Agilent 1260高效液相色谱仪操作规程

主题Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程编号：SOP-04起草者：审核者：第1版第0次修订批准者：执行日期：页号：1OF41、 目的确保Agilent1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。2、 范围研发分析中心实验室Agilent1260高效液相色谱仪。3、 责任仪器使用者对本标准的实施负责。4、 内容4.1开机4.1.1打开计算机，进入Windows画面。4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。4.1.3单击【View】菜单选择【MethodandRuncontro1】项，也可单击工作站画面左下角【MethodandRuncontrol］项，进入方法和运行控制窗口。4.2安装色谱柱正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存在漏液。4.3溶剂瓶体积设置把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单，选择【MoreQuatPump】项下【Bottlefilling】，在参数设置处输入各溶剂瓶(A、B、C、D)内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。4.4^MCSealwash］单击【instrument】菜单，选择【MoreQuatPump］项下“control”，在sealwash这栏中选择“On”，清洗功能开始运行，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。主题Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程编号：SOP-04起草者：审核者：第1版第0次修订批准者：执行日期：页号：2OF44.4脱气逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单，选择【MoreQuatPump】项下“control”,在“pump"这栏中选择“On”,泵开始运行。设置“solvents”一栏中相应参数，将试验中所用到的管道逐一脱气，直至管内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止所需时间，3ml/min冲洗大约需5min〜10min,，完成后选择“off”，单击OK键关泵，顺时针旋紧Purge阀。4.5平衡色谱柱单击【instrument】菜单，选择【SetupInstrumentMethod］项下“QuatPump”，在“solvents”一栏将试验中要用到的有机相通道（甲醇/乙腊）设置为100%，并将“Flow”从低流速逐级设为1ml/min，在“pump”这栏中选择“On”，泵开始运行，冲洗约10min钟后，设定与测试方法相同的柱流速和流动相比例平衡色谱柱（梯度采用起始流动相比例），冲洗色谱柱，直至基线走平，一般需要30min〜60min。若测试方法用到缓冲盐作为流动相，还需10%甲醇或乙腊水溶液冲洗过渡色谱柱，约30min，再设置为流动相得比例，平衡色谱柱。4.5方法编辑4.5.1进样体积设定标准进样：单击【instrument】菜单，选择【SetupInstrumentMethod］，在此窗口上方选择“Sampler”模块，在“InjectionVolume”处输入进样体积，选择“StandardInjection”方式，单击OK键即可。带洗针进样：单击【instrument】菜单，选择【SetupInstrumentMethod】，在此窗口上方选择“Sampler”模块，在“InjectionVolume”处输入进样体积，选择“Injectionwithneedlewash”方式，单击OK键即可。此方式进样后会在事先放置的洗瓶中洗针，减少样品残留此种方式比较，比较适合4.5.2柱温设定单击【instrument】菜单，选择【SetupInstrumentMethod］，此窗口上方选择“column”模块,输入柱温，左右两边柱温要保持一致。主题Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程编号：SOP-04起草者：审核者：第1版第0次修订批准者：执行日期：页号：3OF44.5.3泵参数设定单击［instrument］菜单，选择【SetupInstrumentMethod】，在此窗口上方选择“QuatPump”模块，在“Flow"处输入所需的流速，在“solvents"处输入各通道的溶液比例，若实验为梯度洗脱程序，则需在“Timetable”下编辑，输入相应的时间和流动相比例。“Stoptime”为运行停止时间，“Posttime”指的是两次运行之间流动相的平衡时间，一般剃度洗脱需设置这一项。4.5.4检测波长设定单击【instrument】菜单，选择【SetupInstrumentMethod］,在此窗口上方选择“DAD”模块,输入检测波长和带宽，一般带宽设置为4nm，参比波长视情况设定，一般不需要设定。4.5.5样品信息设定单针进样：单击【Runcontro1】菜单，选择【Sampleinfo］,在弹出窗口“Path”处输图谱保存路径；“subdirectory"处输入文件夹；“prefix/counter”处输入图谱编号；“prefix”为前缀，输入年月曰"counter，为计数，从“00001”开始；“Sampleparameters”下的“location"处输入进样瓶放置位置；“Samplename”处输入样品名称。序列进样:单击LSequence］菜单，选择LSequenceparameters］，在弹出窗口“DataFile”下“Path”处输入图谱保存路径，“subdirectory"处输入文件夹，“prefix/counter”处输入图谱编号，“prefix”为前缀，输入年月日，“counter”为计数，从“00001”开始。保存路径设置好后，单击ISequence］菜单，选择ISequenceTable］，在“Vial”输入进样瓶位置；"Samplename”输入样品名称，“Methodname”输入方法名称，“inj/vial”输入进样次数，【Cut］删掉所选中行，点击【OK］，退出当前界面，待基线系统稳定后，再点击运行界面上【Sequence］，仪器则开始按照当前设置好的系列进行样品检测。4.5.6方法保存主题Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程编号：SOP-04起草者：审核者：第1版第0次修订批准者：执行日期：页号：4OF4单击【Method】菜单，选择【SaveMethod］，即可保存当前方法；选择【SaveMethodas】，即可另存方法。4.6方法运行单针进样：单击【Runcontrol］菜单，选择【RunMethod】。序列进样：单击【Runcontrol］菜单，选择【RunSequence］o4.7图谱处理（不详细说明）4.8关机4.8.1冲洗色谱柱做完试验,及时用适当溶剂冲洗柱子，特别是流动相中含有缓冲盐，一定要用足量的水冲洗彻底洗净其中的盐类，如先用甲醇或乙腊10%的水溶液冲洗不少于30分钟，再用100%甲醇或乙腊冲洗冲洗系统约30分钟，然后关泵,尽量保存在乙腊中（适用反相色谱柱）。4.8.2关闭计算机退出化学工作站，用shutdown关闭计算机。4.9维护保养4.9.1旋开【Purge】阀脱气时，查看柱前压力，