牛病毒性腹泻与粘膜病课件

牛病毒性腹泻与黏膜病

牛病毒性腹泻，又称牛病毒性腹泻/粘膜病，是由BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及猪的一种重要传染病。临床主要表现为发热、粘膜糜烂、溃疡、白细胞减少、持续感染、咳嗽及怀孕母牛流产或产生畸形胎儿。同一种病原引起的多种病状的传染病

我国1980年李佑民首从国外进口奶牛分离出BVDV；上世纪90年代郑志刚等在全国范围内调查，BVDV平均阳性率为19.56%，近年来本病在国内阳性检出率呈逐年上涨的趋势。本病给养牛业造成明显损失（产乳↓、重↓、流产等）。牛病毒性腹泻1BVDV的流行病学

2BVDV的病原学

3BVDV的基因结构及其蛋白4BVDV的研究进展

内容摘要56BVDV的防治

BVDV的主要诊断方法

BVDV的病原学属黄病毒科、瘟病毒属有囊膜，直径25-30nm，正链RNA胎牛肾、睾丸、猪肾、胎羊睾丸可增殖传代BVDV。BVDV可以分成致细胞病变型（CP）和非致细胞病变型（NCP）。BVDV的基因结构及其蛋白

5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1(gp25)-E2(gp53)-P7-NS2-3(P125)-NS4A(P10)-NS4B(P30)-NS5A(P58)-NS5B(P75)-3',其中C，ERNS，E1，E2是病毒的结构蛋白。其余为非结构蛋白。BVDV的主要基因、蛋白研究进展ADDYOURTITLE核衣壳组成成分，具有免疫原性BVDV基因组具有较高的保守性瘟病毒属内高度保守，在病毒复制、病毒RNA转译或者病毒多聚蛋白加工过程中具有重要作用5‘-UTRCNS3ERNS内有一高度保守结构域，可用于研究亚单位疫苗，也可作为基因工程诊断抗原E2与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附的主要部位Npro具有自体蛋白酶活性，有较高的保守，可以对瘟病毒进行种、群或型的鉴定E2：是BVDV的主要保护性抗原，能诱导机体产生中和抗体，所以新型疫苗都是针对E2结构蛋白的。也是与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附的主要部位，E2基因一直是国内外学者研究瘟病毒的重点。E2是形成BVD基因工程疫苗的最好的选择。BVDVE2DNA疫苗是近年来BVDV免疫研究的热点。如2007吴明福等构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-E2并免疫小鼠，可诱导小鼠产生一定程度的体液和细胞免疫应答。血清学诊断免疫学诊断诊断方法的进展分子生物学诊断123免疫学诊断酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫荧光技术（IFA）免疫过氧化物酶技术（IP）免疫荧光技术（IFA）

免疫荧光技术（IFA）又称荧光抗体技术，可用于检测细胞培养物以及病变组织的冰冻切片中BVDV感染情况。

免疫荧光抗体技术特异、敏感、快速，但它需要荧光显微镜，使得此技术无法得到推广应用。ELISA

ELISA常被用于检测组织器官培养物中BVDV，监测牛群中BVD抗体水平，评估潜伏感染情况。其中最常用的是双抗夹心ELISA和间接ELISA，也有使用BVDV单克隆抗体与ELISA联合诊断BVD。研究较多的IBRV诊断蛋白有NS3，E2蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）

免疫过氧化物酶技术（IP）诊断BVDV准确、可靠，可用于了解BVD的总体分布情况。链酶亲和素-生物素过氧化物酶检测方法，可以用来检测福尔马林固定、石蜡包埋组织切片中的BVDV。近年来，为了避免非特异性染色反应，则可以使用单克隆抗体+生物素化抗鼠抗体-链酶亲和素过氧化物酶检测方法。免疫过氧化物酶技术（IP）分子生物学诊断RT-PCR核酸探针检测12

PCR引物多数选在BVDV保守区5’-UTR和NS3基因内，尤其5’UTR是BVDV进行鉴定、基因分型的首选区域。

2007年王伟利建立了BVDV荧光RT-PCR检测方法并进行了初步应用，2007年国家质量监督检验检疫局制定了牛病毒性腹泻/黏膜病反转录聚合酶链反应操作规程核酸探针检测（NAH）

与传统方法相比，该技术敏感，特异性强，而且应用很广泛，NAH可直接检测脏器组织和血细胞中的BVDV。NAH技术应用最广泛的是核酸标记法，按核酸探针标记物不同可分为两类：一类是放射性同位素（如32P，3