罗氏HE4试剂性能评估综述- -刘万里主任课件

罗氏HE4试剂性能评估综述中山大学附属肿瘤医院刘万里内容罗氏HE4检测原理Elecsys®HE4SFDA注册研究概况Elecsys®HE4性能评估Elecsys®HE4性能小结

内容罗氏HE4检测原理Elecsys®HE4SFDA注册研究概况Elecsys®HE4性能评估Elecsys®HE4性能小结

ECL(IA)TechnologyE Electro C ChemoL LuminescenceI ImmunoA Assay

方法、仪器、试剂三位一体的特定自动化分析，系统解决了大规模样本检测稳定、高效、快速等问题。是医学超微量分析的一次战略性革命RocheHE4检测试剂设计

双抗体夹心一步法原理：双抗体夹心法检测时间：18分钟1st孵育:９分钟

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µL血样,生物素标记HE4特异性单克隆抗体，钌标记HE4特异性单克隆抗体，形成抗原抗体复合物2nd孵育:９分钟加入链酶亲和素包被的磁珠，通过生物素和链酶亲和素反应，形成复合物

检测:

反应复合物送入测量池，磁珠结合至电极表面，未结合的反应物通过ProCell清除通过对电极增加电压触发化学发光光电子释放，后者通过光电倍增管检测RocheHE4检测试剂设计

HE4检测原理生物素标记的HE4单克隆抗体Ru待检样本中的HE4(10μL)钌标记的HE4单克隆抗体Ru链酶亲和素包被的磁珠Ru进行检测9min9minRocheHE4试剂成分

试剂–工作溶液M:

包被链酶亲和素的微粒（透明盖），1瓶，6.5mL：包被链霉亲和素的微粒0.72mg/mL；防腐剂

R1:

生物素化抗人HE4抗体（灰盖），1瓶，10mL：生物素化单克隆抗HE4抗体（小鼠）0.75mg/L，磷酸盐缓冲液100mmol/L，pH值6.5；防腐剂R2:

钌复合物标记的抗人HE4抗体（黑盖），1瓶，10mL：钌复合物标记的单克隆抗HE4抗体（小鼠）1.5mg/L；磷酸盐缓冲液100mmol/L，pH值7.4；防腐剂卵巢癌肿瘤标志物

提供HE4和CA125检测的厂家

HE4CA125Roche(Elecsys,cobase)Abbott(Architect)Beckman(Access)Siemens(Immulite,Centaur,Vista)Diasorin(Liaison)B.R.A.H.M.S(Kryptor)BectonDickinson(TriPath)plannedCanAg（ELISA）罗氏所有免疫平台均可以同时提供CA125和HE4的检测Elecsys®HE4SFDA注册研究

研究概况研究时间：2011.1~2011.6研究中心中国医学科学院肿瘤医院浙江大学医学院附属妇产科医院华中科技大学同济医学院附属同济医院山西省肿瘤医院Elecsys®HE4SFDA注册研究结果

共入组1487例样本标本类型医科院肿瘤浙大妇产武汉同济山西肿瘤合计卵巢上皮癌103494045237疑似样本（盆腔包块患者）611916868388其他肿瘤（子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）621363648282表观健康人群12012511082437RF阳性111091040溶血1010101141脂血1011101142黄疸10001020合计3875322832851487Elecsys®HE4SFDA注册研究结果

各研究中心不精密度结果

CV（低浓度）CV(中浓度)医科院肿瘤医院2.21%4.35%浙江大学妇产医院1.05%1.11%武汉同济医院1.06%0.62%山西省肿瘤医院1.61%0.66%选取中、低浓度的样品各一份，分别检测10次，计算CV值Elecsys®HE4SFDA注册研究结果

各研究中心质控结果良好

参比试剂考核试剂CA125医院名称质控名称HE4质控名称PreciControlHE4质控名称PCTM质控批号2796427092270931560800015608100靶值47.5pmol/L391.5pmol/L45pmol/L341pmol/L32.6(U/mL)101(U/mL)范围33-62313-47035.0-53.6262–40225.76~39.4479.79~122.21医科院肿瘤检测结果43.78447.446.18340.828.7101.7浙大妇产检测结果41.34367.7447.8344.529.0280.24武汉同济检测结果39.59360.542.7432133.6291.94山西肿瘤检测结果50.98441.7143.43343.932.9686.91Elecsys®HE4SFDA注册研究结果

与参与试剂有良好的一致性y=1.0942x+2.7976相关系数r＝0.949回归系数R2＝0.8997Elecsys®HE4SFDA注册研究结果

ROMA指数可将盆腔肿块患者进行风险分级绝经前:PI=-12,0+2,38*LN[HE4]+0,0626*LN[CA125]绝经后:PI=-8,09+1,04*LN[HE4]+0,732*LN[CA125]582例样本被正确分入高/低风险组ROMA(%)=Exp(PI)x1001+Exp(PI)注：风险指数PI（PredictiveIndex）LN为自然对数病例报告患者，女，45岁，B超检查发现卵巢肿块，罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4浓度，结果为136pmol/L。如何判断这患者HE4结果是否异常？临床判断HE4检测结果应考虑的问题参考值HE4实验室检测误差样本检测前误差：标本采集影响

标本保存的影响

干扰物质的影响

人生理变异治疗措施的干扰（药物）其他疾病的干扰HE4在不同观察组间的差异OC组，不同年龄的HE4良性病变组，不同年龄的HE4健康对照组组，不同年龄的HE4年龄因素对HE4浓度的影响HE4在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估所有病例的ROC曲线青年组的ROC曲线

AUCCutoff点(PM)敏感性特异性总体0.8398267.3%93.6%青年组0.9467583.4%92.6%2、实验室检测误差日间精密度（罗氏）日间精密度（验证）在三个研究中心进行的重复性检测的结果：不精密度（CV)＜５％低值（44.3）CV=2.1%高值（1317）CV=1.9%2、实验室检测误差初步结论实验室检测误差<5%样本检测前误差血清、血浆（EDTA、肝素）样品保存（24h内）血清血浆，血清24h内检测，HE4无显著性差异样本检测前误差

对HE4浓度分别在65pmol/L和155pmol/L进行检测，判断与乳清酸性蛋白家族其他成员的交叉反应性Elafin:弹性蛋白酶特异性抑制剂SLPI：分泌性白细胞蛋白酶抑制剂干扰物质的影响：交叉反应（罗氏）结论：交叉反应对HE4结果的影响可忽略不计。样本检测前误差HE4生理变异的影响（n=2)初步结论:HE4个体日间变异度<10%样本检测前误差

肺部疾病的影响

肾功不良的影响结论：肺部疾病，尤其是肾衰显著影响HE4水平总结1、HE4的参考值需按年龄段设定2、HE4实验室检测误差<5％2、HE4个体日间变异度约10％3、肺部疾病和肾衰HE4水平显著升高4、其他样品前检测影响因素对HE4的影响不显著5、HE4结果超过参考值上限20％判断为异常，对高于正常参考限但未大于20％的患者，应连续追踪观察。患者HE4结果的初步判断患者，女，45岁，B超检查发现卵巢肿块，罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4浓度，结果为136pmol/L肾功正常，无肺部疾病病理诊断：卵巢癌实验室检测误差约136x5％＝6.8个体变异＝36x10%=13.6预计该患者HE4的结果为115.6－156.4范围内该年龄组参考限为80pmol/L结论：该患者HE4异常增高内容罗氏HE4检测原理Elecsys®HE4SFDA注册研究概况Elecsys®HE4性能评估Elecsys®HE4性能小结

Elecsys®HE4性能参数

小结Elecsys®HE4性能参数检测时间18min检测原理一步三明治法校准2点定标溯源性HE4EIAfromFujirebioDiagnostics,Inc.样本类型

采用含有分离胶标准样本管采集的血清

肝素锂，K2-EDTA和K3-EDTA抗凝的血浆样本量10µL空白最低限(LoB)5pmol/L检测范围(LoD)15–1500pmol/L总不精密度cobase411analyzer,E2010:2.7–4.3%cobase601/e602modules,E170:2.8–3.4%可重复性cobase411analyzer,E2010:1.3–1.8%cobase601/e602modules,E170:1.5–1.9%Elecsys®HE4

来自巴塞罗纳Dr.Molina的评价„...ElecsysHE4提供准确的方法学检测，并拥有优秀的精密度....“

„...临床表现...显示与其他方法有良好的一