免疫学检测技术基本原理课件

2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院1免疫诊断抗原或抗体的检测免疫细胞的检测免疫检测方法的应用2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院1免疫诊2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院2抗原抗体反应的特点特异性可见性可逆性2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院2抗原抗2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院3影响抗原抗体反应的其它因素电解质酸碱度温度2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院3影响抗2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院4抗原-抗体反应的基本检测方法根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分因素，可将抗原抗体反应分为凝集反应(agglutination)沉淀反应(precipitation)

补体参与的反应采用标记物的抗原抗体反应等2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院4抗原-2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院5凝集反应2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院5凝集反2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院6沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，此类反应称为沉淀反应；多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散。即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇时形成可见的白色沉淀2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院6沉淀反2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院7单向免疫扩散

(singleimmunodiffusion)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院7单向免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院8双向免疫扩散

(doubleimmunodiffusion)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院8双向免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院9免疫电泳(immunoelectrophoresis)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院9免疫电2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院10对流免疫电泳2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院10对流2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院11免疫比浊(immunonephelometry)在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成免疫复合物，液体混浊。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多则浊度越高，可绘制标准曲线并依据反应液体的浊度推算样品中抗原含量。2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院11免疫2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院12补体参与的反应应用抗体与红细胞表面的抗原结合，激活反应体系中的补体成份，能导致红细胞溶解，则可根据溶血现象判定试验结果。如溶血空斑试验、HLA的血清学分型等2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院12补体2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院13采用标记物的抗原抗体反应免疫标记技术指用荧光素、酶或放射性核素、胶体金等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变后者的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院13采用2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院14

免疫荧光法(immunofluorescence,IF)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院14免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院15酶免疫测定(enzymeimmunoassay,EIA)将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光密度（OD）值以反映抗原含量，灵敏度可达每毫升ng甚至pg水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)等。2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院15酶免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院16酶联免疫吸附试验

(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院16酶联2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院17其它常用标记方法放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)

化学发光免疫分析：将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行反应，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用自动发光分析仪接收光信号，测定光子产量，以反映待检样品中抗体或抗原含量。免疫胶体金法2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院17其它A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院19免疫印迹法(Westernblot)将凝胶电泳与固相免疫结合，将通过电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。第一步，SDS第二步，将通过电泳而分离的蛋白质转印至硝酸纤维膜上（电转印法）第三步，类似ELISA2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院19免疫CEMSDSAdditionofSDSEMCProteinbecomesrod-shapedwithuniformchargedistributionCEMSDS-PA2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院21免疫细胞的检测免疫细胞的鉴定分离免疫细胞功能的测定2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院21免疫流式细胞术流式细胞术(flowcytometry，FCM)是借助荧光活化细胞分类仪(fluorescence-activatedcellsorter,FACS)对细胞进行快速、准确鉴定和分类的技术。流式细胞仪集光学、流体力学、电子学和计算机技术于一体，可对细胞作多参数定量测定和综合分析。样品经多种荧光素标记的抗体染色，因荧光素发射光谱的波长不同，信号能同时被接收，故能同时分析细胞表面多个分子的表达及其水平。该法可检测T细胞、B细胞、NK细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞等及其比率，以及CD4/CD8阳性T细胞比值等。此外，借助光电效应，微滴通过电场时出现不同偏向，从而可分类收集所需细胞。流式细胞术流式细胞术(flowcytometry，FCM)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院23免疫磁珠分离技术将特异性抗体与磁性微粒交联，称为免疫磁珠（immunemagneticbead,IMB）。IMB可与表达相应膜抗原的细胞结合，应用强磁场分离IMB及其所吸附的细胞，从而对特定的细胞进行分选，此为直接分离法。亦可用二抗包被磁性微珠，与任何已结合鼠源性一抗的细胞进行反应，从而对细胞进行分离，此为间接分离法.2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院23免疫2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院24免疫治疗增强与抑制特异与非特异主动与被动抗体治疗性疫苗细胞因子以细胞为基础的免疫治疗2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院24免疫2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院25免疫诊断抗原或抗体的检测免疫细胞的检测免疫检测方法的应用2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院1免疫诊2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院26抗原抗体反应的特点特异性可见性可逆性2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院2抗原抗2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院27影响抗原抗体反应的其它因素电解质酸碱度温度2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院3影响抗2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院28抗原-抗体反应的基本检测方法根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分因素，可将抗原抗体反应分为凝集反应(agglutination)沉淀反应(precipitation)

补体参与的反应采用标记物的抗原抗体反应等2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院4抗原-2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院29凝集反应2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院5凝集反2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院30沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，此类反应称为沉淀反应；多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散。即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇时形成可见的白色沉淀2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院6沉淀反2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院31单向免疫扩散

(singleimmunodiffusion)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院7单向免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院32双向免疫扩散

(doubleimmunodiffusion)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院8双向免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院33免疫电泳(immunoelectrophoresis)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院9免疫电2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院34对流免疫电泳2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院10对流2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院35免疫比浊(immunonephelometry)在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成免疫复合物，液体混浊。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多则浊度越高，可绘制标准曲线并依据反应液体的浊度推算样品中抗原含量。2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院11免疫2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院36补体参与的反应应用抗体与红细胞表面的抗原结合，激活反应体系中的补体成份，能导致红细胞溶解，则可根据溶血现象判定试验结果。如溶血空斑试验、HLA的血清学分型等2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院12补体2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院37采用标记物的抗原抗体反应免疫标记技术指用荧光素、酶或放射性核素、胶体金等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变后者的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院13采用2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院38

免疫荧光法(immunofluorescence,IF)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院14免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院39酶免疫测定(enzymeimmunoassay,EIA)将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光密度（OD）值以反映抗原含量，灵敏度可达每毫升ng甚至pg水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)等。2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院15酶免2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院40酶联免疫吸附试验

(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院16酶联2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院41其它常用标记方法放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)

化学发光免疫分析：将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行反应，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用自动发光分析仪接收光信号，测定光子产量，以反映待检样品中抗体或抗原含量。免疫胶体金法2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院17其它A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院43免疫印迹法(Westernblot)将凝胶电泳与固相免疫结合，将通过电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。第一步，SDS第二步，将通过电泳而分离的蛋白质转印至硝酸纤维膜上（电转印法）第三步，类似ELISA2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院19免疫CEMSDSAdditionofSDSEMCProteinbecomesrod-shapedwithuniformchargedistributionCEMSDS-PA2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院45免疫细胞的检测免疫细胞的鉴定分离免疫细胞功能的测定2022/11/26电子科技大学生命科学与技术学院21免疫流式细胞术流