中药分析与鉴定3班

诚信我，所呈交的（设计）是本人在老师指导下进行的研究工（设计）中不包含其他人已经或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的或而使用过的材料。我承诺，（设计）中的所有内容均真实、。（设计）作者（签名 ............................................................... 前 材料与仪 仪 对照 试 样 方法与结 指标成分含量测 正交试 基质配比优选工 4.............................................................指标成分含量测定分 基质配比优选工艺分 5结 参考文 综 致 ：目的建立复方黑面神软膏处方黑面神中表儿茶素和苦参中苦参碱4000400、聚山梨酯80丙三醇和羟苯乙酯复方黑面神软膏的最佳基质配比。方法采用HPLC法测定表儿茶素和苦参碱的含量分别运用正交试验浸泡时间加PH等为评价指标，优选基质比例。结果0.0084~0.0336g·L-1内线性关系良好，回归方程21h0.0294~0.588g·L-1内线性关系良好，回归方程y=1714.9x-3.8355，r=0.99992045min，提1h4000:（6:1:0.1:0.5：复方黑面神软膏；高效液相色谱法；基质；正交试ThePreparationProcessResearchOfCompoundFruticosa ObjectiveToestablishamethodfordeterminingepicatechinandmatrineinCompoundBreyniafruticosaointmentandoptimizetheextractioncondirions．AndoptimizetheoptimumproportionofmatrixforthepreparationPEG400Tween-glycerinandethylparaben.MethodsThecontentofepicatechininleavesofBreyniafruticosaandmatrineofSeparationFlavescenswasdeteminedbyusingHPLC.Pereatingtime,ratioofsolidtoliquid，extractiontimeandextractiontimesfortheaffectionofwaterextractionrateofepicatechinandmatrineweredetectedbytheorthogonaltest.Character，stabilityconstant，ductilityandpHvalueoftheointmentwereselectedasindex，L9(34)orthogonaltestwasemployedtodeterminetheeffectsofthefourfactors．ResultsThelinearrangeof Epicatechinwas0.0084~0.0336g/l，thestandardcurveofEpicatechinwasasfbllowsy=13346x+11.632，r=1.0000．Theoptimalwaterextractiontechnicswereasf01lows：ratioofsolidtoliquidat1:20(w／v)andpemeatingfor45minutes，80℃extraction2timesand1hourforeachtime．Thelinearrangeofatrinewas0.0294~0.588g·L-1，thestandardcurveofmatrinewasasfollowsy=1714.9x-3.8355，r=0.9999．Theoptimaldecoctionextractiontechnicswereasfo1lows：ratioofsolidtoliquidat1:20(w／v)andpemeatingfor45minutes，extraction2timesand1hourforeachtime．TheoptimumproportionofmatrixofCompoundBreyniafruticosaOintnentwasPEG4OOO-PEG400-Tween-80-glycerin(6:1:0.1:0.5)．Conclusion HPLCmethodfordeterminationofepicatechinandmatrineissimpleandselective．AndcanbeusedforqualitycontrolofCompoundBreyniafruticosaOintnent.Theoptimizentmentwasfineuniform，withductilityandstableproperties．WiththisoptimumproportionofmatrixbetterqualityCompoundBreyniafruticosaOintnentcanbeprepared．Keywords:CompoundBreyniafruticosaOintnent，HPLC，MatrixOrthogonal4000400和吐温-80等。本课题前期实验者晶等人[12]对黑面神中表儿茶素含量测定及水提工艺优化进行了研究，采用高效液相色谱法测定黑面神中表儿茶素含量，运用正交试验浸泡时问加水量提取时间及提取次数对表儿茶素含量的影响。得出黑面神水提最佳工艺条件为：药材加20倍量水浸泡45分钟，80℃温浸提取2次，每次1小时。本实验对晶运用HPLC测定表儿茶素含量的方法 Bs224s型电子天 赛多利斯仪器系统KQ3200E型医用超声波 昆山市超声仪器JB-3A型恒温定时磁力搅拌 雷磁创益仪器仪表TDL-60B型台式离心 安亭科学仪器RE-2000B型旋转蒸发 亚荣生化仪器 巩义市英峪华中仪器DHS16-A多功能红外水分测定 精密科学仪器 苦参碱对照 80黑面神购自广州至信药业经广州中大学生药鉴定教研室：140601；15010120120722白鲜皮（广州至信药业，批号：140601。技术流程聚乙二醇聚乙二醇4000、聚乙二醇40080、丙三醇、色谱条BostonGreenODSC18色谱柱(4.6mm×250mm，5µm)，流动相甲醇-0.1%磷220nm30℃20µL。在此条件下,表儿茶素和苦参碱与相48.333min10.026min。理论塔板数36004000。表0551234摇匀，得表儿茶素对照品溶液；精密称取苦参碱对照品14.7mg，加甲醇制成每1ml1.47mg的溶液，摇匀，得苦参碱对照品溶液。30g2045min，80℃21h，70℃50%50mL，得表儿茶4味药（15g10g8g，地肤加95%乙醇沉淀至70%浓度，4℃放置，抽滤，滤液回收乙醇，用甲醇定容50mL，得苦参碱供试品溶液。标准曲线的3.1.24ml5ml50%3.1.1条件下进样分析。以进样浓度（g·L-1）为横坐标（x，以峰面积为纵坐y=13346x+1.632（r=1.0000，线3.835（r=0.9999RSD=1.85%，苦参碱含量RSD1.17%取6份30g黑面神，按表儿茶素供试品溶液的方法进行处理。黑面神药渣，苦参15g10g，蛇床子8g和地5g，6份，按苦参碱供试品溶液的方法进行处理，在3.1.1条件下进样分析，分别测得表儿茶素含量和苦参碱含量，结果显示表儿茶素含量RSD=0.95%，苦参碱RSD=1.39%。于0、2、4、8、16、24h在3.1.1条件下进样分析，分别测得表儿茶素含量和苦参碱含量，结果显示儿茶素含量RSD1.43%，苦参碱含量RSD0.96%，表明24h内稳定。620.350mg3.1.10.75%97.5%，RSD0.67%，表明表儿茶素和苦参碱加2表儿茶素加样回收率试验结果3苦参碱加样回收率试验结果样品中量水提工艺4因素和水平 112233表儿茶素正交样品溶30g1000mLL9(34)50mL→得9份样品溶液。在3.1.1条件下进样分析，测定表儿茶素含量，结果见23。ABCD（mg·g-111112122231333421235223162312731328321393321R6表儿茶素方差分析结果fFPA2B2C2D22注:F005(2,219.00试验结果从直观分析结果看出各因素对表儿茶素含量的影响次序为以极差最小的B因素加水量作为误差项，浸泡时间、加水量和提取时间对表儿确定优选的提取工艺路线为A2B1C2D230g2045min，80℃21h。苦参碱提取正交试水提工艺计L9(34)正交试验，对浸泡时间、加水量、提取时间和提取次数进行，因素3。7因素和水平ABCD112233苦参碱正交样品溶液取黑面神药渣、15g苦参、10g白鲜皮、8g5g烧杯中，按L9(34)静置→抽滤→滤液回收乙醇→浓缩→定容至50mL→得9份样品溶液。3.1.145干膏得率的测参照《中国药典》2010年版一部（XA）浸出物测定法[13]，将正交试验105℃3h30min，迅速精密称定重量（设重量为W2，通过以下公式计算干膏得率。干膏得率W2-W18A因B素CD综合评111112122231333421235223162312731328321393321评分标准：综合评分=干膏得率×30%+苦参碱含量fFPA2B2C2D2误 注:F005(2,219.0010fFPA2B2C2D22注:F005(2,219.00fFPA2B2C2D22注:F005(2,219.00试验结果从直观分析结果看出各因素对干膏得率的影响次序为B>D>C>A，对苦以极差最小的A优选的提取工艺路线为A2B3C2D2，即黑面神药渣、苦参、白鲜皮、蛇床子和地2045min21h。正交试验条件设4000（A（B，吐温-12 吐温-12313试验 综合评832RfFPA2B2C2D2试验结果由正交试验结果可知，4个因素对软膏综合得分的影响顺序为最佳处方为A3B3C1D2。以极差最小的D因素为误差项进行方差分析，A,B,C,D4000:400:吐温-80:甘油=（6:1:0.1:0.5。3.1.3.3证试按正交试验优选出的的最佳基质配比3批软膏，结果发现3批软膏的外观性状、稳定性、延展性、稠度、pH均无差别。外观性状、延展性、稠度适宜，稳定性良好，pH符合要求。30g2045min，80℃21h，70℃4味药（15g，10g8g5g）2045min21h，1.0g生药/ml95%70%浓度，4℃12h，4.8g与一倍辅料（4000400：吐温-80：=610.10.5分钟至均匀，加入软膏基质（基质：取聚乙二醇4000、聚乙二醇40070℃70℃15分钟至均匀制成基质）中，快速搅拌（600r/min，（600r/min，15分钟）基质优选指标及评分标外观性状满分为20分。从色泽均匀、质地细腻、稠度适宜、涂抹分散性及有无颗粒感等方面进行，每项各占4分。离心稳定性 满分为20分。将各组软膏分别置于离心管中，2500130min，观察有无分层或起泡现象。观察有无分层、结块、起泡或出水耐寒试验104℃1耐热试验1040℃1延展性[15]2010cm×10cm125g24h1g置两玻璃pH[16]205g置于小烧杯中，加等量蒸馏水充分溶解，搅拌均匀，用pH计测定每组pH，pH6~8为满分，其余为。4提取方法的选检测波长的选《中国药典》2010版记载，对儿茶中儿茶素和表儿茶素进行含量测定时，表儿茶素进行含量测定时亦多数分别采用这两个检测波长然晶在用高效液相色谱法测定表儿茶素含量时选用230nm为检测波长，本实验与其使用相同的220nm、230nm280nm下表儿茶素HPLC280nm220nm时表儿280nm为检测波长，220nm为检测波长。以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)为流动相。本次实验使用C18色谱柱，按此流动相测定苦参碱时，2min左右出峰，出峰时间太快导致基线漂移，且分离度不好考虑到最后的质量标准要运用高效液相色谱法进行复方处方的含量测定。选用晶测定表儿茶素含量时采用的流动相甲醇-0.1%磷酸溶液进行10.02min，分离度明显改善，且峰型较好。故将测定黑50%甲醇定容制得的表儿茶素供试品测得的峰面积较大且分离度较好，故表儿茶素对照品溶液和供试品溶液时用-80和甘油之间差异性太小，且仅仅选择综合评分作为因素，导致正交试验1.07~1.091:1时，所制得软膏外观细腻均匀，稠度5C18280nm为检测波长，甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相220nm为切实可行。实验过程中两次运用L9(34)正交试验优化处方提取工艺以及软膏基质基质，选用其他基质复方黑面神软膏还需进一步研究。国家药典.中民药典[S]一部.:中国科技MengDH,ChenWL,ZhaoWM.Sulfur-containingspiroketalglycosidesfromBreyniafruticosa[J].JournalofNaturalProducts.2007,70：824-829.李东海,,齐庆,等．复方二藤洗剂治疗掌跖脓疱病疗效观察[J]．陕西中医,2010,31(12):．神矾散的与用法[J]．药信息杂志,1997,4(6):林挺，.中药洗剂治疗婴儿湿疹的疗效观察[J].实用医学杂志19（8：829．国家.中民药典[S].一部.：化学工业 [J].福建农业科技,1999[J]19962(6):周勇高,韩燕全,孟楣.HPLC法同时测定苦黄软膏中大、大黄酚的含晶,,,等．黑面神中表儿茶素的含量测定及水提工 国家药典.中国药典2010年版[M].：化学工业,2010,附25.,,．白疕消软膏基质的工艺优选[J]．中国药师,2009,12(12):1740．孟楣,,虓,等．星点设计-效应面法优化苦黄软膏基质组[J]．药信息杂志,2011,18(6):,李西林,,等.正交试验法优选水溶性紫朱软膏基质[J].中国黑面神的化学成分和药理作用研究进、亚科。本属植物共26种，主要分布在亚洲东南部。我国5种，分布于、海vitisidaeetusaMer.、（L.）H.黑面神Breyniafruticosa（L.）Hook.f.又名青凡木，膝大治，蚊惊树，钟馗草，四眼叶，狗脚刺[1]。为常用地产药材，其根和均可入药，味微苦，疹，缠腰火丹，皮炎，漆疮，风湿痹痛，产后不通，阴痒。黑面神根祛风，量为12.02%。酚类与三萜。含脂肪油。M.Ilyas[4]首次在Breyniarhamnoides中检测到含有植物甾醇，包括胆甾醇、浮光苗等人[5]16个化合物。此外还分离鉴定了新化合物aviculin。毛丽华[6]对采自云南西双版纳的黑面神干燥全株进行了系统的化学成分研15个化合物，包括熊果酸、豆甾醇、咖啡酸、omfoliol、4羟基3,5,5-2环己烯1酮、8羟基木犀草素8鼠李糖苷3,5,5-2环己烯1（异佛尔酮3,4二羟基苯（原儿茶醛、香草醛、9otadnnoicid,2,3dihydroxyropylter、醇-9-0-β-D-吡喃葡萄糖、3,5-二甲氧基-4-羟基苯。 素，β－谷甾醇和胡萝卜苷等6个化合物。[9]等对云南西双版纳的黑面神其中2个新的二氢苯并呋喃类木脂素类化合物。10个酚性成分，2个萜类和1个林理根[10]Breyniafruticosa根的化学成分，从95%4个三萜类化合物：无羁6β二醇和β-sitosterylglucoside-6′-octadecanoate24E,8Z)-2-[(2R)-2-hydroxypentacosanoylamino]-8-octadecene-1,3,4-triol；4个其他类化合物：(−)-表儿茶素、ε-己内酯、aviculin13个化合物。MorikawaH等[11]从黑面神属Breyniaofficinalis6类，6氧化左旋多巴速率法体外测定酪氨酸酶。用Lineweaver-Burk曲线推导出等[13]采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验以及腹腔注射冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高试验，研究黑面神水提液对炎症反应的作用。结果表明，应。文献[14]黑面神有抑菌作用，1:1200黑面神流浸膏稀释液在试管内献[15]，黑面神合剂由黑面神叶、东风桔根、鸭跖草尖尾芋根茎和补骨脂制成）100%煎液，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、弗氏痢疾杆菌和甲型链球菌等五种细菌体外抑菌作用较强。黑面神全草提取物（100~500μg/ml）对鼠RNA逆转录酶和人DNA聚合酶有抑制作用，其IC50分别为2.0μg/ml和5.0μg/ml[16]。等[17]研究了包Ⅰ型、流感A型及毒逆转录酶活性的影响。结果显示青凡木（黑面神）对水疱性口炎和腺显示出较低的CPIE，表明青凡木具有较强的抗活性。为探讨黑面神水提物对小鼠的免疫调节作用等[18]连续给小鼠灌胃黑抗皮肤I等[19]0.025%低分子右旋糖酐诱发小鼠阵发性皮肤瘙（4mg/kg（30min毛细血管通透性显著降低得到黑面神水提物可通过抑制组胺的发挥皮肤I13480种以上的品种有清热解毒、消炎止痛的作用，治疗痈疮肿毒、肠炎痢疾及虫蛇咬杀。MorikawaH等[11从黑面神属（Breyniaofficinalis）6种萜烯酯苷类和酚类糖缀化合物，具有一定的清热解毒、消肿的作用。浮光苗等[5]从黑面神属（Breyeniafruticosa（L.）Hook.f.）干燥蛇咬伤、疗毒、疮疖和湿疹的功效。OluyemiA等[20]从黑面神属树皮中的提取物具有抗失眠作用。现代药理学研究证明其具有抗肿瘤、抗的活性，以及调“红糖9g。水煎服，1剂治疗慢性支气管炎《岭南草药志》载曰:“黑面神叶、蛇总管、黑骨走马，捣烂取汁，再用洗米水将药煎汤1小碗，加入药汁（II治疗内膜炎、[22]。黑面神味苦性寒，，是其毒性部位，历代本草均有记载《生草药黑面神根。内服过量可引起性肝炎”中国植物图谱数据库收录黑面神为植物。曾有称[23]，4例患者服30~100g鲜品（煎剂）后引起性肝肿大、压痛，肝功能检查明显损伤；1例小孩因肝而[24]《中药大辞典》中记载[25]，小鼠腹腔注射5%去鞣质的黑面神注射液两星期无。家兔静脉注射鞣质的黑面神注射液10天未见异常，解剖检查各脏器无任何改变。表明。虽然近年来对黑面神药理作用及临床应用的研究日益增多但通过对黑都很少，且这些文献多数只是对黑面神单味药的研究，复方少之又少。黑面神作为的地产药材，资源丰富，具有广泛的生物活性，在皮肤病方面更有显著作用的湿热天气适合各类病菌的生存繁衍常是湿疹带状疱疹麻疹。[1].岭南本草古籍三种[M.:中国科技,1999: 《中药志》编辑.中药志(第一卷)[M].广州：科技出中华本草编委会.中华本草(第12卷)[M].：科学技术M.Ilyas,Ranijama,ParveenJarnal.ChemicalinvestigationoftheleavesofBreyniasrhamnoids.J.nChem,Soc.,1978,LV.964. 浮光苗,,余伯阳,等.民间药物黑面神化学成分研究[J].中国中药杂,,,等.傣药材黑面神药材质量标准研究[J].中国民族杂,,,等.滇产喙果黑面神化学成分研究[J].亚太传