参与移植物抗宿主反应课件

第二十八章移植免疫及其免疫检测

第二十八章1第一节引起排斥反应的靶抗原一、主要组织相容性抗原二、其他组织相容性抗原第二节排斥反应的种类及发生机制一、超急性排斥反应二、急性排斥反应三、慢性排斥反应四、移植物抗宿主反应第三节HLA分型一、血清学分型法二、细胞学分型法三、分子生物学分型法第一节引起排斥反应的靶抗原第二节排斥反应的种类及发生机2第四节常见的组织或器官移植一、肾脏移植二、肝脏移植三、心脏移植与心肺联合移植四、骨髓与其它来源的干细胞移植第五节排斥反应的预防与治疗一、组织配型二、移植物与受体的预处理三、免疫抑制措施第四节常见的组织或器官移植第五节排斥反应的预防与治疗3思考题小结第六节排斥反应的免疫监测一、体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意义二、尿微量蛋白检测的临床意义三、急性时相反应物质检测的临床意义四、免疫抑制剂体内药物浓度检测的临床意义思考题第六节排斥反应的免疫监测4

移植（transplantation）是指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植物（graft），提供移植物的个体称为供体(donor)，接受移植物的个体称为受体（recipient）或宿主（host）。

移植（transplantation）是指将健康细胞5自体移植同系移植同种异体移植异种移植原位移植根据移植部位分类异位移植器官移植

移植物种类分类支架组织移植细胞移植根据移植物来源分类移植的类型自体移植根据6

移植名称

供者、受者关系 举例

自体移植

同一个体

自体断肢再植，自体皮片移植

同系或同基因移植

同系或同基因

人的单卵双生子间的器官移植

的个体间

同品系小鼠的皮片移植

同种异基因移植

同种不同基因人与人之间的肾移植

的个体间不同品系小鼠间的皮片移植

异种移植

异种动物间

狗的器官移植给猩猩

猪的器官移植给狗

移植种类和命名

移植名称 供者、受者关系 7第一节引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性抗原其他组织相容性抗原第一节引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性抗原其他组织相容性8一、主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）编码的人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen,HLA），是不同个体间进行器官或组织细胞移植时发生排斥反应的主要成分，这种代表个体特异性的同种抗原又称组织相容性抗原(histocompatibility)或移植抗原(transplantationantigen)。一、主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（majorhi9

父

母

HLA是人体多态性最丰富的基因系统。据1999年的统计，HLA复合物等位基因总数已达到1031个，其中HLA-B等位基因有301个

A9Cw3B7A2Cw2B13A1Cw1B5A3Cw4B8HLA的遗传特征单倍体遗传

高度多态性父母A9A2A1A3HLA的遗传特10在三类HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥反应的首要抗原，尤其是HLA-DR位点的抗原分子HLA的识别方式：直接识别间接识别HLA发挥双重作用：介导宿主抗移植物反应(HVGR);参与移植物抗宿主反应(GVHR)。在三类HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥反应的首要抗原11二、其他组织相容性抗原次要组织相容性抗原ABO血型抗原系统组织特异性抗原二、其他组织相容性抗原次要组织相容性抗原12第二节排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应（tranlplantationrefection）是针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害的过程。

第二节排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应（tranlpl13排斥反应分类：超急性排斥反应急性排斥反应慢性排斥反应排斥反应分类：14预防措施：ABO血型配型、细胞毒实验一、超急性排斥反应发生机制：受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统,导致血管内凝血。预存抗体来源：1、供受者之间ABO血型不合；2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植处理措施：重新移植发生时间：血循环恢复后的数分钟至1～2天内预防措施：ABO血型配型、细胞毒实验一、超急性排斥反应发生机15分类：急性体液性排斥反应：抗体激活补体，并有CD4+T细胞参与，导致急性血管炎急性细胞性排斥反应：CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用，导致急性间质炎。二、急性排斥反应发生时间：移植后数周至数月内，是排斥反应最常见的类型处理措施：使用免疫抑制剂分类：二、急性排斥反应发生时间：移植后数周至数月内，是排16①直接途径（directpath）:残留于供者移植物内的抗原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含的HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子②间接途径（indirectpath）:通过受者体内的抗原提呈细胞对具有同种异基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的移植物实质细胞的识别。无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激信号，有助于触发淋巴细胞的活化急性排斥反应中的两条抗原提呈途径①直接途径（directpath）:残留于供者移植物内的17同种移植排斥反应的发生机制同种移植排斥反应的发生机制18三、慢性排斥反应发生时间：一般发生于移植后数月甚至数年临床特征：对免疫抑制疗法不敏感无特异性治疗方法，最终需要重新进行器官移植病理特点：血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成三、慢性排斥反应发生时间：一般发生于移植后数月甚至数年临床19T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞和体液免疫均有关系。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生引起慢性排斥反应的因素T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。引起慢性排20定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。四、移植物抗宿主反应发生机制：T细胞起主要作用IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等细胞因子参与ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等粘附分子参与定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗21第三节HLA分型方法

HLA分型方法的改进和不断完善，使得HLA复杂的多态性更加显现，亦推动了HLA与群体及自然选择关系的研究，更促进了人们对疾病本质的认识。第三节HLA分型方法HLA分型方法的改进和不断完善，使22一、血清学分型法应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。耗时长不同批号抗血清结果常有不同

操作简便易行节约试剂、结果可靠、重复性好无需特殊设备

优点缺点一、血清学分型法应用一系列已知抗HLA的特异性标准分23用于HLA分型的微量细胞毒试验用于HLA分型的微量细胞毒试验24死（着染）细胞（%）记分结果判断0～101阴性11～202可疑阴性21～504弱阳性51～806阳性>808强阳性0未试验或不能读数微量细胞毒试验判定标准死（着染）细胞（%）记分结果判断0～101阴性11～202可25HLA分型结果举例HLA分型结果举例26二、细胞学分型法

以混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture,MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytereaction,MLR）为基本技术的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocytedefinedantigen）,包括HLA-D、-DP。MLC分为单向MLC和双向MLC二、细胞学分型法以混合淋巴细胞培养（mixedlym27将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。根据选用的刺激细胞类型分为：1．阴性分型法

2．阳性分型法

1.单向MLC将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处28遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞。2.双向MLC本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两29三、分子生物学分型法分子生物学技术的迅速发展，使得HLA的DNA分型技术应运而生，并在开展DNA限制性片段长度多态性分析、DNA指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交等基础上，引入多聚酶链反应技术，使HLA分型得以在更精密的水平上进行。三、分子生物学分型法分子生物学技术的迅速发展，使得H30限制性片断长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）分析：最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术

PCR-RFLP分型法：对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加1.RFLP与PCR-RFLP分型法

限制性片断长度多态性（restrictionfragmen31序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。

2.PCR-SSO分型法

分类：斑点或印渍法反向斑点或印渍法PCR-SSO是Ⅱ类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、－DQ、－DP等位基因序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence32是近年发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。HLA的基因芯片分型法，实际上是PCR-SSO反向斑点或印渍法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型领域的应用尚属起步阶段。基因芯片(genechip)是近年发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于H33原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequencespecificprimer,SSP）,对待测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物3.PCR-SSP分型法

HLA基因扩增的特异性包括：座位特异性（locus-specific），如HLA-A、－B、-DRB1等；组特异性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特异性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequ34原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一碱基的差异和检测出DNA多态性或点突变，有助于新的HLA等位基因或突变体的发现。

4.PCR-SSCP分型法

单链构象特异性－聚合酶链反应（PCR-singlestrandconformationpolymorphism,PCR-SSCP）是以对待测基因PCR扩增为基础，对扩增的单链DNA（ssDNA）的HLA分型方法。特点：PCR-SSCP作为PCR-SSO的补充，在区分纯合子和杂合子基因方面有其独到之处，有利于排除SSO杂交的假性。原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列35基本过程：分离待测细胞的DNA，应用座位、组或等位基因特异性引物进行PCR扩增，扩增产物的纯化和测序，测出的基因序列与HLA基因库的DNA已知序列比较，判断待测的HLA型别。

5.SBT分型法

基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT），通过对扩增后的HLA基因片段通过核酸序列测定来判断HLA型别。基本过程：分离待测细胞的DNA，应用座位、组或等位基因特异性36第四节常见的组织或器官移植临床器官移植术的建立至今已有50多年的历史。从肾脏移植到心肺移植、肝脏移植；从完整的器官移植到部分组织器官甚至是细胞移植；从单一的器官移植到器官联合移植。第四节常见的组织或器官移植临床器官移植术的建立至今37一、肾脏移植肾脏移植，创始于1950年，是临床开展最早、应用最多和效果最佳的一种器官移植。由于免疫抑制药物的不断更新和移植技术的不断提高，肾脏移植患者1年和5年的存活率，分别可达90%

～95%和80%～90%。

一、肾脏移植肾脏移植，创始于1950年，是临床开展最38组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段包括：ABO血型配型HLA配型交叉配型肾源选择的原则：以ABO血型完全相同者为好，至少能够相容选择最佳HLA配型的供者器官1.组织配型在肾脏移植中的应用组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段1.组织配型在肾脏移植39临床观测项目:

T细胞总数、CD4/CD8比值和IL-2及其受体的检测，判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果肾组织活检，预测排斥反应的发生CsA血药浓度检测，指导合理用药，减少肾毒性

2.肾移植受者的疗效检测疗效监测：受者免疫状态检测临床观测项目:2.肾移植受者的疗效检测疗效监测：受者免疫状40二、肝脏移植肝脏移植手术已经成为治疗原发性胆道闭锁、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝细胞性肝癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及药物诱导的肝脏损伤等疾病，挽救晚期肝病患者生命的最有效方法。二、肝脏移植肝脏移植手术已经成为治疗原发性胆道闭锁、41特点：

HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著差异机制：肝脏移植时，因HLA不配仅发生较弱的排斥反应，而免疫抑制剂的应用有效控制了排斥反应的发生肝脏移植时仍应尽可能进行HLA配型1.组织配型在肝脏移植中的应用特点：HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著差异1.组织配型在42排斥反应发生几率：约2/3的肝移植患者出现过排斥反应的病理学改变，也有8％的病例术后发生急、慢性排斥反应，占肝移植致死原因的10%。2.肝移植受者的疗效检测组织病理学特点：肝移植术后第2天，汇管区出现明显的白细胞浸润，汇管区和肝窦的白细胞浸润第7天达高峰，涉及到T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜酸性和中性粒细胞。在浸润的T细胞中CD8+细胞高于CD4+细胞，也见有IL-2R和CD25+的活化T细胞。排斥反应发生几率：约2/3的肝移植患者出现过排斥反应的病理学43三、心脏移植与心肺联合移植在世界范围内，约有300多个心脏中心进行心脏移植，总例数已超过7万，年病例不下3000，1年和5年存活率分别为80%和70%。心肺联合移植已成为人们可以接受的治疗终末期心肺疾病的一种有效方法。三、心脏移植与心肺联合移植在世界范围内，约有300多44ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件。HLAI、Ⅱ类分子匹配：移植器官长期存活的重要因素。

淋巴细胞毒交叉配合和群体反应性抗体检测1.组织配型在心脏和心肺联合移植中的应用ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件。1.组织配型在心45外周血淋巴细胞总数T、B细胞的转化能力T细胞亚类百分数及比值CTL细胞毒作用细胞因子及其受体表达或转录水平转化生长因子

NK细胞数及其介导的自然杀伤或ADCC效应粘附分子及其配体在各类细胞表达情况2.心脏及心肺联合移植受者的疗效检测免疫监测指标外周血淋巴细胞总数46骨髓和干细胞移植均系非实质性器官移植，其中骨髓移植开展的较早，而干细胞移植正日益受到临床工作者的重视。四、骨髓与其他来源的干细胞移植骨髓和干细胞移植均系非实质性器官移植，其中骨髓移植开47特点：可同时发生HVGR和GVHR

分类：

自体骨髓移植、同基因骨髓移植同种异基因骨髓移植（多见）

病例较少成功率高

骨髓移植实际上是造血干细胞移植，因此，骨髓中造血干细胞的质和量对移植的成败致关重要。1.骨髓移植特点：可同时发生HVGR和GVHR病例较少骨髓移植实际上是48方法：使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，从中获取足量的干细胞用于移植，可获得与骨髓移植同样的治疗目的特点：与骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢复快，GVHR发生率和严重程度不高等优点。

移植前检测：HLA和ABO血型配型、血常规与骨髓检验、性染色体测定、造血干细胞鉴定和GVHR征象追踪等肿瘤干细胞的发现，提示人们在进行干细胞应用时应该注意生物安全性。2.外周血和脐血干细胞移植方法：使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，从中获49适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病。乳腺、卵巢、睾丸以及肺部等实体瘤，不宜行骨髓移植，多应用自体末稍血干细胞移植治疗。急性髓样白血病、急性淋巴母细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤和何杰金病等，则既是同种异型或异基因骨髓移植的适应症，也可用自体末稍血干细胞移植进行治疗。3.适于骨髓或末稍血干细胞移植的常见疾病

适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病。3.适于骨髓或末稍血干50第五节排斥反应的预防与治疗除角膜、脑、睾丸和子宫等少数组织或器官移植外，移植排斥反应仍然是困扰临床移植的重要问题，有效地预防排斥反应是延长移植物存活时间和保护受者的重要手段。第五节排斥反应的预防与治疗除角膜、脑、睾丸和子宫等51一、组织配型HLA是引起同种异型移植排斥反应的主要抗原供者与受者的HLA等位基因匹配程度决定了移植排斥反应的强弱程度通过HLA组织配型(tissuetyping)，选择合适的供者，减轻排斥反应

1.HLA配型一、组织配型HLA是引起同种异型移植排斥反应的主要抗原1.H52①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多，移植物存活机率越高②供、受者HLA-DR位点相配更重要，因为HLA-DR和DQ基因有很强的连锁不平衡，DR位点相配的个体，通常DQ位点也相配；③不同地区HLA匹配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值，在欧洲HLA匹配的程度对移植结果的预测性比美国高，因为欧洲人群的近交程度较高，导致HLA位点连锁不平衡性削弱。移植物存活与HLA配型的关系①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多，移植物存活53交叉配型采用补体依赖的细胞毒试验

阳性对照:阳性对照血清可用淋巴细胞免疫家兔获得阴性对照:阴性血清可采用无受血史的AB血型男性血清根据反应时参与的细胞成分分类：

淋巴细胞交叉配型T细胞淋巴细胞毒性交叉配型B细胞淋巴细胞毒性交叉配型流式细胞法交叉配型自身交叉配型

结果判读:

交叉配型阳性:表明受者预存有抗供体的抗体临床意义:

交叉配型阳性:即使组织配型好，也不宜进行移植，易发生超急性排斥反应。在做受体选择时，组织配型差，但交叉配型为阴性，仍可实施移植。交叉配型常用于肾脏移植2.HLA交叉配型与预存抗体的检测交叉配型采用补体依赖的细胞毒试验2.HLA交叉配型与预存抗体54方法方法类型与参与成分需时应用组织配型补体依赖的淋巴毒试验血清学法（HLA抗血清、补体、待测细胞）3hHLAⅠ、Ⅱ类抗原鉴定交叉配型PBL交叉配型血清学法（受着血清、供者细胞、补体、有/无AHG）3h检测受者血清中已存在的抗供者抗体TB交叉配型血清学法（纯化的供者T/B细胞、受者血清、AHG）3-6hT细胞：检测抗HLAI类抗体；B细胞：检测HLAI、II类抗体MLC试验细胞学法（供、受者细胞培养）6dHLAII类抗原相容性CML试验细胞学法（受者细胞、供者刺激细胞作为靶细胞）4h抗供者CTL检测FCC血清学法（受者血清、供者细胞、荧光抗人Ig）3-4h检测非常弱的和无细胞毒性的抗供者抗体自身交叉配型血清学法（受者PBL、T和B细胞以及血清）和FCC3-4h检测非特异的淋巴细胞抗体（自身抗体）HLA抗体筛选HLAI类抗体的筛选血清学法（受者血清、相应的HLA类型T细胞或PBL）3h×60细胞HLAI类抗体检测，抗体特异性鉴定HLAII类抗体的筛选血清学法（吸附过的受者血清、用作HLA-DR/DQ分型的B细胞）4h×60细胞数加吸附时间HLAII类抗体检测，抗体特异性鉴定CML：细胞介导的淋巴细胞溶解试验方法方法类型与参与成分需时应用组织配型补体依赖的淋巴毒试验血55群体反应性抗体（panelreactiveantibody,PRA）：指用40～60人含已知HLA的T细胞或T、B混合细胞，检测待移植受者血清所得到的抗体阳性百分数。检测意义:

用于判断器官移植时受体的敏感程度高PRA血清:可针对多个HLA抗原发生反应，受体对所接受的移植器官或组织威胁大注意:应考虑在不同HLA上可能出现的共同表位或称公共抗原（publicantigens）与受体血清发生的交叉反应3.群体反应性抗体的检测3.群体反应性抗体的检测56不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同首先是从移植术的角度对离体组织器官进行外科修整，然后根据不同器官的要求采取相应的预处理二、移植物与受体的预处理（一）移植物的预处理不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同二、移植物与受体57组织配型或交叉配型移植前应用一定剂量的免疫抑制剂，其用量视组织配型的结果而定术前输血,视患者的需要进行

（二）受体的准备组织配型或交叉配型（二）受体的准备58人工调节受者机体的免疫状态是控制移植术后排斥反应发生的主要途径采取的措施：

使用免疫抑制剂:以此控制受者的免疫应答，降低对移植物的排斥能力

诱导免疫耐受:诱导受者对移植抗原的特异性免疫耐受三、免疫抑制措施人工调节受者机体的免疫状态是控制移植术后排斥反应发生的主要途593、生物性免疫抑制剂

2、某些中草药

抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或抗胸腺细胞球蛋白(ATG)

细胞性单克隆抗体某些融合蛋白反义寡核苷酸(antisenceoligonucleotide)

1、化学性免疫抑制剂

环孢菌素A(cyclosporineA，CsA)FK506(tacrolimus)，霉酚酸酯(mycophendatemofetil,MMF)糖皮质激素硫唑嘌呤环磷酰胺（一）免疫抑制剂的应用3、生物性免疫抑制剂2、某些中草药抗淋巴细胞球蛋白(AL60常见免疫抑制剂作用位点常见免疫抑制剂作用位点61通过将同种抗原置入子宫或注射给新生儿而诱导同种抗原的特异性免疫耐受封闭同种抗原特异性T细胞的TCR，以诱导受者特异性T细胞凋亡，产生免疫耐受干扰共刺激信号的形成诱导T细胞无能阻碍T细胞活化诱导特异性耐受T细胞疫苗（Tcellvaccine,TCV）（二）对移植抗原特异性免疫耐受诱导通过将同种抗原置入子宫或注射给新生儿而诱导同种抗原的特异性免62第六节排斥反应的免疫监测排斥反应发生时，受者体内的免疫应答将发生一系列变化，据此，检测机体的免疫状态可帮助诊断或推测排斥反应的发生。第六节排斥反应的免疫监测排斥反应发生时，受者体内的63一、体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意义特异性抗体水平的检测

相关免疫指标：

ABO等血型和HLA抗体抗供者组织细胞抗体血管内皮细胞抗体冷凝集素

测定方法:

交叉配型、补体依赖的细胞毒性试验

血清PRA水平:判断器官移植时受体对移植物的敏感程度，基于细胞毒性试验的PRA测定，被作为心脏移植前的常规项目，若PRA超过5％，则应进行供者淋巴细胞与受者血清的交叉配型。（一）体液免疫水平检测的临床意义一、体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意义特异性抗体水平的检64补体水平的检测补体活性与急性移植排斥反应的发生有关当移植物遭受排斥时，补体成分的消耗增加可采用溶血法或比浊法进行检测。补体活性的检测补体的裂解产物，如C3a、C3b、C3d等的测定常用的检测方法有免疫电泳、免疫标记技术补体水平的检测65（二）细胞免疫水平检测的临床意义外周血T细胞及其亚类的计数

CD4/CD8比值大于1.20时:预示急性排斥即将发生，CD4/CD8比值小于1.08时:发生感染的可能性很大。若进行动态监测，对急性排斥反应和感染具有鉴别诊断的意义NK细胞活性测定混合淋巴细胞反应:刺激细胞:灭活的供者的淋巴细胞反应细胞:受者淋巴细胞结果显示的是CTL和NK细胞共同作用的结果。动态监测NK细胞活性则意义更大（二）细胞免疫水平检测的临床意义外周血T细胞及其亚类的计数N66血清细胞细胞因子测定

IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等细胞因子的水平均可升高

个体间血清IL-2R的含量差别显著粘附分子及其配体的检测免疫细胞以及血管内皮细胞等细胞膜表面粘附分子及其配体的表达，与急性排斥反应的发生密切相关。诸如ELAM-1、VCAM、ICAM和HLA分子等比较受者接受移植物前后的细胞因子水平环孢霉素A具有肾毒性，血清肌酐值增高，而IL-2R却明显降低血清肌酐值和IL-2R同时增高提示急性排斥反应的发生巨细胞病毒感染时，IL-2R血清含量的升高将更为明显血清细胞细胞因子测定比较受者接受移植物前后的细胞因子水平67二、尿微量蛋白检测的临床意义尿微量蛋白检测意义：

判断大器官移植、尤其是肾脏移植时排斥反应的发生检测免疫抑制药的肝肾毒副作用α1-微球蛋白是能较早反映肾功能损害的指标尿α-1微球蛋白和尿IgG与肾移植受者短期肾功能关系密切尿微量蛋白种类：

血浆蛋白：包括白蛋白（Aib）、IgG、IgA、IgM、轻链（κλ）、β2-微球蛋白（β2M）、补体C3、α1微球蛋白（α1M）、α2巨球蛋白（α2M）、转铁蛋白（TRF）、游离血红蛋白（Hb）、肌红蛋白（Mb）及其他血浆蛋白和酶

非血浆蛋白：肾脏的Tamm-Horsfall蛋白（THP）、SIgA、肾小球基底膜（GBM）抗原等二、尿微量蛋白检测的临床意义尿微量蛋白检测意义：68三、急性时相反应物质检测的临床意义

C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、IL-1、IL-6、TNF－α以及HSP等炎症分子，是发生炎症反应的标志性分子，在发生感染性疾病和自身免疫性疾病时均有不同程度的增高。三、急性时相反应物质检测的临床意义C反应蛋白(C-69四、免疫抑制剂体内药物浓度检测的临床意义免疫抑制药物的主要毒副作用：

骨髓抑制，可发生粒细胞减少或缺乏症肝功能损伤，可表现为肝功能异常，如SGPT或ALT的升高影响性功能，尤其是男性，少数可导致不育症脱发出血性膀肌炎，可出现血尿恶心、呕吐、食欲不振等消化道表现免疫抑制剂检测意义：通过对血液药物浓度的观察，掌握药代动力学的情况，指导临床用药以充分发挥其防治器官移植排斥反应的同时减少其毒副作用四、免疫抑制剂体内药物浓度检测的临床意义免疫抑制药物的主要毒701．何谓移植，移植的类型有哪些？影响移植物存活时间的关键因素是什么，其与HLA的关系如何？2．CDC原理是什么，需要那些器材，在器官、组织和细胞移植中有何作用，如何判断结果？3．HLA等位基因分型技术有哪些？在分型所用的制剂、过程等方面各有何特点？4．试思考现有HLA分型方法的优缺点，并由此分析分型方法学改进的可能途径和发展趋势。HLA分型除应用于器官移植领域外，还有哪些实际应用价值？5．HLA是诱导移植排斥反应的主要靶抗原，此外还有哪些组织特异性抗原引起临床工作者的关注，如何认识器官移植时的HLA配型？思考题1．何谓移植，移植的类型有哪些？影响移植物存活时间的关键因素716．移植排斥反应有那些主要类型，其发生机制如何？7．HLA交叉配型应用哪些方法，交叉配型的意义是什么？何谓群体反应性抗体，如何检测，意义何在？8．试想如何通过免疫耐受机制延长移植器官的存活时间？由此推测器官移植可能的发展趋势。9．排斥反应的免疫监测包括哪些方面？10．哪种器官的移植有发生超急性、急性和慢性排斥反应的可能？HVGR和GVHR均可发生的移植是哪一类，为什么？请思考干细胞在移植领域的应用前景。6．移植排斥反应有那些主要类型，其发生机制如何？72MHC是引起移植排斥反应的主要靶抗原。移植排斥反应包括：超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应和移植物抗宿主病等。通过组织配型、移植物与受体的预处理、免疫抑制措施等措施可以预防和控制移植排斥反应的发生。排斥反应的免疫监测包括：体液免疫与细胞免疫水平检测、尿微量蛋白检测、急性时相反应物质检测和免疫抑制剂体内药物浓度检测等。小结MHC是引起移植排斥反应的主要靶抗原。小结73

第二十八章移植免疫及其免疫检测

第二十八章74第一节引起排斥反应的靶抗原一、主要组织相容性抗原二、其他组织相容性抗原第二节排斥反应的种类及发生机制一、超急性排斥反应二、急性排斥反应三、慢性排斥反应四、移植物抗宿主反应第三节HLA分型一、血清学分型法二、细胞学分型法三、分子生物学分型法第一节引起排斥反应的靶抗原第二节排斥反应的种类及发生机75第四节常见的组织或器官移植一、肾脏移植二、肝脏移植三、心脏移植与心肺联合移植四、骨髓与其它来源的干细胞移植第五节排斥反应的预防与治疗一、组织配型二、移植物与受体的预处理三、免疫抑制措施第四节常见的组织或器官移植第五节排斥反应的预防与治疗76思考题小结第六节排斥反应的免疫监测一、体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意义二、尿微量蛋白检测的临床意义三、急性时相反应物质检测的临床意义四、免疫抑制剂体内药物浓度检测的临床意义思考题第六节排斥反应的免疫监测77

移植（transplantation）是指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植物（graft），提供移植物的个体称为供体(donor)，接受移植物的个体称为受体（recipient）或宿主（host）。

移植（transplantation）是指将健康细胞78自体移植同系移植同种异体移植异种移植原位移植根据移植部位分类异位移植器官移植

移植物种类分类支架组织移植细胞移植根据移植物来源分类移植的类型自体移植根据79

移植名称

供者、受者关系 举例

自体移植

同一个体

自体断肢再植，自体皮片移植

同系或同基因移植

同系或同基因

人的单卵双生子间的器官移植

的个体间

同品系小鼠的皮片移植

同种异基因移植

同种不同基因人与人之间的肾移植

的个体间不同品系小鼠间的皮片移植

异种移植

异种动物间

狗的器官移植给猩猩

猪的器官移植给狗

移植种类和命名

移植名称 供者、受者关系 80第一节引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性抗原其他组织相容性抗原第一节引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性抗原其他组织相容性81一、主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）编码的人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen,HLA），是不同个体间进行器官或组织细胞移植时发生排斥反应的主要成分，这种代表个体特异性的同种抗原又称组织相容性抗原(histocompatibility)或移植抗原(transplantationantigen)。一、主要组织相容性抗原主要组织相容性复合体（majorhi82

父

母

HLA是人体多态性最丰富的基因系统。据1999年的统计，HLA复合物等位基因总数已达到1031个，其中HLA-B等位基因有301个

A9Cw3B7A2Cw2B13A1Cw1B5A3Cw4B8HLA的遗传特征单倍体遗传

高度多态性父母A9A2A1A3HLA的遗传特83在三类HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥反应的首要抗原，尤其是HLA-DR位点的抗原分子HLA的识别方式：直接识别间接识别HLA发挥双重作用：介导宿主抗移植物反应(HVGR);参与移植物抗宿主反应(GVHR)。在三类HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥反应的首要抗原84二、其他组织相容性抗原次要组织相容性抗原ABO血型抗原系统组织特异性抗原二、其他组织相容性抗原次要组织相容性抗原85第二节排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应（tranlplantationrefection）是针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害的过程。

第二节排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应（tranlpl86排斥反应分类：超急性排斥反应急性排斥反应慢性排斥反应排斥反应分类：87预防措施：ABO血型配型、细胞毒实验一、超急性排斥反应发生机制：受者体内存有抗供者移植物的预存抗体，与抗原结合，激活补体和凝血系统,导致血管内凝血。预存抗体来源：1、供受者之间ABO血型不合；2、受者反复多次输血、妊娠或既往作过移植处理措施：重新移植发生时间：血循环恢复后的数分钟至1～2天内预防措施：ABO血型配型、细胞毒实验一、超急性排斥反应发生机88分类：急性体液性排斥反应：抗体激活补体，并有CD4+T细胞参与，导致急性血管炎急性细胞性排斥反应：CD8+CTL细胞的细胞毒作用、CD4+T和巨噬细胞的作用，导致急性间质炎。二、急性排斥反应发生时间：移植后数周至数月内，是排斥反应最常见的类型处理措施：使用免疫抑制剂分类：二、急性排斥反应发生时间：移植后数周至数月内，是排89①直接途径（directpath）:残留于供者移植物内的抗原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激。这种抗原性刺激，来自移植物中树突状细胞和单核细胞等表面富含的HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子②间接途径（indirectpath）:通过受者体内的抗原提呈细胞对具有同种异基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的移植物实质细胞的识别。无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激信号，有助于触发淋巴细胞的活化急性排斥反应中的两条抗原提呈途径①直接途径（directpath）:残留于供者移植物内的90同种移植排斥反应的发生机制同种移植排斥反应的发生机制91三、慢性排斥反应发生时间：一般发生于移植后数月甚至数年临床特征：对免疫抑制疗法不敏感无特异性治疗方法，最终需要重新进行器官移植病理特点：血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成三、慢性排斥反应发生时间：一般发生于移植后数月甚至数年临床92T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞和体液免疫均有关系。非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生引起慢性排斥反应的因素T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。引起慢性排93定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。四、移植物抗宿主反应发生机制：T细胞起主要作用IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等细胞因子参与ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等粘附分子参与定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗94第三节HLA分型方法

HLA分型方法的改进和不断完善，使得HLA复杂的多态性更加显现，亦推动了HLA与群体及自然选择关系的研究，更促进了人们对疾病本质的认识。第三节HLA分型方法HLA分型方法的改进和不断完善，使95一、血清学分型法应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。耗时长不同批号抗血清结果常有不同

操作简便易行节约试剂、结果可靠、重复性好无需特殊设备

优点缺点一、血清学分型法应用一系列已知抗HLA的特异性标准分96用于HLA分型的微量细胞毒试验用于HLA分型的微量细胞毒试验97死（着染）细胞（%）记分结果判断0～101阴性11～202可疑阴性21～504弱阳性51～806阳性>808强阳性0未试验或不能读数微量细胞毒试验判定标准死（着染）细胞（%）记分结果判断0～101阴性11～202可98HLA分型结果举例HLA分型结果举例99二、细胞学分型法

以混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture,MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytereaction,MLR）为基本技术的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocytedefinedantigen）,包括HLA-D、-DP。MLC分为单向MLC和双向MLC二、细胞学分型法以混合淋巴细胞培养（mixedlym100将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。根据选用的刺激细胞类型分为：1．阴性分型法

2．阳性分型法

1.单向MLC将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处101遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞。2.双向MLC本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两102三、分子生物学分型法分子生物学技术的迅速发展，使得HLA的DNA分型技术应运而生，并在开展DNA限制性片段长度多态性分析、DNA指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交等基础上，引入多聚酶链反应技术，使HLA分型得以在更精密的水平上进行。三、分子生物学分型法分子生物学技术的迅速发展，使得H103限制性片断长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）分析：最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术

PCR-RFLP分型法：对DNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加1.RFLP与PCR-RFLP分型法

限制性片断长度多态性（restrictionfragmen104序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。

2.PCR-SSO分型法

分类：斑点或印渍法反向斑点或印渍法PCR-SSO是Ⅱ类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、－DQ、－DP等位基因序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence105是近年发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。HLA的基因芯片分型法，实际上是PCR-SSO反向斑点或印渍法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型领域的应用尚属起步阶段。基因芯片(genechip)是近年发展起来的一项新技术,将其与PCR-SSO结合应用于H106原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequencespecificprimer,SSP）,对待测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物3.PCR-SSP分型法

HLA基因扩增的特异性包括：座位特异性（locus-specific），如HLA-A、－B、-DRB1等；组特异性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特异性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。原理：应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（sequ107原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一碱基的差异和检测出DNA多态性或点突变，有助于新的HLA等位基因或突变体的发现。

4.PCR-SSCP分型法

单链构象特异性－聚合酶链反应（PCR-singlestrandconformationpolymorphism,PCR-SSCP）是以对待测基因PCR扩增为基础，对扩增的单链DNA（ssDNA）的HLA分型方法。特点：PCR-SSCP作为PCR-SSO的补充，在区分纯合子和杂合子基因方面有其独到之处，有利于排除SSO杂交的假性。原理：对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳时，因其序列108基本过程：分离待测细胞的DNA，应用座位、组或等位基因特异性引物进行PCR扩增，扩增产物的纯化和测序，测出的基因序列与HLA基因库的DNA已知序列比较，判断待测的HLA型别。

5.SBT分型法

基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT），通过对扩增后的HLA基因片段通过核酸序列测定来判断HLA型别。基本过程：分离待测细胞的DNA，应用座位、组或等位基因特异性109第四节常见的组织或器官移植临床器官移植术的建立至今已有50多年的历史。从肾脏移植到心肺移植、肝脏移植；从完整的器官移植到部分组织器官甚至是细胞移植；从单一的器官移植到器官联合移植。第四节常见的组织或器官移植临床器官移植术的建立至今110一、肾脏移植肾脏移植，创始于1950年，是临床开展最早、应用最多和效果最佳的一种器官移植。由于免疫抑制药物的不断更新和移植技术的不断提高，肾脏移植患者1年和5年的存活率，分别可达90%

～95%和80%～90%。

一、肾脏移植肾脏移植，创始于1950年，是临床开展最111组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段包括：ABO血型配型HLA配型交叉配型肾源选择的原则：以ABO血型完全相同者为好，至少能够相容选择最佳HLA配型的供者器官1.组织配型在肾脏移植中的应用组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段1.组织配型在肾脏移植112临床观测项目:

T细胞总数、CD4/CD8比值和IL-2及其受体的检测，判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果肾组织活检，预测排斥反应的发生CsA血药浓度检测，指导合理用药，减少肾毒性

2.肾移植受者的疗效检测疗效监测：受者免疫状态检测临床观测项目:2.肾移植受者的疗效检测疗效监测：受者免疫状113二、肝脏移植肝脏移植手术已经成为治疗原发性胆道闭锁、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝细胞性肝癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及药物诱导的肝脏损伤等疾病，挽救晚期肝病患者生命的最有效方法。二、肝脏移植肝脏移植手术已经成为治疗原发性胆道闭锁、114特点：

HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著差异机制：肝脏移植时，因HLA不配仅发生较弱的排斥反应，而免疫抑制剂的应用有效控制了排斥反应的发生肝脏移植时仍应尽可能进行HLA配型1.组织配型在肝脏移植中的应用特点：HLA是否匹配与肝脏移植效果无显著差异1.组织配型在115排斥反应发生几率：约2/3的肝移植患者出现过排斥反应的病理学改变，也有8％的病例术后发生急、慢性排斥反应，占肝移植致死原因的10%。2.肝移植受者的疗效检测组织病理学特点：肝移植术后第2天，汇管区出现明显的白细胞浸润，汇管区和肝窦的白细胞浸润第7天达高峰，涉及到T细胞、B细胞、巨噬细胞、嗜酸性和中性粒细胞。在浸润的T细胞中CD8+细胞高于CD4+细胞，也见有IL-2R和CD25+的活化T细胞。排斥反应发生几率：约2/3的肝移植患者出现过排斥反应的病理学116三、心脏移植与心肺联合移植在世界范围内，约有300多个心脏中心进行心脏移植，总例数已超过7万，年病例不下3000，1年和5年存活率分别为80%和70%。心肺联合移植已成为人们可以接受的治疗终末期心肺疾病的一种有效方法。三、心脏移植与心肺联合移植在世界范围内，约有300多117ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件。HLAI、Ⅱ类分子匹配：移植器官长期存活的重要因素。

淋巴细胞毒交叉配合和群体反应性抗体检测1.组织配型在心脏和心肺联合移植中的应用ABO血型匹配：避免急性排斥反应的首要条件。1.组织配型在心118外周血淋巴细胞总数T、B细胞的转化能力T细胞亚类百分数及比值CTL细胞毒作用细胞因子及其受体表达或转录水平转化生长因子

NK细胞数及其介导的自然杀伤或ADCC效应粘附分子及其配体在各类细胞表达情况2.心脏及心肺联合移植受者的疗效检测免疫监测指标外周血淋巴细胞总数119骨髓和干细胞移植均系非实质性器官移植，其中骨髓移植开展的较早，而干细胞移植正日益受到临床工作者的重视。四、骨髓与其他来源的干细胞移植骨髓和干细胞移植均系非实质性器官移植，其中骨髓移植开120特点：可同时发生HVGR和GVHR

分类：

自体骨髓移植、同基因骨髓移植同种异基因骨髓移植（多见）

病例较少成功率高

骨髓移植实际上是造血干细胞移植，因此，骨髓中造血干细胞的质和量对移植的成败致关重要。1.骨髓移植特点：可同时发生HVGR和GVHR病例较少骨髓移植实际上是121方法：使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，从中获取足量的干细胞用于移植，可获得与骨髓移植同样的治疗目的特点：与骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢复快，GVHR发生率和严重程度不高等优点。

移植前检测：HLA和ABO血型配型、血常规与骨髓检验、性染色体测定、造血干细胞鉴定和GVHR征象追踪等肿瘤干细胞的发现，提示人们在进行干细胞应用时应该注意生物安全性。2.外周血和脐血干细胞移植方法：使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，从中获122适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病。乳腺、卵巢、睾丸以及肺部等实体瘤，不宜行骨髓移植，多应用自体末稍血干细胞移植治疗。急性髓样白血病、急性淋巴母细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤和何杰金病等，则既是同种异型或异基因骨髓移植的适应症，也可用自体末稍血干细胞移植进行治疗。3.适于骨髓或末稍血干细胞移植的常见疾病

适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病。3.适于骨髓或末稍血干123第五节排斥反应的预防与治疗除角膜、脑、睾丸和子宫等少数组织或器官移植外，移植排斥反应仍然是困扰临床移植的重要问题，有效地预防排斥反应是延长移植物存活时间和保护受者的重要手段。第五节排斥反应的预防与治疗除角膜、脑、睾丸和子宫等124一、组织配型HLA是引起同种异型移植排斥反应的主要抗原供者与受者的HLA等位基因匹配程度决定了移植排斥反应的强弱程度通过HLA组织配型(tissuetyping)，选择合适的供者，减轻排斥反应

1.HLA配型一、组织配型HLA是引起同种异型移植排斥反应的主要抗原1.H125①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多，移植物存活机率越高②供、受者HLA-DR位点相配更重要，因为HLA-DR和DQ基因有很强的连锁不平衡，DR位点相配的个体，通常DQ位点也相配；③不同地区HLA匹配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值，在欧洲HLA匹配的程度对移植结果的预测性比美国高，因为欧洲人群的近交程度较高，导致HLA位点连锁不平衡性削弱。移植物存活与HLA配型的关系①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位点数越多，移植物存活126交叉配型采用补体依赖的细胞毒试验

阳性对照:阳性对照血清可用淋巴细胞免疫家兔获得阴性对照:阴性血清可采用无受血史的AB血型男性血清根据反应时参与的细胞成分分类：

淋巴细胞交叉配型T细胞淋巴细胞毒性交叉配型B细胞淋巴细胞毒性交叉配型流式细胞法交叉配型自身交叉配型

结果判读:

交叉配型阳性:表明受者预存有抗供体的抗体临床意义:

交叉配型阳性:即使组织配型好，也不宜进行移植，易发生超急性排斥反应。在做受体选择时，组织配型差，但交叉配型为阴性，仍可实施移植。交叉配型常用于肾脏移植2.HLA交叉配型与预存抗体的检测交叉配型采用补体依赖的细胞毒试验2.HLA交叉配型与预存抗体127方法方法类型与参与成分需时应用组织配型补体依赖的淋巴毒试验血清学法（HLA抗血清、补体、待测细胞）3hHLAⅠ、Ⅱ类抗原鉴定交叉配型PBL交叉配型血清学法（受着血清、供者细胞、补体、有/无AHG）3h检测受者血清中已存在的抗供者抗体TB交叉配型血清学法（纯化的供者T/B细胞、受者血清、AHG）3-6hT细胞：检测抗HLAI类抗体；B细胞：检测HLAI、II类抗体MLC试验细胞学法（供、受者细胞培养）6dHLAII类抗原相容性CML试验细胞学法（受者细胞、供者刺激细胞作为靶细胞）4h抗供者CTL检测FCC血清学法（受者血清、供者细胞、荧光抗人Ig）3-4h检测非常弱的和无细胞毒性的抗供者抗体自身交叉配型血清学法（受者PBL、T和B细胞以及血清）和FCC3-4h检测非特异的淋巴细胞抗体（自身抗体）HLA抗体筛选HLAI类抗体的筛选血清学法（受者血清、相应的HLA类型T细胞或PBL）3h×60细胞HLAI类抗体检测，抗体特异性鉴定HLAII类抗体的筛选血清学法（吸附过的受者血清、用作HLA-DR/DQ分型的B细胞）4h×60细胞数加吸附时间HLAII类抗体检测，抗体特异性鉴定CML：细胞介导的淋巴细胞溶解试验方法方法类型与参与成分需时应用组织配型补体依赖的淋巴毒试验血128群体反应性抗体（panelreactiveantibody,PRA）：指用40～60人含已知HLA的T细胞或T、B混合细胞，检测待移植受者血清所得到的抗体阳性百分数。检测意义:

用于判断器官移植时受体的敏感程度高PRA血清:可针对多个HLA抗原发生反应，受体对所接受的移植器官或组织威胁大注意:应考虑在不同HLA上可能出现的共同表位或称公共抗原（publicantigens）与受体血清发生的交叉反应3.群体反应性抗体的检测3.群体反应性抗体的检测129不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同首先是从移植术的角度对离体组织器官进行外科修整，然后根据不同器官的要求采取相应的预处理二、移植物与受体的预处理（一）移植物的预处理不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同二、移植物与受体130组织配型或交叉配型移植前应用一定剂量的免疫抑制剂，其用量视组织配型的结果而定术前输血,视患者的需要进行

（二）受体的准备组织配型或交叉配型（二）受体的准备131人工调节受者机体的免疫状态是控制移植术后排斥反应发生的主要途径采取的措施：

使用免疫抑制剂:以此控制受者的免疫应答，降低对移植物的排斥能力

诱导免疫耐受:诱导受者对移植抗原的特异性免疫耐受三、免疫抑制措施人工调节受者机体的免疫状态是控制移植术后排斥反应发生的主要途1323、生物性免疫抑制剂

2、某些中草药

抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或抗胸腺细胞球蛋白(ATG)

细胞性单克隆抗体某些融合蛋白反义寡核苷酸(antisenceoligonucleotide)

1、化学性免疫抑制剂

环孢菌素A(cyclosporineA，CsA)FK506(tacrolimus)，霉酚酸酯(mycophendatemofetil,MMF)糖皮质激素硫唑嘌呤环磷酰胺（一）免疫抑制剂的应用3、生物性免疫抑制剂2、某些中草药抗淋巴细胞球蛋白(AL133常见免疫抑制剂作用位点常见免疫抑制剂作用位点134通过将同种抗原置入子宫或注射给新生儿而诱导同种抗原的特异性免疫耐受封闭同种抗原