病毒感染的检查方法与防治原则-课件

1、病毒感染的检查方法与防治原则 病毒感染的检查方法与防治原则 目的与要求了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。目的与要求风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()早期抗体检测（IgM）应用：人群免疫情况的调查亚单位疫苗（subunit vaccine）应用：尚无敏感细胞的病毒培养病毒成分（抗原或核酸）临床诊断少用单层细胞培养（monolayer cell culture）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）单层细胞培养（monolayer cell culture） 第一节 病毒感染的检查方法

2、风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE() 病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 电镜一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 ，尽快送检 一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养1.鸡胚

3、培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒 1.鸡胚培养 病毒感染的检查方法与防治原则-课件1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低病毒感染的检查方法与防治原则-课件2.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒2.动物接种病毒的分离培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类

4、悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）病毒的分离培养病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鉴定 1病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定 细胞种类

5、二倍体细胞（diploid cell）第二节 病毒感染的防治原则接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒鸡胚接种（egg inoculation）Northern blot早期抗体检测（IgM）进行血清流行病学调查等（plaque formation test）风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()CPE(+)风疹病毒(-)单层细胞培养（monolayer cell culture）应用：人群免疫情况的调查电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；采用孵化914天的鸡胚病毒成分（抗原或核酸）应用：人群免疫情况的调查细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞种类 二倍

6、体细胞（diploid cell）细胞麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融形成包涵体(inclusion body)(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)形成包涵体(inclusion body)(1)细胞病变效腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面HA受体腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorptio(3)干扰现象（interference

7、）风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-)CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+)(3)干扰现象（interference）风疹病毒人胚肾细2. 病毒数量与感染性测定1.蚀斑形成试验 （plaque formation test） 2.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量2. 病毒数量与感染性测定1.蚀斑形成试验感染性病毒量2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘

8、类病毒）， 对一般病毒检测意义不大2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限3.病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验-正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验） (2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型(2三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定四、病毒感染的血清学诊断应用：采取标本分离病毒为时已晚目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒

9、为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等四、病毒感染的血清学诊断应用：1.中和试验（neutralizing test）病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用1.中和试验（neutralizing test）病毒中和五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒的快速诊断光镜-包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blot病毒的快速诊断光镜-包涵体电镜免疫荧光ELISA分子第二节 病毒感染的防治原则第二节 病毒感染的防治原则灭活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine