实验大肠菌群的检验课件

实验目的掌握鉴别大肠菌群的方法掌握以最大概率数法测定大肠菌群数量的方法。实验目的1实验原理大肠菌群指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便,以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品有否被肠道致病菌污染。食品中大肠菌群以100m检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示实验原理2检验程序乳糖胆盐发酵臂36±1)℃24±2)h伊红美蓝琼庸平板36土1℃,18~24h兰染色乳糖发酬管36±1)℃24=2)h革兰氏阳性革兰氏阴性无芽孢杆菌不产气大肠蘭群阴性大肠群性][大断面群阴性报肯检验程序3实验设备恒温培养箱:(36±1)℃显微镜培养皿试管、移液管、三角烧瓶、小倒管天平载玻片实验设备4实验试剂乳糖胆盐发酵管:20g蛋白胨、5g猪胆盐及10g乳糖溶于L水中,校正pH为74,加25m溴甲酚紫指示液(0.4g儿),分装每管20m,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌20min。伊红美蓝琼脂平板:10g蛋白陈、29K2HPO4及179琼脂溶解于1L水中,校正pH至71,分装于锥形瓶内,121℃高压灭菌15min。临用时加人10g乳糖并加热溶化琼脂冷至50~55℃。加人20mL伊红溶液(20g/)和0ML美蓝溶液(6.5g/)摇匀,倾注平板实验试剂5乳糖发酵管:将20g蛋白陈和10g乳糖溶于1水中,校正pH至74,加入25mL溴甲酚紫指示液(04g/),按检验要求分装,并放人一个小倒管,加热至115℃高压灭菌15min灭菌生理盐水:0.9%乳糖发酵管:6革兰氏染色液①结晶紫染色液:1g结晶紫溶于20mL95%乙醇,与80m草酸铵溶液(10g/凵混合,摇匀。②革兰氏碘液1g碘与2g碘化钾混合后,用少量水溶解,稀释至300mL。③沙黄复染液025g沙黄溶于10m95%乙醇中,然后用90m水稀释,混匀。革兰氏染色液7实验内容与步骤1)检样稀释(无菌操作)①将25mL(或g)检样置于含225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶,充分振摇(固体检样用匀浆器,用8000-1000min的速度处理1min)制成1:10的均匀稀释液。②用1m灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,混匀,制成1:100的稀释液③另取1mL灭菌试管,按②操作依次做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1mL灭菌试管。实验内容与步骤82)乳糖发酵实验接种2mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内接种3个稀释度,每一稀释度接种3管,置(36土1)℃温箱内培养(24士2)h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠杆菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。2)乳糖发酵实验93)分离培养将产气的发酵管分别转接在伊红美蓝琼脂平板上,置(36士1)℃恒温箱内培养1824h。取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。3)分离培养10实验大肠菌群的检验课件11实验大肠菌群的检验课件12实验大肠菌群的检验课件13实验大肠菌群的检验课件14实验大肠菌群的检验课件15实验大肠菌群的检验课件16实验大肠菌群的检验课件17实验大肠菌群的检验课件18实验大肠菌群的检验课件19实验大肠菌群的检验课件20实验大肠菌群的检验课件21实验大肠菌群的检验课件22实验大肠菌群的检验课件23实验大肠菌群的检验课件24实验大肠菌群的检验课件25实验大肠菌群的检验课件26实验大肠菌群的检验课件27实验目的掌握鉴别大肠菌群的方法掌握以最大概率数法测定大肠菌群数量的方法。实验目的28实验原理大肠菌群指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便,以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品有否被肠道致病菌污染。食品中大肠菌群以100m检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示实验原理29检验程序乳糖胆盐发酵臂36±1)℃24±2)h伊红美蓝琼庸平板36土1℃,18~24h兰染色乳糖发酬管36±1)℃24=2)h革兰氏阳性革兰氏阴性无芽孢杆菌不产气大肠蘭群阴性大肠群性][大断面群阴性报肯检验程序30实验设备恒温培养箱:(36±1)℃显微镜培养皿试管、移液管、三角烧瓶、小倒管天平载玻片实验设备31实验试剂乳糖胆盐发酵管:20g蛋白胨、5g猪胆盐及10g乳糖溶于L水中,校正pH为74,加25m溴甲酚紫指示液(0.4g儿),分装每管20m,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌20min。伊红美蓝琼脂平板:10g蛋白陈、29K2HPO4及179琼脂溶解于1L水中,校正pH至71,分装于锥形瓶内,121℃高压灭菌15min。临用时加人10g乳糖并加热溶化琼脂冷至50~55℃。加人20mL伊红溶液(20g/)和0ML美蓝溶液(6.5g/)摇匀,倾注平板实验试剂32乳糖发酵管:将20g蛋白陈和10g乳糖溶于1水中,校正pH至74,加入25mL溴甲酚紫指示液(04g/),按检验要求分装,并放人一个小倒管,加热至115℃高压灭菌15min灭菌生理盐水:0.9%乳糖发酵管:33革兰氏染色液①结晶紫染色液:1g结晶紫溶于20mL95%乙醇,与80m草酸铵溶液(10g/凵混合,摇匀。②革兰氏碘液1g碘与2g碘化钾混合后,用少量水溶解,稀释至300mL。③沙黄复染液025g沙黄溶于10m95%乙醇中,然后用90m水稀释,混匀。革兰氏染色液34实验内容与步骤1)检样稀释(无菌操作)①将25mL(或g)检样置于含225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶,充分振摇(固体检样用匀浆器,用8000-1000min的速度处理1min)制成1:10的均匀稀释液。②用1m灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内,混匀,制成1:100的稀释液③另取1mL灭菌试管,按②操作依次做10倍递增稀释液,每稀释一次,换用一支1mL灭菌试管。实验内容与步骤352)乳糖发酵实验接种2mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内接种3个稀释度,每一稀释度接种3管,置(36土1)℃温箱内培养(24士2)h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠杆菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。2)乳糖发酵实验363)分离培养将产气的发酵管分别转接在伊红美蓝琼脂平板上,置(36士1)℃恒温箱内培养1824h。取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。3)分离培养37实验大肠菌群的检验课件38实验大肠菌群的检验课件39实验大肠菌群的检验课件40实验大肠菌群的检验课件41实验大肠菌群的检验课件42实验大肠菌群的检验课件43实验大肠菌群的检验课