综合实训4革兰阴性需氧和兼性需氧杆菌课件

1、革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌 革兰阴性杆菌O-F试验Fo/非发酵菌氧化酶试验+弧菌科肠杆菌科革兰阴性菌初步分群乳糖发酵试验A肠杆菌科共同特性1、相似的形态染色 中等大小，G 杆菌，无芽胞，多数有动力2、简单的培养条件3、活泼的生化反应初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌肠道致病菌肠道非致病菌不发酵乳糖 发酵乳糖A肠杆菌科的鉴别1、形态观察（革兰染色） G 杆菌2、菌落观察（1）埃希菌在肠道 选择性培养基上发酵乳糖产酸，在SS和MAC平板上为红色或粉红色菌落(2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35孵育1824h。由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳

2、糖，故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。 (3)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35孵育1824h。由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。3、生化反应4、血清学实验能分解葡萄糖，产酸不产气，不分解乳糖,除宋内志贺菌IMViC试验为-+ - -，MIU:-, KIA:KA-,不产H2S是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌dysentery bacteria无鞭毛，有菌毛生化反应形态A2志贺菌低于其他肠道杆菌，对酸

3、敏感对理化因素的抵抗力血清学：根据生化反应特征和O抗原分为4群肝脾-肿大胆囊-肠道-排菌(2周）肾脏-尿-排菌（3周)A3伤寒、副伤寒的致病过程伤寒沙门菌和甲型副伤寒杆菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌肠粘膜上皮细胞肠系膜淋巴结 固有层淋巴结进入血液再次进入血液第一次菌血症发热,不适,全身疼痛第二次菌血症（1周）高热、外周白细胞下降、肝脾肿大、表情冷漠、玫瑰疹、相对缓脉肝脏脾脏胆囊肾脏骨髓并发症肠穿孔肠出血典型病例病程为3-4W胸导管微生物学检查细菌学诊断标本 肠热症 食物中毒 败血症 第1周取静脉血 可疑食物 血 第1-3周取骨髓液 呕吐物 第2周起取粪 粪 第3周起取尿 SS平板生化反应血清学鉴定

4、双糖发酵等玻片凝集试验沙门菌生化反应KIA:K/A-+,H2S阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,IMVC:-+-+,MIU:+-沙门菌血清学鉴定肥达氏反应一、原理 用已知的标准诊断菌液【伤寒杆菌：菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原；副伤寒甲、乙、丙鞭毛（H）抗原共5种】与受检血清作试管凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价，以协助伤寒、副伤寒疾病的诊断。二、器材及试剂 标准诊断菌液（5种抗原：10ml/瓶）、生理盐水（N.S）、待检血清（兔血清）、试管、试管架、加样枪或移液管（5mL、2mL、0.5mL每组3支）、一次性塑料滴管等。11:201:401:801:1601:3201:6401:1280伤

5、寒O抗原0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：202.5ml2.5ml2.5mlN.S余2.5ml平分为5管，每管0.5ml：得5管1:20稀释倍数的血清平分为5管，每管0.5ml：得5管1:40稀释倍数的血清2.5mlN.S余2.5ml1:12801:201:401:801:1601:3201:640伤寒H抗原副甲H抗原副乙H抗原1:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:6401:12801:201:401:801:1601:3201:640副丙H抗原1:201:401:801:1601:3

6、201:6401:1280伤寒O抗原0.25ml血清+4.75mlN.S=5.0mL: 1：20四、凝集结果判断（上清液、沉淀）“”：强，完全凝集，液体澄清，轻摇大片凝 集块。 “”：大部分凝集，液体轻度浑浊，凝集块 小。 “”：中强，部分凝集，液体半澄清，凝集块 颗粒状。 “”：弱，少量凝集，液体浑浊。 “”：不凝集，液体浑浊，和对照相同。 + + +五、效价判断 能出现明显凝集（+）的血清最高稀释度。例：测定某病人“O”凝集效价结果如下：1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ + - 六、临床意义 1.正常值：正常人血清

7、中可能有低效价的抗体存在，其值高低存在地区差异，一般伤寒沙门菌“O”1:80,“H”1:160,副伤寒沙门菌“H”1:80，有临床意义；或者进行疾病早期、中后期两次血清效价比较，后者增高4倍/4倍以上有诊断价值。2. “O”抗体出现早、消失快、主要为IgM类；“H”抗体出现迟、可持续阳性数年，主要为IgG类，O、H凝集效价都超过正常值，意义较大。1）、“O”高“H”不高：感染早期，伤寒沙门菌“O”抗 原有交叉反应，建议一周后复查。2）、“H”高“O”不高：疾病晚期、预防接种、非特异 性回忆反应。3.伤寒、副伤寒甲、乙有部分共同的O抗原，如O抗体效价增高，只能推断为伤寒类疾病，不能区别伤寒或副伤

8、寒。4.阴性反应：未感染，感染轻，应用有效抗菌药物，接受皮质激素治疗者，患者过于衰弱等。七、注意事项 1.应在光亮处先观察管底凝集状态，后轻摇判 定结果。 2.使用前摇匀菌液，菌液有摇不散的凝集块时不能使用。 TCBS平板上菌落含亚碲酸钾的4号平板弧菌科细菌及相关细菌的特征特征弧菌属气单胞菌属邻单胞菌属假单胞菌属氧化酶+葡萄糖发酵+-O/129敏感性+/-+-肌醇产酸-+甘露醇产酸+-明胶液化+-+/-TCBS生长+-需要Na+-42生长 明胶液化鞭毛+单鞭毛铜绿假单胞菌-+丛鞭毛荧光假单胞菌-丛鞭毛恶臭假单胞菌OF试验：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮气：+医院环境及用品、临床标本分离培养基涂片检查肉汤培养基血琼脂平板SS、麦康凯琼脂平板挑选可疑菌落（37 培养1824h观察有无色素产生，色素鉴别接种金氏A、B培养基）无色素菌株42 +绿脓素+绿脓菌荧光素铜绿假单胞菌假单胞菌鉴定程序铜绿假单胞菌1、形态观察：G- 杆菌，多形性，有鞭毛、菌毛、荚膜，无芽孢,产荧光素和绿脓素2、培养特性：专性需氧，4不生长42 生长，在血平板上经3537，1824h培养可表现为：菌落大而扁平、湿润、边缘不齐,有金属光泽,有生姜样芳香气味,菌落周围有宽大的兰绿色