微生物培养标本采集与送检课件

临床微生物标本采集、转运与处理

孙怀超

检验科的工作就像法医，法医是为公安提供证据，而检验科是为临床医生诊断、治疗提供依据。数据直接影响医生的诊断，所以检验结果是否准确的重要性不言而喻。

如何看待微生物检验工作

俗话说“巧妇难为无米之炊”，如果送检的标本本身就有问题，再先进的设备、再高的检测技术，结果可谓“差之毫厘，谬之千里”。由此可见，检验结果的质量控制非常地重要。质量是检验科之本，质量控制目的就是要有一个质量可靠的检验结果质量控制实验室不同阶段误差发生率

定义:按时间顺序，从临床医生开出检验医嘱开始，到检验分析过程开始时终止的步骤，包括检验要求、患者准备、原始样本采集、运送到实验室并在实验室内部的传输。分析前质量控制是最易出现问题、也是最难控制的环节。标本采集是分析前质量控制最关键的环节！何谓分析前程序？

1.早期采集（使用抗菌药物之前）2.无菌采集3.及时送检4.容器无菌无消毒剂5.标明来源和检验目的采集的基本原则

临床标本的分类

带菌体液无菌体液痰液血液咽拭子脑脊液粪便胸腹水、胆汁其他类别其他类别我院标本送检情况

1.手卫生（洗手或卫生手消毒）2.皮肤消毒程序严格执行以下三步法:（1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上；（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上；（3）最后用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。新生儿及对碘过敏的患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。1.血培养标本采集：4、成人每套（2瓶）应采血16--20ml，不同部位采集2—3套，儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人，对于婴幼儿患者推荐的采血量每瓶不少于2ml,采血量不超过体重的1%，由于婴幼儿患者厌氧菌所致菌血症比较罕见，婴幼儿血培养可以仅用需氧瓶。1、严格无菌操作避免污染2、从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。至少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。采血注意事项：3、切忌在静脉点滴处采血，不宜从静脉导管或埋置针中采血4、采血后先注入厌氧瓶后注入需氧瓶，当采血量不能满足推荐，应先分配需氧瓶再厌氧瓶，因为菌血症中专性需氧菌比专性厌氧菌高。采血注意事项：采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。若冷藏有些苛养菌如流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋球菌等遇冷易死亡；若环境温度高于35℃，瓶内细菌繁殖后浓度过高时，感应细菌生长的底物被耗尽，放入培养仪后因为不再产生生长变化而出现假阴性。3.标本运送及保存：

什么时候采血最好？

为什么要采集足够的血液？

为什么每套标本中应包含厌氧培养？为什么要求多次采血？思考的问题为什么要采集足够的血液？

采血量是影响灵敏度最关键因素，在一项研究中，成人血培养采血量2-30ml，检出率与采血量呈比例增长，而且成人只做1瓶血培养所得结果是很难正确解释的。但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶的肉汤，所以血液与肉汤的最佳比例为1：5－1：10

便于解释血培养结果是污染还是真正感染保证兼性厌氧菌的生长及厌氧菌的培养报告时间提前：需氧瓶有9%比厌氧瓶早1天报告结果，厌氧瓶有5%比需氧瓶早1天报告结果。因此只做需氧菌不做厌氧菌培养,有5%的血培养延迟1天报告阳性结果为什么每套标本中应包含厌氧培养？污染菌和感染菌的确认脑脊液标本采集：严格的无菌操作进行腰椎穿刺采集，必要时也可从小脑延髓池或侧脑室穿刺采集。采集后收集于3个无菌容器中，第1管用于细菌学检查，第2管用于化学或免疫学检查，第3管用于常规检查。若仅收集到1管脑脊液，首先送往微生物实验室，之后再做其它检查；

痰液1.采集方法：①自然咳痰法：留取前刷牙，用清水漱口3次，以去除口腔内大量杂菌，之后先深呼吸再用力咳出呼吸道深部痰液吐至一次性痰杯内，盖好盖子。如患者痰液较深或者黏稠难以咳出时可诱导排痰。最佳痰液采集量为2—10ml，最低不少于1ml。②特殊取痰法：由临床医生采集，主要有：纤支镜抽吸法（采集支气管肺泡灌洗、经支气管镜直接吸引或防污染样本毛刷）2.痰标本的运送、保存、验收:①尽快送至实验室内（＜2小时），运送延误可导致肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡。②延迟送检或待处理标本应置于10—20℃室温保存，既可防止苛养菌死亡也能避免杂菌快速生长，保存时间不可超过24小时。2、尿液经尿道排出时会受到尿道内正常菌群的污染,所以需要定量接种、合理评价才能判断培养的细菌是否与尿路感染有关。3、另外,由于绝大多数的泌尿系感染是由肠杆菌科细菌引起,而此类细菌的硝酸盐还原实验为阳性,故可参考尿常规检查中的硝酸盐还原实验来推断是否有细菌感染。中段尿培养简单易行，又无感染的危险。通常取晨起第一次尿送检。尿液在膀胱内停留6-8h以上（给细菌足够的繁殖时间）尿标本必须用无菌带螺帽的容器采集，容器上标有培养型，而非尿常规尿杯！中段尿培养

采集方法：尽量取早晨第一次尿液,取尿前用肥皂水清洗外阴（女性）或尿道口（男性），再用无菌水洗净，用无菌纱布擦拭，然后排尿弃去前段尿，留取中段尿10-15ml，置于无菌容器内。婴幼儿不少于1ml，尿量不足，培养结果不可靠。中段尿培养

标本采集后立即送检，通常标本采集后到接种的时间不能超过2小时，尤其气温较高的夏季，保存时间应适当缩短或4℃冷藏保存，但冷藏时间仍不得超过8小时。注意：考虑淋病奈瑟菌感染时，采集的尿液应该立即送检，并且不得冷藏。标本的运送与保存脓肿标本：标本的采集与送检：①闭合性脓肿：勿用拭子取样。脓肿表面清创，用注射器抽取脓肿内容物；或将脓肿切开引流后，取脓肿壁的一部分进行培养。②开放性损伤和脓肿：尽量去除表面覆盖物和渗出液，并用拭子用力擦拭损伤基底或边缘取样。取自表浅切口感染的标本不进行厌氧培养。伤口进展边缘处活检标本检测厌氧菌、分枝杆菌和真菌最佳。采集后立即送检采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌棉拭子伸入尿道捻转拭子采集。阴道分泌物采集时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹隆后部，宫颈2～3cm处，转动并停留10～30s取分泌物。淋球菌培养需保温及时送检，衣原体、支原体等培养无法及时送检时应4℃保存。生殖道标本送检用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。采集后立即送检，若不能及时送检，在4℃冰箱中保存不超过24小时粪便标本小结

血液、脑脊液为无菌性体液，采集标本时要注意无菌采集，