用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理

用Image-ProPlus(IPP分析免疫组化图片Mediacybernetics用Image-ProPlus(IPP11免疫组化图片分析原理根据染色染料颜色的深浅(光密度)及分布面积大小来确定目标蛋白的量染色区域分布面积与目标蛋白量成正比染色的颜色深浅(光密度)与目标蛋白量的定量关系符合朗伯-比尔定律,是对数关系1免疫组化图片分析原理211光密度与灰度一迷惑人的不同概念光密度:吸收光的物质的光学密度。(opticaldensity,就是常说的OD值)光密度值是直接与染色物质的量相关的。灰度:灰是不够黑,是反射亮度的单位。电子照片上像素的亮度称为灰度11光密度与灰度一迷惑人的不同概念3Gray:betweenwhiteandblackExample1.Thebrightvalueondisplayscreenisgrayvalue2.Thedarkvalueonawhitepaperisalsothegrayvalueblackwhitegray=0gray-256Gray:betweenwhiteandblack4Opticaldensity吸收光线的物质的光学密度■被测物质的量越多,光密度(○D值)越高,透射出的光越少,反映在照片上就越黑■OD值与物质的量直接相关,灰度值与○D值成对数关系,符合朗伯-比尔定律理论上○D值是从零到无穷大。实际应用中,○D值的范围常用0-2.0或者0-30blackwhiteOD=infinitOD=0Opticaldensity5用OD值是正确的分光光度计与酶标仪的测定值是OD值透射的显微镜图象上的光强度要用OD值■蛋白电泳条带的测量也是○D值。萤光显微镜及萤光分光光度计的测量值是萤光强度(Fluorescenceintensity)用EB染色的DNA凝胶电泳条带也是萤光强度,但处理方法与光密度相同,故也用OD值。这个OD与前面的OD又有不同的意义。它就是荧光的光密度。反映着荧光物质的多少。WesternBlot条带的测定也要使用○D值来进行定量用OD值是正确的6处理照片时用的却是灰度各种图象被拍摄成照片进行数字图象处理时,是对照片的灰度进行测量和计算的。但最后得到的结果还是需要换算回○D值来表达。所以对免疫组化照片的分析结果应该是一个OD值,光密度。不应该是灰度。准确地说,是对免疫组化照片的特定染色区域的灰度进行分析从而测量出组织切片的光密度值处理照片时用的却是灰度7用标准样品才能把OD值与样品量关联到一起OD值是一个没有单位的相对值。使用酶标仪或分光光度计时要作标准曲线。对电泳条带进行定量分析时一样要作标准曲线。电泳条带照片的灰度值与样品量的关系为指数函数。在把灰度值转换成OD值时,用一个标准点进行定量分析是不准确的。多个标准点的标准曲线亦有很大误差,因此只能说是半定量分析。在实际应用时,可以直接测量○D值,用以表达染色物质的相对的量用标准样品才能把OD值81.2定量分析的指标:IOD(Integratedoptiondensity)density将图片上各点的光密度值累加起来,得到|OD。此值与目标物质的总量成正比。|○D值除以目标分布区域的面积,得到平均density,此值反映了目标物质的单位面积浓度。对样品照片进行数字图像分析比较时,就是比较它们之间的平均光密度值的大小。1.2定量分析的指标:91.3比较两张照片的染色物质量的差别两张照片染色深度一样,染色面积大的质量大照片A照片B1.3比较两张照片的染色物质量的差别10用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理11用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理12用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理13用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理14用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理15用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理16用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理17用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理18用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理19用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理20用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理21用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理22用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理23用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理24用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理25用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理26用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理27用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理28用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理29用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理30用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理31用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理32用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理33用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理34用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理35用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理36用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理37用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理38用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理39用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理40用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理41用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理42用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理43用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理44用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理45用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理46用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理47用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理48用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理49用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理50用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理51用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理52用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理53用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理54用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理55用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理56用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理57用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理58用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理59用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理60用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理61用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理62用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理63用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理64用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理65用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理66用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理67用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理68用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理69用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理70用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理71用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理72用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理73用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理74用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理75用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理76用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理77用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理78用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理79用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理80用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理81用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理82用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理83用Image-ProPlus(IPP分析免疫组化图片Mediacybernetics用Image-ProPlus(IPP841免疫组化图片分析原理根据染色染料颜色的深浅(光密度)及分布面积大小来确定目标蛋白的量染色区域分布面积与目标蛋白量成正比染色的颜色深浅(光密度)与目标蛋白量的定量关系符合朗伯-比尔定律,是对数关系1免疫组化图片分析原理8511光密度与灰度一迷惑人的不同概念光密度:吸收光的物质的光学密度。(opticaldensity,就是常说的OD值)光密度值是直接与染色物质的量相关的。灰度:灰是不够黑,是反射亮度的单位。电子照片上像素的亮度称为灰度11光密度与灰度一迷惑人的不同概念86Gray:betweenwhiteandblackExample1.Thebrightvalueondisplayscreenisgrayvalue2.Thedarkvalueonawhitepaperisalsothegrayvalueblackwhitegray=0gray-256Gray:betweenwhiteandblack87Opticaldensity吸收光线的物质的光学密度■被测物质的量越多,光密度(○D值)越高,透射出的光越少,反映在照片上就越黑■OD值与物质的量直接相关,灰度值与○D值成对数关系,符合朗伯-比尔定律理论上○D值是从零到无穷大。实际应用中,○D值的范围常用0-2.0或者0-30blackwhiteOD=infinitOD=0Opticaldensity88用OD值是正确的分光光度计与酶标仪的测定值是OD值透射的显微镜图象上的光强度要用OD值■蛋白电泳条带的测量也是○D值。萤光显微镜及萤光分光光度计的测量值是萤光强度(Fluorescenceintensity)用EB染色的DNA凝胶电泳条带也是萤光强度,但处理方法与光密度相同,故也用OD值。这个OD与前面的OD又有不同的意义。它就是荧光的光密度。反映着荧光物质的多少。WesternBlot条带的测定也要使用○D值来进行定量用OD值是正确的89处理照片时用的却是灰度各种图象被拍摄成照片进行数字图象处理时,是对照片的灰度进行测量和计算的。但最后得到的结果还是需要换算回○D值来表达。所以对免疫组化照片的分析结果应该是一个OD值,光密度。不应该是灰度。准确地说,是对免疫组化照片的特定染色区域的灰度进行分析从而测量出组织切片的光密度值处理照片时用的却是灰度90用标准样品才能把OD值与样品量关联到一起OD值是一个没有单位的相对值。使用酶标仪或分光光度计时要作标准曲线。对电泳条带进行定量分析时一样要作标准曲线。电泳条带照片的灰度值与样品量的关系为指数函数。在把灰度值转换成OD值时,用一个标准点进行定量分析是不准确的。多个标准点的标准曲线亦有很大误差,因此只能说是半定量分析。在实际应用时,可以直接测量○D值,用以表达染色物质的相对的量用标准样品才能把OD值911.2定量分析的指标:IOD(Integratedoptiondensity)density将图片上各点的光密度值累加起来,得到|OD。此值与目标物质的总量成正比。|○D值除以目标分布区域的面积,得到平均density,此值反映了目标物质的单位面积浓度。对样品照片进行数字图像分析比较时,就是比较它们之间的平均光密度值的大小。1.2定量分析的指标:921.3比较两张照片的染色物质量的差别两张照片染色深度一样,染色面积大的质量大照片A照片B1.3比较两张照片的染色物质量的差别93用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理94用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理95用ImageProPlus分析免疫组化图片课件整理96用ImageProPlus分析免疫组化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