动物细胞培养和核移植

关于动物细胞培养和核移植第一页，共四十页，2022年，8月28日离体植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体植物体脱（去）分化再分化（芽、根）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养使用的培养基：

固体有机物（蔗糖）植物激素第二页，共四十页，2022年，8月28日植物体细胞杂交植物细胞A

植物细胞B

去细胞壁原生质体融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物组织培养植物细胞融合1、植物体细胞杂交的结果是产生了？2、这个过程中涉及的原理是？杂种植株细胞膜的流动性、植物细胞的全能性第三页，共四十页，2022年，8月28日多莉克隆猴第四页，共四十页，2022年，8月28日动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体胚胎移植核移植第五页，共四十页，2022年，8月28日

动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。1、概念：一、动物细胞培养第六页，共四十页，2022年，8月28日放入二氧化碳培养箱中培养动物细胞培养过程示意图关键词:接触抑制细胞贴壁原代培养传代培养2、过程第七页，共四十页，2022年，8月28日

幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞第八页，共四十页，2022年，8月28日动物细胞生长特性：细胞贴壁悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。第九页，共四十页，2022年，8月28日原代培养(primaryculture)传代培养

(subculture)动物组织消化后的初次培养。贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程称为传代培养。第十页，共四十页，2022年，8月28日

接触抑制

(contactinhibition)细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。第十一页，共四十页，2022年，8月28日NormalcellCancercell第十二页，共四十页，2022年，8月28日动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液（单个细胞）胰蛋白酶动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系遗传物质未改变遗传物质改变接触抑制剪碎多数组织细胞固定在表面生长和分裂。第十三页，共四十页，2022年，8月28日

细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。

细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：

细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第十四页，共四十页，2022年，8月28日3.动物细胞培养的条件:1、无菌、无毒的环境

（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基）3、温度和pH

(36.5+0.5度,PH=7.2-7.4)4、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2）

第十五页，共四十页，2022年，8月28日获得细胞或细胞分泌蛋白细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目4、植物组织培养和动物细胞培养的比较第十六页，共四十页，2022年，8月28日思考：1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？2、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？需要脱分化吗？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体不需要。采用定向诱导动物的干细胞。第十七页，共四十页，2022年，8月28日5、动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据第十八页，共四十页，2022年，8月28日探究1、植物组织培养过程要将组织分散成单个细胞吗？２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞吗？３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？没有是成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖，不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质第十九页，共四十页，2022年，8月28日６、细胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？１０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？蛋白质和磷脂能注意时间的控制不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛探究第二十页，共四十页，2022年，8月28日11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的过程叫做传代培养探究第二十一页，共四十页，2022年，8月28日14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养不都能发生突变，朝着癌细胞方向发展不是保存10代以内的细胞，因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分遗传物质发生改变，发生突变向癌细胞方向发展。探究第二十二页，共四十页，2022年，8月28日将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。1.动物细胞核移植的概念：二、核移植技术第二十三页，共四十页，2022年，8月28日2.分类：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易

细胞分化程度高，恢复全能性困难第二十四页，共四十页，2022年，8月28日供体细胞培养（MⅡ卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞受体细胞激活，完成减数分裂、发育胚胎移植3.过程第二十五页，共四十页，2022年，8月28日卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞第二十六页，共四十页，2022年，8月28日4.体细胞核移植技术的应用前景1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体第二十七页，共四十页，2022年，8月28日5.体细胞核移植技术存在的问题1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。第二十八页，共四十页，2022年，8月28日三、动物细胞融合1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。第二十九页，共四十页，2022年，8月28日诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）2、诱导的过程：原理动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的原生质体融合过程

细胞膜的流动性第三十页，共四十页，2022年，8月28日细胞A细胞B杂种细胞物理法、化学法灭活的病毒仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒过程3、用途：制备单克隆抗体第三十一页，共四十页，2022年，8月28日灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）第三十二页，共四十页，2022年，8月28日主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较第三十三页，共四十页，2022年，8月28日四、单克隆抗体单:单个细胞克隆:无性繁殖抗体:化学性质单一、特异性强第三十四页，共四十页，2022年，8月28日原始的方法获得抗体，特异性差，纯度低。想获得单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。问题：体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个淋巴细胞增殖呢？第三十五页，共四十页，2022年，8月28日抗体

抗原刺激效应B细胞筛选单一效应B细胞增殖，产生大量抗体缺点：特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏如何解决这一问题？动物体内第三十六页，共四十页，2022年，8月28日设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞根据阿根廷