0.03+0.00+0.02)/5=0.016平均相相对偏偏差=∑︱di︱/n×100%=0.016/55.49×100%=0.028﹪表示方方法精密度度一般般用标准偏偏差(standarddeviation，SD或或Ｓ)或相对标标准偏偏差(relativestandarddeviation，，RSD)表示示若设供供试品品的测测定值值为Xi，则其其平均均值为为，且有有n个测定定值，，SD=RSD==——包包括批内(within-run或intra-assay)RSD—日内(within-day)和批间(between-run或或inter-assay)RSD—日间(between-day，day-to-day)标准偏偏差是反映映一组组供试试品测测定值值的离离散的的统计计指标标。SX======？2.测测定定法———分别测测定法法(ⅠⅠ)照准确确度项项下方方法，，取空空白生生物基基质(如血血浆)数份份，分分别在在同一一批内内和不不同批批间制制备高高、中中、低低3个浓浓度的的QC样品，，并分分析测测定。。批内RSD——每每一浓浓度5～6个样样品，，每个个样品品测定定1次次，用用随行行标准准曲线线分别别计算算3个个浓度度及每每1浓浓度的的RSD批间RSD——每每1分分析批批内每每一浓浓度制制备1个样样品，，每个个样品品测定定1次次；用用随行行标准准曲线线计算算3个个浓度度(每每一浓浓度5～6个分分析批批数据据)的的RSD2.测测定定法———连连续测测定法法(ⅡⅡ)若实际际样品品测定定所用用的分分析批批次少少于5批，，也可可进行行3个个批次次的连连续分分析(每1浓度度的每每1批批次为为5～～6个个样本本)———方差分分析法法批间RSD=批内RSD==第四章章分分析析方法法的建建立与与验证证第三节节分分析析方法法的验验证与与要求求例2用用ELISA（（酶联联免疫疫吸附附测定定）法法检测测vero-E6，细胞胞培养养上清清正常常标本本10份的的结果果（100××OD490值）为为2，，3，，3，，4，，4，，5，，5，，5，，6，，8，，求标标准差差。解：先先计算算∑Xi=2+3+3+…+6+8=45∑Xi2=22+32+32+…+62+82=229精密度度和准准确度度的关关系准确度度和精精密度度是两两个不不同的的概念念，但但它们们之间间有一一定的的关系系。应当指指出的的是，，测定定的精精密度度高，，测定定结果果也越越接近近真实实值。。但不能能绝对对认为为精密密度高高，准准确度度也高高，因因为系系统误误差的的存在在并不不影响响测定定的精精密度度，相相反，，如果果没有有较好好的精精密度度，就就很少少可能能获得得较高高的准准确度度。（1））精密密度是是保证证准确确度的的先决决条件件。（2））高精精密度度不一一定保保证高高准确确度。。精密度度高准确度度较差差，即系统统误差差较大大；甲乙丙准确度度高，，但精密密度较较差，，即偶然然误差差较大大；精密度度比较较好准确度度比较较好，，称为精精确度度高，，偶然误误差比比较小小系统误误差比比较小小用打靶靶时弹弹着点点为例例，说说明上上述二二个词词的意意义。。用靶靶心表表示其其值位位置，，星点点为每每次测测得值值的位位置偏差（（d）：测量量值与与平均均值之之差标准（（偏））差（（SD或S）相对标标准（（偏））差（（RSD）），也称称变异异系数数（CV））（三））检测限限（limitofdetection，，LOD）检测限限系指指试样样中被被测物物能被被检测测出的的最低低量。。是限限度试试验参参数，，无需需定量量测定定。常常用%、ppm、ppb表示示。1．非仪仪器分分析目目视法法用已知知浓度度的被被测物物，试试验出出能被被可靠靠地检检测出出的最最低浓浓度或或量。。2．信噪噪比法法用于能能显示示基线线噪音音的分分析方方法（（仪器器分析析方法法），，是把把已知知低浓浓度试试样测测出的的信号号与空空白样样品测测出的的信号号进行行比较较，算算出能能被可可靠地地检测测出的的最低低浓度度或量量。一一般以以信噪噪比（S/N））3∶∶1或或2∶∶1时的相相应浓浓度或或注入入仪器器的量量确定定检测测限。。3．数据据要求求应附测测试图图谱，，说明明测试试过程程和检检测限限结果果。（四））定量量限（1imitofquantitation，，LOQ））指样品品中被被测物物能被被定量量测定定的最最低量量，结结果应应具有有一定定准确确度和和精密密度。。常用用%、、ppm、、ppb表表示。。常用信信噪比比法确确定定定量限限，一一般以以信噪噪比（（S/N））为10∶∶1时相应应的浓浓度或或注入入仪器器的量量进行行确定定，也也可用用仪器器所测测空白白背景景响应应标准准差（（SD）的的10倍为为估计计值，，再经经试验验确定定。（五））专属属性（（specificity））指有其其他成成分（（杂质质、降降解物物、辅辅料等等）可可能存存在情情况下下采用用的方方法能能准确确测定定出被被测物物的特特性，，能反反映该该方法法在有有共存存物时时对供供试物物准确确而专专属的的测定定能力力。是是指该该法用用于复复杂样样品分分析时时相互互干扰扰程度度的度度量。。能准确并并专一测测出被测测物的能能力。是是在分析析复杂样样品混合合物时衡衡量其是是否受到到干扰及及其程度度的一种种方法。。专属性性药物分析析中考虑:杂质、、降解产产物、相相关物质质、制剂剂辅料。。生物药物物分析中考虑:内源性性物质干干扰,代代谢产物物的干扰扰,同时时服药时时的干扰扰。（六）线线性(linearity)在设计的的范围内内，测试试结果与与试样中中被测物物浓度直直接呈正正比关系系的程度度。数据要求求：应列出回回归方程程、相关关系数和和线性图图。指在一定定的浓度度范围内内,测试试结果与与供试物物浓度呈呈正比关关系的程程度。线性性第一章方法用作图法法或计算算回归方方程建立立。Y=ax+br=0.999浓度应包括一一定梯度度的5-8个浓浓度。对对于含量量测定要要求浓度度上限为为样品最最高浓度度的120%,下限为为样品最最低浓度度的80%,但但应高于于LOQ。（七）范范围指达到一一定精密密度、准准确度和和线性的的条件下下，测试试方法适适用的高高低限浓浓度或量量的区间间。（八）耐耐用性性(robusness)指测定条条件稍有有变动时时，结果果不受影影响的承承受程度度，为常常规检验验提供依依据。是是衡量实实验室和和工作人人员之间间在正常常情况下下实验结结果重现现性的尺尺度。目的为为常规检检验提供供依据.体现耐用用性因素素：被测溶液的的稳定性样品提取次次数时间试剂来源耐用性性指在测定条条件有小的的变动时,分析相同同样品所测测得的试验验结果的重重现程度.2.杂质质的限量检检查除专属属性、检测测限、耐用用性外，其其它都不要要求。杂质质的定量测测定除检测测限外，其其它都要求求。3.含量测定及及溶出量测测定除检测测限、定量量限外，其其它都要求求。（九）应用用1.鉴别别试验除专专属性、耐耐用性外，，其它都不不要求。不同分析方方法对验证证参数的要要求验证项目鉴别杂检溶释出放度度含量测定生物样品测定定量定性精密度---+++准确度-+--++检测限--+--+定量限-+---+专属性+++-++线性范围-+--++重复性-+--++耐用性++++++（十）各种种含量测定定方法对效效能指标的的要求1.容量量分析法：用原料药精精制品(含含量>99.5％)或对照品品考察方法法的精密度度，相对标标准差一般般应不大于于0.2％；进行回收率率试验。回收率一般般在99.7～100.3％％之间。2.UV法：用适当浓度度的精制品品进行测定定，其RSD一般不不大于1％。制剂的测测定，回收收率一般应应在98％～102％之间。线性：吸光度A一一般在0.2～0.7，浓度度点n＝5。用浓度度c对A作作线性回归归处理，得得一直线方方程，r应应大于0.999(n＝5)，方程的的截距应近近于零。3.HPLC法：：要求RSD<2％，回收率98％～102％之间。线性范围：：用精制品配配制一系列列标准溶液液，浓度点点n应为5～7，用用浓度c对对峰高h或或被测物的的响应值之之比进行回回归处理，，建立回归归方程，r应大于0.999，截距应应趋于零。。专属性：要考查辅料料、有关物物质或降解解产物对主主药的色谱谱峰是否有有干