体内药物分析终极复习资料

1、-. z.体药物分析定义。P1研究药物及其代物在生物体数量和质量变化规律的方法学科,获得药物在体吸收、分布、代排泄等各种动力参数，药物与大分子的相互作用，代产物、代途径等信息，对药物评价，为临床合理用药、研发新药等提供科学依据。影响血药浓度的因素理解。P3-5机体因素：包括生理、病理、遗传因素药物因素：包括剂型因素、药物相互作用3其他因素：大气污染、食品、烟、酒、茶等药物进入体后，血液循环为药物体转运的枢纽。大多数药物只有到达作用部位和受体部位，并到达一定的浓度后，才产生一定的药理作用。多数药物的血药浓度与药理效应呈平行关系，局部药物的血药浓度与药效无明显相关关系。体药物分析的生物样本及分析对

2、象。P8生物样本：但凡体液所到之处，如血液、尿液、唾液、毛发、各种器官、组织、呼出气体等都是取样对象，还包括细胞悬液，微粒体孵育液、器官灌流液等体外试验中的各种生物介质。分析对象：母体药物、代产物、必要的源性物质或与之相关的其他药物。体药物分析的特点干扰杂质多被测浓度低供试样品量少待测物的易变性要求较快提供结果要有一定的仪器设备工作量大生物样品选择的根本原则。常用的生物样品及其应用特点。P19选择原则：必须能反映浓度与药效的关系易于获得便于处理根据不同目的要求选取常用生物样品及应用特点：血液 优点：较好表达药物浓度与治疗的关系 缺点：1损伤性取样，取样量有限制 2需要专业人员操作尿液 优点：1

3、非损伤性取样 2药物浓度高 3收集方便 缺点：1浓度变化大，与血药浓度相关性差 2：不易采集，保存 3：肾功能不全、婴儿不宜用此法唾液 优点：1非损伤性取样 2含蛋白浓度低，易处理 3CS/CP较恒定时，可代替血样进展TDM及药物动力学研究 缺点：1适用药少 2取样量变化大毛发 优点：1取样方便，可重复取样 2通过测*特定代物区别滥用药、临床药 3可获得长期用药信息 缺点：1预处理繁杂，干扰多 2分析对象含量低，需精细仪器血液样品的采集和制备.P21采集：通常用一次性针头插入静脉血管抽取，取下针头，转移到相应容器，不能用力推压以免血细胞破裂制备：1血浆：多以肝素作抗凝剂，取适量于离心管，旋转使

4、均匀分布于管壁，倾去多余液体， 枯燥试管；然后参加血样，离心后取上层黄色液体即可，其量约为全血的50%2血清：等血样中血块凝结，在室温25下凝结速度较慢，可在37水浴加快血清析出，离心后取上清液即可，其量约为全血的40%3全血：在血样中参加含有抗凝剂的试管，轻轻混匀即可。生物样品的储存。P23-24冷冻储存加稳定剂酶抑制剂、抗氧剂加防腐剂或调节pH去除蛋白的方法及原理，各种常用的蛋白沉淀剂及其效果。P27-28蛋白质沉淀法：生成不溶性盐沉淀，低于蛋白质等电点的pH时，酸根与带正电荷的蛋白质形成不溶性盐沉淀；高于蛋白质等电点pH时，金属离子与蛋白质中带负电荷的羧基形成不溶性盐沉淀。盐析和脱水：与

5、水混溶的有机溶剂可以与蛋白质争夺水化膜，并使水的介电常数减少，从而影响蛋白质的解离程度及所带电荷数量，增加蛋白质颗粒间的引力使蛋白质沉淀。组织的酶消化法：蛋白水解酶可在温和条件下有效水解生物蛋白，将与蛋白质结合的药物释放出来常用的缀合物水解方法有哪些？P28酸水解酶水解溶剂解什么样品需要进展有机破害处理？P29微量元素多数以结合的形式存在于有机物中，在分析和测定这些元素时，需将这些元素从有机物中游离出来，或者将有机物破坏后测定，根据被测的性质，选则适宜的有机物破坏法，使样品中绝大局部有机物破坏。*些元素在破坏有机物的过程中无丝毫损失，又能在破坏有机物后测定是何物干扰。游离药物与结合药物分析的方

6、法有哪些？其原理是什么？P29-30平衡透析法、超滤法、超离心法、凝胶过滤法前两法原理：利用半透膜只允许小分子药物通过，而不允许大分子药物通过的原理使游离性与结合性药物别离液液提取法的原理、影响因素及提取技术。P30-33原理：药物与干扰成分在互不相容的两相溶剂中的分配系数不同，选择性地提取生物基质中的药物影响因素：水相pH。提取溶剂种类、离子强度提取技术：通常在戴塞的试管中进展，多半进展一次提取，用酸碱回提时也只是一次，不考虑提取尽药物液固提取法的原理，固相萃取的主要步骤，及固相萃取的影响因素。P33-35原理：将样品液通过适宜的固相小柱，利用药物与杂质对固相小柱亲和力的差异，用适当溶剂冲洗

7、、洗脱，使药物得到净化步骤：1固相柱选择2固相柱处理3样品液上样4别离净化5待测物洗脱提取率、选择性的影响因素：1流速2样品装载量3固相柱使用要求4样品上柱前的处理提取溶剂的蒸发方法。P36抽真空挥发或直接通入气体使溶剂挥发柱切换技术的原理。见PPT是一种在线固相别离技术：选用一个35cm长的短柱，用低溶剂强度的预处理流动相使生物样品净化，富集切换阀后，分析流动相将组分带入分析柱别离测定测定完毕后仪器自动恢复开场状态，准备下次进样 微透析技术的定义。P45MD是一种膜别离技术，利用膜透析原理，对细胞液进展流动性连续采样，在不破坏生物体环境的情况下，直接插到生物活体采样进展原位测定。根本概念P5

8、1-52生物介质：指一种生物来源的物质，能够以可重复方式采集和处理。标准物质：用于制备标准样品和QC样品的待测物的参比标准，构造上可以是物质本身、其游离碱、酸、盐、酯。标准样品：在空白介质中家人量待测物标准物质制成的样品，用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品中待测物浓度。质控样品：在空白生物介质中参加量待测物标准物质制成的样品，监测生物分析方法的重复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。介质效应：样品中存在除待测物以外的其他干扰物质，对待测物响应值造成直接或间接影响分析批：包括待测样品、适当数目的标准样品和QC样品的完整系列。特异性的定义及考察方法。P52定义：指样品中存在

9、干扰成分的情况下分析方法能准确、专一测定分析物的能力。考察方法：至少取六个不同个体空白样品，采用拟定的方法进展测定，所得结果接近于定量限浓度的模拟样品和用药后的实际生物样品比较，以证明源性物质、相应的代物、降解产物及其他共服药物不干扰样品测定标准曲线与线性围，结合实验进展复习。P52-54定量下限的定义、考察方法及要求。定义：指符合准确度、精细度要求的生物样品中药物的最低定量浓度，其反映了方法的灵敏度。考察方法：按标准曲线项下方法制备样品，至少制备5个标准样品，按照拟定方法进展测定，考察精细度与准确度。要求：LLOQ的准确度应在真实浓度的80120围；精细度的RSD应小于20；LLOQ限度要求

10、：至少能满足测定35个半衰期后生物样品中的药物浓度或能检测出Cma*的1/101/20时的药物浓度，信噪比S/N一般大于5。21 精细度准确度的定义、表示方法、考察方法和要求。准确度：指用该方法测得的生物样品中待测药物浓度与其真实浓度的接近程度。表示方法：相对回收率RR或相对误差RE要求：RR 85115LLOQ附近80120 RE15LLOQ附近20精细度：每次测定结果与屡次测定的平均值的偏离程度。表示该分析方法的可重复性，可反映分析方法的可操作性。表示方法：相对标准偏差RSD要求： RSD一般应小于15 LOQ附近RSD应小于20。需要进展哪些稳定性试验？短期室温稳定性长期储存稳定性冻融稳

11、定性储藏液稳定性待测溶液稳定性样品处理过程稳定性提取回收率的定义、评价指标和限度要求。指从生物样本基质中回收得到分析物质的响应值与标准物质产生的响应值的百分比，用于评价样品预处理方法。取待测药物对准品参加空白基质中，制备高、中、低3个浓度QC样品，每个浓度5个样品按样品处理方法处理，测定。 另取等量一样浓度的标准溶液，不经提取处理，直接测定。 标1个浓度5个QC样品也需进展提取回收率试验。提取回收率限度要求：一般应50且恒定；高、中浓度的RSD应15%；低浓度的RSD应20。 标的提取回收率应与被测物一致或相近，一般相差不超过10%分析方法的质量控制方法及限度要求。每个分析批生物样品测定时应建

12、立新的标准曲线，并随行测定高、中、低3个浓度的QC样品，每个浓度至少双样品，QC样品数不得少于未知样品数的5%，且不得少于6个，并均匀分布在未知样品测试顺序中。限度要求：偏差一般应小于15%，低浓度点小于20%，最多允许33%的质控样品结果超限，且不得均在同一浓度血浆蛋白结合率的定义，测定常用的5种方法，平衡透析法原理。第一组定义：药物血浆蛋白结合率是药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率，是药物代动力学的重要参数常用方法：1平衡透析法2超滤法3超速离心法4光谱法5色谱法平衡透析法原理：半透膜与蛋白质易产生体积迁移效应，对于带电的蛋白质可能产生Gibbs-Donna 效应和以非特异性的透析

13、设备外表的药物吸附效应在盐酸哌甲酯稳定性考察实验中，采取的提高稳定性的方法有哪些？分别从什么方面起到提高稳定性的作用？第三组基质效应的定义，来源，评定方法及消除方法。第四组基质效应：来源于生物样品中的源组分和样品处理后引入的杂质，常对样品的测定有显著的干扰，并影响测定结果的稳定性，这些影响和干扰被称为基质效应。来源：源性杂质指生物样品中存在的有机和无机成分，经前处理后仍存在于提取液中。外源性杂质外源性组分在生物样品中不存在，但同样会带来基质效应，由样品前处理各步骤引入。评定方法：1柱后灌注法2提取后添加法消除方法：1样品前处理2同位素标3色谱别离4质谱别离手性高效液相色谱法的分类。P151第五

14、组1手性衍生化试剂法2手性流动相添加法3手性固定相法Caco-2细胞模型用于什么类型的研究，花旗松素和落新妇苷在细胞中的转运情况如何？第七组是一种人克隆结肠腺癌细胞，构造和功能类似于分化的小肠上皮细胞，具有微绒毛等构造，并含有与小肠刷状缘上皮相关的酶系。Caco-2细胞与人小肠上皮细胞在形态学上相似，具有一样的细胞极性和严密连接。可以用来进展模拟体肠转运的实验。31.免疫分析法的原理。P178-181,当标记抗原与未标记抗原同置于含有一定抗体的反响体系中，标记抗原Ag与抗体Ab发生竞争结合反响免疫反响的根本条件，什么是抗原，药物属于什么类型抗原。特异抗体的制备和鉴定。根本条件：特异性抗体、标记

15、抗原、未标记抗原标准品抗原：指在机体中引起特异性免疫应答反响的物质药物大多为小分子物质，认为是半抗原，与蛋白质等载体物质结合后成为完全抗原特异抗体的制备：抗原+福氏佐剂混合形成稳定的油包水乳剂；注射部位：多采用脚掌、腹股沟淋巴结、大腿肌肉、皮下及静脉等；时间：间隔一定时间注射一次，数月后可得满意的抗血清。当抗体达一定量时，及时采血，分取血清抗体，经纯化别离后对抗体进展鉴定。鉴定：滴度滴度titer即效价，以抗血清的稀释度表示，稀释倍数越大，滴度越高，效价也越高特异性特异性specificity即免疫反响的专属性，用穿插反响率来表示3活度活度activity指抗体与相应抗原的亲和力，即抗原抗体结

16、合的结实度。免疫分析法的分类P187，游离与结合标记药物的别离方法。P189-190分类：按标记物不同 ，分为：放射免疫分析法RIA酶免疫分析法EIA 荧光免疫分析法FIA化学发光免疫分析法CLIA根据抗原抗体结合反响平衡后，是否将结合物B与游离物F别离，分为：均相免疫非均相免疫别离方法：层析法、沉淀法、吸附法、微孔滤膜法、固相法、双抗体法药代动力学的定义P233。临床药代动力学研究的对象有哪些？各自属于哪个临床试验阶段？目的分别是什么？第二组定义：药物代动力学ADME是研究药物在生物体吸收、分布、代和排泄过程及规律的一门学科。应用动力学原理与数学处理方法，定量描述体药物及代物浓度随时间变化的

17、动态规律，探讨药物在体的代途径。临床研究对象：1安康志愿者的药代动力学研究【1期】 探讨药物在体吸收、分布和消除的动态变化特点2目标适应症患者的药代动力学研究【2、3期】 当目标适应症患者的疾病状态对药物的药代动力学产生重要影响时应进展此试验3特殊人群的药代动力学研究【3、4期】肝肾功能损害患者、老年和儿童患者可能影响药物代、排泄，因此进展研究，指导合理用药，保证平安有效4群体药代动力学【】关于目标患者个体之间药物浓度变异来源与相关性的研究生物利用度和生物等效性试验均是评价制剂质量的重要指标，但两者的目的各有侧重，且在药品研发的不同阶段发挥不同作用。P233整段话第二组生物利用度和生物等效性均

18、是评价制剂质量的重要指标，前者反映药物活性成分吸收进入体的程度和速度，是新药研究过程中选择适宜给药途径和确定用药方案的重要依据之一。后者重点在以预先确定的等效标准和限度进展的比较，是保证含同一药物活性成分的不同制剂体行为一致性的依据，是判断研发产品是否可替换已上市药品使用依据。两者在不同研发阶段有不同作用。治疗药物监测中治疗窗的定义，临床需要进展血药浓度监测的药物需要符合的条件有哪些？P287定义：临床上为了药物治疗的需要，对许多药物都给出了治疗浓度围。把最低有效浓度作为治疗浓度的下限，最小中毒浓度或最大有效浓度作为治疗浓度的上限。这个围又称治疗窗Therapeutic window)，以此来调整血药浓度，设计给药方案。临床需要进展血药浓度监测的药物应符合以下条件：1有明确的治疗浓度围2血药浓度与药理效应之间具有明确的量效关系3临床上缺少及时的、易观察的、可量化的疗效指标。37 药物代的定义，分类，相应的代反响分别有哪些？参与药物代酶有哪些？P