样品提纯课件

柱层析根据被分离组分对固定相（硅胶）吸附能力的差异，以及洗脱剂（PE:EA)洗脱能力的差异来进行分离的选择洗脱剂让所要的点在板的1/3到1/2之间，比如这种情况，一般的洗脱剂选择是:先用少量10:1与5:1的,主要用3:1的过，若第二个点出来后，可接着用2:1或1:1的过。PE:EA=3:1SMP柱层析过程洗涤，吹干装硅胶，敲平润柱子制样，上样，压样，加洗脱剂加压，接试管点板，收集旋干装硅胶，敲平

装硅胶时，抽气，敲实，倒硅胶同时进行。敲打时要敲击柱子正面，否则会把柱子敲弯。装一定高度后，敲平表面。*重要事项：装柱一定要在抽风良好的通风橱中进行，并带好口罩，以防吸入过多的硅胶或氧化铝粉尘而对身体产生致命伤害。

润柱子

沿柱子内壁加入石油醚，要防止把硅胶表面冲出坑。石油醚高出硅胶表面一定高度后，渐渐放出液体，至溶剂液面和硅胶层表面相齐。上样

液体上样：把要分离的试样配制成适当浓度的溶液。将硅胶上多余的溶剂放出，直到柱内液体表面到达表面时，停止放出溶剂。用干净的滴管沿管壁加入试样溶液，注意不要使溶液把硅胶层冲松浮起，试祥溶液加完后，开启下端旋塞，使液体渐渐放出，至溶剂液面和硅胶层表面相齐。固体上样：当待分离样品为固体时不能直接上样，一般采用拌硅胶上样法。将固体样品溶于溶剂中，加入一定量的粗硅胶，充分摇匀，然后旋干溶剂，得到的细粉状固体后小心倒入准备好的层析柱中，并敲平表面。压样，加洗脱剂

压样：上样后加入一层石英砂以防加入洗脱剂破坏其表面。链接溶剂球，用卡子卡住，否则加压时会蹦开。选择柱子的选择柱子尺寸的选择：根据被分离物质的多少来选择柱子的粗细，量多选择的柱子越粗。硅胶高度的选择：根据被分离组分的多少以及点在板上的分布情况，一般量多装的高，点在板上分离的不明显装的越高洗脱剂的选择

通过爬板来选择洗脱剂的极性，选择的洗脱剂的极性要使所要的点在板的1/3到1/2之间，刚开始加的洗脱剂要低于这个极性。然后慢慢提高到此极性。选择洗脱溶剂种类时应考虑到被分离各物质的极性和溶解度。非极性化合物用非极性溶剂，而极性溶剂对于洗脱极性化合物是有效的。被分离各物质应在洗脱溶剂中有非常好的溶解性，否则会严重影响分离效果。单一溶剂往往不能达到有效的分离，通常可以选用混合溶剂作洗脱剂。

常用石油醚陪乙酸乙酯，二氯甲烷陪甲醇。注意事项1、继续不断地加入洗脱剂，应保持一定高度的液面，在整个操作中勿使硅胶层表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，易使硅胶柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。2、控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。3、由于硅胶表面活性较大且显弱酸性，有时可能促使某些成分破坏，所以应尽量在一定时间内完成一个柱色谱的分离，以免试样在柱上停留的时间过长，发生变化或扩散而影响分离效果斑点的检出展开后的薄层板，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。立刻用铅笔标出紫外灯下显出的斑点。若点样太浓，易造成斑点太大，相互交叉或拖尾，不能达到很好的分离效果。若点样太稀，不易比较斑点的位置。若斑点拖尾，酸性物质加酸，碱性物质加碱。（可以尝试，但不一定管用）重结晶重结晶的原理是利用混合物中各组分在某种溶剂中的溶解度不同，而使它们互相分离。它可用于固体物质（一般1克以上）的分离、纯化处理。一般步骤选择适宜的溶剂；将粗产品溶于适宜的热的溶液中制成饱和溶液；乘热过滤除去不溶性杂质。如溶液的颜色深，则应先

脱色，后过滤；冷却溶液，使之慢慢析出结晶而杂质则留在母液中，或者杂质析出，而欲提纯的化合物则留在溶液中；抽气过滤分离母液，分出结晶体或杂质；洗涤结晶，除去附着的母液；干燥结晶。容剂的选择与被提纯的有机物不起化学反应，对被提纯的有机物应在热溶液中易溶，而在冷溶液中几乎不溶，如果杂质在热溶液中不溶的，宜乘热过滤去杂质，溶剂的沸点，不宜太低，也不宜过高。太低，溶解度改变不大；过高，附于晶体表面的溶剂不易除去。常用的溶剂有苯、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、乙醇等。混合溶剂也经常被采用，如乙醇与水，乙醇与乙醚，乙醇与丙酮，石油醚与乙醚，苯与石油醚等。溶剂的用量一般是溶质用量的10-30倍量。重结晶经验含羟基，氨基而且熔点不太高的物质尽量不选择含氧溶剂，因为溶质和溶剂形成分子间氢键后很难析出。过柱预纯化，粗分离后再结晶，这样的话重结晶成功率会大大提高。不要轻易冷冻，自然降温得到固体纯度会大大提高。晶种的取得，用玻璃棒沾一滴溶液，挥干。实验装置蒸馏瓶克氏蒸馏头毛细管抽气部分水泵或油泵接受器温度计冷凝管某些有机化合物压力与沸点的关系

沸点/℃压力/Pa(mmHg)

水氯苯

苯甲醛

水杨乙酯甘油

蒽101325(760)1001321792342903546665(50)3854951392042253999(30)3043841271922073332(25)2639791241882012666(20)2234.5751191821941999(15)17.529691131751861333(10)11