白花树种子超低温保存技术规程

T/CSMAXXXX－2018白花树种子超低温保存技术规程范围本标准规定了白花树[Styrax

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（Pierre）CraibexHartw.]种子超低温保存过程中的术语和定义、保存种子的选择、种子前处理、种子保存的量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。本标准适用于白花树种子的超低温长期贮藏。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.6农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7农作物种子检验规程其他项目检验术语和定义下列术语和定义适用于本文件。白花树Styrax

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（Pierre）CraibexHartw.为安息香科（Styracaceae）安息香属（StyraxLinn.）落叶乔木，其药用部位为干燥树脂树脂，是《中国药典（2015）》收载药材。种子油称“白花油”，可供药用，治疥疮；树脂称“安息香”，含有较多香脂酸，是医药上贵重药材，具有开窍醒神、行气活血、止痛的功效。白花树果实Styrax

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（Pierre）CraibexHartw.fruits果实为蒴果，果实近球形，直径10~12mm，顶端急尖或钝，外面密被灰色星状绒毛。白花树种子Styrax

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（Pierre）CraibexHartw.seeds白花树的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子栗褐色，卵形，密被小瘤状突起和星状毛。种子超低温保存seedofcryopreservation指将经过前处理的白花树种子置于液氮（-196℃）中保存。保存种子的选择果实采收8月至10月，果实由灰绿色变为灰棕色，且种子呈褐色时，即可采收，去除果壳，取出种子种子选择挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置于10℃冰箱中保存备用（存放时间不超过2个月）。种子前处理生活力检测参照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成2爿后放培养皿内，内侧面向下，滴入TTC溶液浸没种子，室温（25℃）避光放置4h后观察染色结果。生活力计算直接用肉眼对染色结果进行观察鉴定。凡胚及胚乳全部染成有XX的鲜红色，且组织状态正常的，为有活力的种子；否则为无生活力的种子。计算：生活力=有活力的种子数/总的种子数×100%待保存的白花树种子生活力应≥80%。含水量范围用尼龙网袋包裹白花树种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为2800:1，室温条件下干燥处理5~32h，在干燥过程中定期测定种子含水量，将种子含水量由35%~40%降至10%~38%。参照GB/T3543.6中的高恒温烘干法（130℃烘干1h）测定种子含水量（W0），W0=（鲜重-绝干重）/鲜重×100%。种子保存量白花树种子保存量不少于600粒，以便后期的活力检测使用。种子冷冻方式白花树种子超低温保存的冷冻方式为直接冷冻法，即将装有种子的15mL冻存管（每管28~30粒种子）迅速投入液氮中进行超低温保存。恢复培养种子解冻处理液氮中至少冻存24h后，取出2个冻存管，立即放入40℃水浴中快速解冻5min。冻后种子生活力检测取出1管解冻后的种子，参照5.1~5.2生活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥30%时视为保存成功。恢复培养将剩下1管解冻后的白花树种子，播种到带有无菌滤纸的发芽盒中，温度25℃～30℃，湿度70%～85%条件下培养，出芽周期大概60d。附录[1]TTC的配制和保存方法精密称取TTC1.00g，溶于100mL磷酸盐缓冲液中，制成浓度为1%的TTC溶液，调pH至6.5~7.5，置棕色瓶内4℃冰箱备用。磷酸缓冲液配置方法：溶液I：9.08g磷酸二氢钾溶于1L无菌水中；溶液II：35.81g磷酸二氢钠溶于1L无菌水中；I：II=2：3的比例混合制成磷酸盐缓冲液）参考文献中国科学院中国植物志委员会.中国植物志.第60（2）卷[M].科学出版社，2004（1987）：084[2]HwangShu-mei.JamesGrimes.Styracaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.1996.15:253-271.[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].XX，中国医药科技出版社，2015：148[3]傅家瑞，宋松泉