版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
关于实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应第一页,共十五页,2022年,8月28日实验目的
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。第二页,共十五页,2022年,8月28日实验原理(一)蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡:电场中移向阴极不移动移向阳极第三页,共十五页,2022年,8月28日蛋白质的等电点:蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时,蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等,在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动,此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有特异的等电点。在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。第四页,共十五页,2022年,8月28日
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
第五页,共十五页,2022年,8月28日(二)蛋白质的沉淀
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。(1)可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中,并保持其天然性质而不变性。第六页,共十五页,2022年,8月28日
(2)不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质常变性而沉淀,不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固。蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷),并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
第七页,共十五页,2022年,8月28日
操作步骤(一)酪蛋白等电点的测定
1取同样规格的试管4支,按下表顺序分别精确地加入各试剂,然后混匀;2向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,加一管,摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10分钟后,再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。
第八页,共十五页,2022年,8月28日管号
蒸馏水(mL)
0.01mol/L醋酸(mL)0.1mol/L醋酸(mL)
1.0mol/L醋酸(mL)18.40.628.70.338.01.047.41.6第九页,共十五页,2022年,8月28日(二)蛋白质的盐析
无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同,析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀,当降低其盐类浓度时,又能再溶解,故蛋白质的盐析作用是可逆过程。第十页,共十五页,2022年,8月28日
加蛋白质溶液5mL于试管中,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀,加少量水,观察是否溶解,为什么?将管内容物过滤,向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白,加少量蒸馏水,观察沉淀的再溶解。第十一页,共十五页,2022年,8月28日(三)重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管,加入蛋白质溶液2mL,再加3%硝酸银溶液1—2滴,振荡试管,有沉淀产生。放置片刻,倾去上清液,向沉淀中加入少量的水,沉淀是否溶解?为什么?
第十二页,共十五页,2022年,8月28日(四)某些有机酸沉淀蛋白质取1支试管,加入蛋白质溶液2mL,再加入1ml5%三氯乙酸溶液,振荡试管,观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液,向沉淀中加入少量水,观察沉淀是否溶解。
第十三页,共十五页,2022年,8月28日(五)有机溶剂沉淀蛋白质取1支试管,加入2m
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 写字楼前台绿化租赁协议
- 建筑施工用电安全合同
- IT企业会计岗位合同
- 游乐园钢结构安装施工合同
- 押运员安全意识教育
- 商业大厦改造施工合同
- 广州医疗机构租房合同
- 大连市茶楼租赁合同
- 剧院空调系统工程合同
- 保健品公司财务主管招聘合同
- 全国职业院校技能大赛中职组(养老照护赛项)选拔赛考试题库500题(含答案)
- 2024中国石化齐鲁石化毕业生招聘11人高频考题难、易错点模拟试题(共500题)附带答案详解
- (高清版)DB42T 2179-2024 装配式建筑评价标准
- 部编版六年级上册《第4单元 口语交际:请你支持我》课件
- 2024-2030年中国井盖行业市场发展趋势与前景展望战略分析报告
- 《喜看稻菽千重浪》《心有一团火温暖众人心》《“探界者”钟扬》 统编版高中语文必修上册
- 12D401-3 爆炸危险环境电气线路和电气设备安装
- 校长外出考察报告10篇
- 2024广西继续教育公需科目(高质量共建“一带一路”)
- DB34∕T 3174-2018 旧水泥混凝土路面微裂均质化再生技术规程
- 《西游记》情节梳理及专项训练(21-40回)解析版
评论
0/150
提交评论