uplc-school4实验操作开机前准备工作

WatersWaters有心©2008Waters

(ACQUITY系统操作UPLC对流动相–有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好–水或缓冲盐流动相要用超纯水(18.2MΩ),UPLC对洗针液)–超纯水含5%-10%特别提示:以上溶剂或溶液均需–用0.22μm的膜过滤并–用洁净的玻璃容器盛放,避免©2008WatersCorporationACQUITYACQUITYUPLCTM打开计算机电源,进入Windows操作系（如果有）打开Hub(网络集线器)打开ACQUITYUPLCBSM和SM先不要开TUV或PDA–光学检测器的电源需待流动池内充满液体后待各仪器设备通过自检后(绿灯长亮),Empower输入用户名及密码后进入Empower主画©2008WatersCorporation左击“Run ©2008WatersCorporation选择Project及ACQUITYUPLC点击此按©2008WatersCorporation控制台图©2008WatersCorporation SM样品管理器控制面 样品管理器实际温实际柱样品管理器温度

柱温设

控制台图©2008WatersCorporation在SampleManager控制面板上©2008WatersCorporationAcquityAcquityBSM的准备灌注柱塞杆清洗液(PrimeSeal以下情况需要做此操作Prime,例如新安装仪器或泵流路中溶液走当泵几小时或更长时间未用过缓冲液流动相注意al为避免污染,请勿循环使用Sealwash©2008WatersCorporation将Sealwash出口端从废液盘上摘下,连接到注射选择Control>PrimeSealwash,点击©2008WatersCorporation点击可停止Prime过©2008WatersCorporationAcquityAcquityBSM的准备用于排除泵头及管路中的用于更换从储液瓶到溶剂管理器之间的在下列情况下需要Prime二元溶剂启用新的二元溶剂管理器或新的停机4更换流动©2008WatersCorporation在此界面下,选择Control>PrimeA/B©2008WatersCorporation BSM湿灌注的步 按start按钮©2008WatersCorporation SM样品管理器的准 检查确认密(Characterizingthesealtheneedleandsampleloopvolumes)加载(Loading)样品©2008WatersCorporation©2008WatersCorporation灌注进样针和样品注射器的目的是准备样品管冲洗里面的进样针、外部的刺穿针，和进样口排除管路中的提示并所有的试剂瓶都要使用滤头,并确保溶剂体积足够用于做灌注,例如,作5次灌注,每种溶剂要用去大约20mL要求:©2008WatersCorporation从左边的目录中，选择SampleManager,单击Control>Prime©2008WatersCorporation 灌注SM注射器操 出现PrimeSyringes对话在Numberofcycles中输入要作灌注的次数(默认值为建议:如果更换溶剂，建议做5－7次灌注单击OK.当系统状态是“Idle(待机),”就表示灌注做完提示:每做一次灌注大约需要2－4©2008WatersCorporation 冲洗进样针(Wash 清洗进样针可以去掉进样针、刺穿针和进样口的外部和的残要求:不要使用缓冲盐作为洗针液©2008WatersCorporation 冲洗进样针(Wash 特别提示不能让强洗针液接触弱洗针液要与流动相一致,如果稀释样品，弱洗针液应与稀释样品的溶剂用于洗针的有机溶剂种类应与色谱使用的有机溶剂经验规则在洗针过程中应确保强洗针液完全被弱洗针液所去洗针(其默认体积是200μL可以增加弱洗针液的体©2008WatersCorporation,要想得到好的柱效，弱洗针液必须等同–初始梯度的–等度时和流动相比不推荐缓冲盐作为弱洗推荐的弱洗针液和强洗针液如下色谱弱洗针溶强洗反相/缓冲100H2O025%甲醇或乙50到100甲醇©2008WatersCorporation在控制台的SampleManager窗口,单击ControlWash0.0提示:同时使用强洗针液和弱洗针液建议值:200500单击OK.开始洗针当洗针过程完成时,回到“Idle”洗针未完成时中断,可以点击Control中的Reset©2008WatersCorporation,/新的衬垫(和浅盘)使之较易于安装/移动预热稳P/N–柱预热稳©2008WatersCorporation部件号P/N

©2008WatersCorporation整体式配件,手指拧紧截取0.0025〃长的一段PEEK尽可能短的管路以尽量减小它在启动包(startupkit)中,不是普通©2008WatersCorporation 启动TUV(PDA)检测 开测. 始灯热概钟©2008WatersCorporationStartStartup©2008WatersCorporationRefreshRefreshSystem©2008WatersCorporationRefreshRefreshSystem©2008WatersCorporation©2008WatersCorporation©2008WatersCorporationACQUTIYACQUTIYUPLCLC实验经验以得到ACQUITY推荐用ACQUITYUPLC的器—只能使Pyrex溶剂瓶.不要使Duran溶剂瓶,因为它不适用于pH7另一种选择Teflon材料的—不要使Nylon材料滤膜推荐使0.2umPTFE/GHP材料滤©2008WatersCorporation尽量保持一组溶剂瓶和玻璃器皿专用于ACQUITY系溶剂瓶要贴上注明流动相配制日期的标不要往系统上的流动相瓶中“添加”系统上的溶剂瓶要用合适的瓶盖©2008WatersCorporation检查溶剂是否已过滤,是否是用0.2umPTFE/GHP膜过推荐使用Milli-QA10纯水装置制备不建议使用瓶装饮©2008WatersCorporation用以下方法的一种或几种组合制备—0.2um滤膜过滤,例如：Acrodic25mmPolypropylenehousingmaleluer,0.2um200pcs/pkg(WAT097965)—液液萃取后0.2um膜过—离心(高于8000rpm离心200.2um膜过滤转移至新样品瓶中©2008WatersCorporation甲超纯乙异丙乙二甲基亚N,N-二甲基甲©2008WatersCorporation二氯甲氯乙酸乙氯化溶剂类(例如三氯苯甲>5%的强©2008WatersCorporation0.2%0.1%10mM磷酸盐缓50mM铵缓冲0.1%0.1%0.1%六氟丁10mM碳酸氢50mM乙酸©2008WatersCorporationACQUITYACQUITYUPLCSTARTUP,系统启动)的STARTUP功能,参见下图所示.START©2008WatersCorporation(PRIME(PRIME每天或在每次运行样品组之前都—灌注清洗管路3更换流动相时—A/B10—灌注清洗管路5©2008WatersCorporation©2008WatersCorporation正确固定定量环并确保环的接头正确地插入六通阀的在上紧压紧螺丝之前,)将定量环的接头管路与六通阀连接的位置做正确选用与定量环大小相关的适用的进样方式（参见下表©2008WatersCorporation定量环体不充满定量251020针溢0.51.52.5-5.0压力辅2.0–2.0充满定量251020压力辅25指><±©2008WatersCorporation项满(Full针溢(PartialLoop,pressureassist)优最重现的峰面进样体仅用于用户指定的进样缺需要较大的样品体需要比进样体3uL峰面积重现性最样品耗用户指定的进样3uL只是用户指定的进样体适用的定量可用于所有的定量不推荐用于小定量适用的进样体100%环体积最少前后各4uL(默认值©2008WatersCorporationACQUITYACQUITYUPLC©2008WatersCorporation选择适合的UPLC选择适合的UPLC样品瓶是UPLC使用不当往往会使SM是造成定量不准的重要是色谱图质量不佳的影响提示—测试样品与样—©2008WatersCorporation选择适合的UPLC选择适合的UPLC透明玻—Type1ClassA（33号）硼最好的化学惰性—Type1ClassB（51号）棕色玻—所有棕色玻璃瓶是Type1ClassB（51号—用于对光敏感聚丙—:°C©2008WatersCorporation所有Waters透明样品瓶是TypeI“33号膨化玻璃更少游离离TypeI“51号膨化玻璃TypeITypeI0.3-0.4-KND-ND-ND-Resultsin©2008WatersCorporation选择适合的盖子选择适合的盖子CAP螺纹—传统盖与垫分(装时可能带来污染—－更小的污染有预开口

©2008WatersCorporation选择不适合的瓶垫会导致—样品蒸发造成—重复进样重现—UPLC针头—垫移—邻苯二甲酸二辛酯(硅树脂硅氧烷(硅树脂从空气中吸附(硅树脂©2008WatersCorporation换成预开口的垫换成预开口的垫会打坏SM取样取样量减小刺穿选择盖垫一体式瓶盖垫一体，排除垫移©2008Wate