养肝柔肝中药对胆囊胆固醇结石豚鼠胆囊细胞钙离子浓度的影响

养肝柔肝中药对胆囊胆固醇结石豚鼠胆囊细胞钙离子浓度的影响沈平，方邦江，朱培庭，张静，裴新军【摘要】通过不雅察实行豚鼠胆囊细胞钙离子浓度〔［a2+］i〕的变革，探究胆固醇结石形成与养肝柔肝中药防治胆结石的作用机制。要领:将80只受试豚鼠随机分为正常比拟组、模子组、养肝柔肝中药组和熊去氧胆酸组，每组20只。后三组接纳高胆固醇致石食饵诱发法创立豚鼠胆结石动物模子，此中养肝柔肝中药组、熊去氧胆酸组别离赐与相应药物举行防治实行，一连用药7周后，别离对实行豚鼠大要环境、胆结石天生环境以及胆囊细胞［a2+］i的变革举行不雅察。结果:模子组动物胆囊细胞［a2+］i显着低落，养肝柔肝中药不但能显着改进豚鼠举动学体征，低落胆结石的成石率，而且可进步胆囊细胞［a2+］i。结论:胆囊细胞［a2+］i低落是导致胆囊的紧缩成效低落，胆固醇结石形成的紧张因素。进步胆囊细胞［a2+］i，加强胆囊平滑肌细胞的紧缩成效，减轻胆汁淤滞，大概是养肝柔肝中药防治胆石病的作用机制之一。【关键词】胆固醇我国胆石病呈较快的上升趋势，部门地域抱病率已达10%［1］，靠近天下兴隆国度胆石病10%～15%的发病程度［2］。胆石病还是我国良性胆道疾患中致死、致残的紧张缘故原由。我们的前期研究事情表白，养肝柔肝中药对胆石病具有必然的临床疗效［3，4］。本实行以高胆固醇饮食诱发豚鼠胆结石，接纳流式细胞术〔flytetry，F〕测定实行豚鼠胆囊细胞钙离子浓度［a2+］i，以探究养肝柔肝中药防治胆囊结石形成的作用机制。1质料与要领1.1实行动物选用白色、红目豚鼠，牝牡各半，干净级，体质量〔220±20〕g，共80只，由上海中医药大学实行动物中央提供。1.2重要试剂、药物与仪器1.3动物分组、造模及药物处置惩罚全部豚鼠豢养于上海中医药大学实行动物中央动物室，室温〔23±10〕℃，顺应性喂养1周，无有身及不良反响，饮食、饮水正常者，即纳入实行。实行豚鼠随机分为正常比拟组、模子组、熊去氧胆酸组和养肝柔肝中药组，每组各20只。接纳高胆固醇致石食饵诱发法创立豚鼠胆囊胆固醇结石动物模子［5］，正常比拟组喂正常饲料及青菜适量，模子组喂以致石饲料及少量青菜，各治疗组在喂以相称于模子组的致石饲料及青菜的同时赐与药物灌胃。药物以成人用药剂量〔60kg体质量，养肝利胆颗粒18g/d、UDA300g/d〕按体型系数换算［6］，养肝柔肝中药组赐与养肝利胆颗粒1.81g/〔kg·d〕，熊去氧胆酸组赐与UDA30.12g/〔kg·d〕，模子组和正常比拟组豚鼠灌胃等容量的生理盐水，一连7周。1.4标本网罗与处置惩罚1.5胆石红外光谱定性接纳溴化钾压片法测定胆结石样品。1.6胆囊细胞［a2+］i的测定参考文献［7］，利用Fasalibur流式细胞仪检测，利用ELL-Quelt成效软件举行参数的猎取和数据阐发。1.7统计学要领计量资料用x±s表现，组间均数比力接纳方差阐发。计数资料接纳率或构成比表现，接纳χ2查验要领。全部运算步伐均在盘算机上运用SPSS11.0统计软件包举行。2结果2.1豚鼠大要环境正常比拟组豚鼠表现为体质量天然增长，反响机动，活动灵敏，被毛麋集而有光芒、紧贴皮肤，鼻、唇潮湿干净，眼睛豁亮，大便正常，在豢养历程中无殒命。模子组动物表现饮食淘汰，生长迟钝，被毛凋谢、蓬松且易脱落，活动缓慢，反响痴钝，眼睛、鼻、唇、耳、尾部色淡少泽。熊去氧胆酸组和养肝柔肝中药组豚鼠举动学表现、体质量和营养状态等方面与模子组比力有显着改进，但不克不及规复到正常比拟组程度。模子组豚鼠在造模30d后有3只动物殒命，经剖解胆囊创造有2只豚鼠胆囊产生结石。养肝柔肝中药组、熊去氧胆酸组各有2只动物殒命，这两组殒命豚鼠经剖解胆囊均未创造显着结石天生。由于上述三组共计7只豚鼠死时未达造模的时间要求，以是没有计入成石率的结果，也未作为标本网罗的泉源。2.2胆石定性肉眼所见胆囊结石呈胆石泥砂或絮状沉淀。经红外光谱检测阐发为胆固醇结石。2.3豚鼠胆囊结石天生环境以肉眼不雅察可见胆囊内有块状及絮状沉淀物并经红外光谱断定为胆固醇结石。正常比拟组中1只动物无胆囊而没有计入成石率的统计，别的19只动物中有1只产生胆石，成石率为5.26%。模子组动物中除3只殒命外，别的17只动物中有14只出现胆石，成石率为82.35%，显着高于正常比拟组〔P0.01〕。养肝柔肝中药组18只动物中有5只出现胆石，熊去氧胆酸组18只动物中有7只出现胆石，养肝柔肝中药组和熊去氧胆酸构成石率别离为27.78%和38.89%，均显着低于模子组胆石天生率〔P0.05〕。2.4胆囊细胞［a2+］i测定结果随机抽取保存的豚鼠胆囊构造，上述4组每组各8份，测定各组胆囊细胞［a2+］i。正常比拟组胆囊细胞［a2+］i为〔82.77±12.45〕nl/L，模子组为〔18.52±11.97〕nl/L，熊去氧胆酸组为〔44.79±8.94〕nl/L，养肝柔肝中药组为〔72.86±10.68〕nl/L。结果表现，模子组胆囊细胞［a2+］i较正常比拟组显着低落〔P0.01〕;养肝柔肝中药组和熊去氧胆酸组均可升高胆囊细胞［a2+］i，与模子组比拟，差异均有统计学意义〔P0.01〕;但养肝柔肝中药组与正常比拟组无显着差异〔P0.05〕，熊去氧胆酸组与正常比拟组比拟，差异有统计学意义〔P0.01〕;养肝柔肝中药组与熊去氧胆酸组比拟，差异有统计学意义〔P0.01〕。3讨论随着生齿的老龄化与饮食布局的改变，我国胆结石的抱病种类产生了很大的变革，尤其是近20年来，胆囊结石约占胆石病发病的80%［8］，以胆固醇为重要身分的胆囊结石已成为我国胆结石的重要范例［1，9］。因此，我们在本研究中选择了高胆固醇致石食饵诱发法创立豚鼠胆固醇结石的动物模子。朱培庭传授［3］在总结我院知名中医外科专家顾伯华传授和中西医结合专家徐永生传授治疗胆石病履历的底子上，对274例慢性胆道熏染、胆石病病人举行辨证阐发创造，肝阴不敷证型占66.66%，而且50岁以上年事者高达72.37%，这与?内经?“年四十而阴气自半也，起居衰矣〞〔?素问·阴阳应象大论?〕的理论及朱丹溪“阳常有余，阴常不敷〞之论相符合。对肝阴不敷证型胆石病患者予验方养肝利胆方药治疗表现了精良的结果，有服从达84.13%［3，4］。养肝利胆颗粒剂由何首乌、枸杞子、白芍、陈皮、甘草等构成。方以何首乌、枸杞子、白芍滋养肝阴。此中何首乌补肝肾、益精血;枸杞子味甘平而润，性滋而补，能生精益气;白芍苦酸微寒，能养血敛阴，柔肝止痛;陈皮苦辛温，能理气健脾，且能防滋阴药过于滋腻之弊。纵览全方切合疏肝利胆的治疗大法，表现了“胆病从肝论治〞之学术头脑。在平滑肌紧缩与舒张的信号转导机制中，细胞内游离钙作为一种紧张的第二信使普及地到场细胞的活动、排泄、代谢和分化等多种细胞成效活动的调治。［a2+］i的低落是平滑肌细胞舒张的关键因素之一，调治平滑肌紧缩的重要卵白有肌球卵白轻链、原肌球卵白和调钙卵白的结合卵白等。平滑肌细胞中紧缩相干卵白到场平滑肌细胞紧缩、紧缩的调治及细胞骨架的构成，这些卵白的活性在必然程度上均受到［a2+］i的调治［10，11］。已有研究表白，胆囊平滑肌细胞［a2+］i的低落，是导致平滑肌紧缩成效停滞的紧张缘故