乳猪料用原料检测方法

1、PAGE PAGE 31第一部分:乳猪料料用原料料检测方方法 山东六和集集团技术术部编辑辑 20006-001-005目 录1: 饲用用玉米脂脂肪酸值值的测定定2: 油脂脂碘价的的测定3: 油脂脂的酸价价及过氧氧化值的的测定4: 鱼粉粉中酸价价的测定定5: 乳清清粉中乳乳糖的测测定.6: 油脂脂TBAA值的测测定方法法.7: 呕吐吐毒素(DONN)的检检测ELLISAA法.8: 黄曲曲霉毒素素的测定定ELIISA法法.9: 鱼粉粉中组胺胺的测定定.10:挥发发性盐基基氮的测测定(VVBN).11:饲料料中免疫疫球蛋白白lgGG的测定定.12:玉米米副产品品中二氧氧化硫残残留量的的测定.13:鱼

2、粉粉中脲醛醛聚合物物的鉴别别.14:谷物物中淀粉粉含量的的测定.15:次粉粉中泥沙沙及矿物物质的测测定.16:镜检检过程中中的定性性实验(鱼粉、肉肉骨粉、玉玉米蛋白白粉、豆豆类蛋白白粉、大大米蛋白白粉)17:淀粉粉糊化度度分析方方法.18:大豆豆制品中中尿素酶酶活性分分析方法法(PHH增值法法).19:油脂脂定性试试验.20:乳糖糖测定附附表.一.饲用玉玉米脂肪肪酸值的的测定1.试剂：1.1 KKOH乙乙醇标准准溶液CC(KOOH)=0.001mool/LL取KOH溶溶液CC(KOOH)=0.11moll/L 1000mll，用乙乙醇（995%）稀稀释到11 升，然然后按GGB6001标定定。

3、1.2 酚酚酞指示示剂：22g/ll乙醇溶溶液1.3 无无水乙醇醇2 步骤：将平均样品品按四分分法制得得约800g样品品粉碎，过过0.445mmm孔径筛筛（400目），立立即称取取10gg样品（精精确到00.011g），于于1500ml具具塞三角角瓶内，加加50mml无水水乙醇，加加塞振动动10分分钟，过过滤，并并用无水水乙醇洗洗3次，每每次155ml，然然后加酚酚酞3滴滴，用00.011moll/lKKOH乙乙醇标准准溶液滴滴定到溶溶液呈微微红色，同同时取990mll乙醇作作空白。3计算：脂肪酸值(mgKKOH/1000g)按按下式计计算（V-V00）C56.1脂肪酸值= 1000 mm 式

4、中：V-样样品耗碱碱标准溶溶液的体体积，mmlV0空空白耗碱碱标准溶溶液的体体积，mmlC-KKOH标标准滴定定溶液的的浓度，mmol/lm-样样品质量量,g二、油脂碘碘价的测测定1 试剂与与溶液1.1 韦韦氏液的的配制：称取三三氯化碘碘7.99g和纯纯碘8.7g分分别溶于于冰乙酸酸中，合合并两液液，再用用冰乙酸酸稀释至至1L，贮贮于棕色色瓶内。1.2 KKI溶液液 1550g/L1.3硫代代硫酸钠钠标液滴滴定溶液液C（NNaS22O3）=00.1mmol/L）1.4 三三氯甲烷烷CHCCl3 ARR2.步骤：按附表称取取试样（准准确至00.00002gg）于干干燥的碘碘量瓶中中，加220ml

5、l CHHCl33溶解试试样，加加25.00mml韦氏氏液立即即加塞，以以KI溶溶液封口口，摇匀匀后，在在205条件下下，置黑黑暗处330miin（碘碘价在1130以以上时放放置1hh），到到时立即即加入KKI溶液液20mml和水水1000ml,用C（NNaS22O3）=00.1mmol/L）硫硫代硫酸酸钠标液液滴定至至浅黄色色时，加加入1mml 55g/LL淀粉指指示剂，滴滴定至兰兰色消失失。同样样条件做做空白两两个，取取平均值值。结果的表示示和计算算：碘价按下式式计算碘价= EQ F(（V0-V1）C0.112699,m) 1000 式中：V11试样样消耗硫硫代硫酸酸钠标准准溶液的的体积；

6、mlV2空空白消耗耗硫代硫硫酸钠标标准溶液液的体积积；mllC-硫硫代硫酸酸钠标准准溶液的的浓度；moll/Lm-试试样的质质量；gg0.12669与1.00mml硫代代硫酸钠钠标准溶溶液(CC（NaaS2O3）=11.0000mool/LL)的相当的以以克表示示的碘的的质量。附表：碘价价数值与与试样用用量碘价试样用量范范围（gg）碘价试样用量范范围（gg）200.8466111.588651200.2111500.26644400.6344600.799351400.1811300.22266600.4233100.522881600.1588700.19983800.3177300.399

7、661800.1411000.177621000.2533800.311732000.1266900.15586三、油脂的的酸价及及过氧化化值的测测定一.油脂的的酸价的的测定：1 试剂与与溶液1.1乙醚醚-乙醇醇溶液（22+1）配配制时加加入酚酞酞，并用用碱调至至中性1.2 NNaOHH标准滴滴定溶液液C（NNaOHH）=00.1mmol/L1.3酚酞酞指示剂剂 1gg/L2 步骤将需用的锥锥形瓶烘烘干；分分别移取取油脂上上层、中中层、下下层液各各122ml置置于烘干干的锥形形瓶中精精密称量量。加入入50mml乙醚醚-乙醇醇溶液使使其溶解解，可以以微热，加加入酚酞酞指示剂剂3-55滴,然然后用

8、NNaOHH标准溶溶液进行行滴定至至粉红色色，且11分钟不不褪色为为终点。同同时做空空白计算：酸价(mggKOHH/g)按下式式计算酸价=C(V-V0 )56.1/mm式中： CNaOOH标准准溶液的的浓度；moll/LV消耗耗标准溶溶液的体体积；mmlm样品品的重量量；g 56.1与1.00mmlC（NNaOHH）=11.0000mool/LL相当的的以mgg表示的的KOHH的质量量。说明： 酸价是指中中和1.0g油油脂所含含游离脂脂肪酸所所需KOOH的毫毫克数,同一种种油若酸酸价高，表表明油脂脂因水解解而产生生更多的的游离脂脂肪酸。二.油脂脂的过氧氧化值的的测定1.原理：油脂氧化过过程产生

9、生过氧化化物，与与KI作作用，生生成游离离碘，以以淀粉作作指示剂剂，用硫硫代硫酸酸钠标准准溶液滴滴定。2试剂与溶溶液2.1三氯氯甲烷冰乙酸酸的混合合液（44+6）2.2硫代代硫酸钠钠标准滴滴定溶液液C（NNa2S2O3）=00.011moll/L2.3淀粉粉指示液液10gg/L2.4碘化化钾KII AAR3 步骤：称取2 3gg(准确确到0.00002g)混匀的的样品，置置于2550mll烘干的的碘量瓶瓶中，加加入300ml三三氯甲烷烷冰乙酸酸（4+6）的的混合液液，使样样品完全全溶解，加加入约22g的碘碘化钾，紧紧密塞好好瓶塞，并并轻轻振振摇300秒钟，然然后在暗暗处放置置3分钟钟，取出出加

10、1000mll水，摇摇匀，立立即用的的硫代硫硫酸钠标标准溶(C（NNa2S2O3）=00.011moll/L)液滴定定至淡黄黄色时，加加1mll淀粉指指示液（10g/L），继续滴定至兰色消失为终点，同样条件做空白。4计算：过氧化值（II2%）按按下式计计算过氧化值（II2%）=（V11V0）C0.1126991000/m式中： V1-样样品消耗耗硫代硫硫酸钠的的体积；mlV0-空白消消耗硫代代硫酸钠钠的体积积；mllC硫代硫硫酸钠标标准溶液液的浓度度；mool/LLm样品的的重量；g 0.112699与11.000mlCC（Naa2S2O3）=11.0000mool/LL相当的的以克表表的I2

11、2的质量量 gg5 过氧化化值二种种单位的的换算:meq/kkg = II2 % * 78.9四、鱼粉中中酸价的的测定1 试剂与与溶液1.1乙醚醚-乙醇醇溶液（22+1）配配制时加加入酚酞酞，并用用碱调至至中性1.2 NNaOHH标准滴滴定溶液液C（NNaOHH）=00.055moll/L1.3酚酞酞指示剂剂 1gg/L2.步骤 称取233g（准准确到00.00002gg）鱼粉粉于干燥燥带塞的的三角瓶瓶中，加加40mml乙醚醚与乙醇醇（2+1）混混合溶液液，在振振荡器上上振摇330miin，干干过滤于于1500ml三三角瓶中中，并用用少量乙乙醚乙醇醇溶液洗洗涤三角角瓶三次次，加33滴的酚酚酞，

12、用用氢氧化化钠标准准溶液C（NNaOHH）=00.055moll/L滴定至至粉红色色，半分分钟内不不褪色为为终点，同同样条件件做空白白。3.结果的的表示和和计算：酸价（mggKOHH/g）按按下式计计算酸价（mggKOHH/g）= EQ F(56.1C（V-V0）,mm) 式中：CNaaOH标标准滴定定溶液的的浓度；moll/LV鱼粉粉消耗标标准溶液液的体积积；mllV0空空白消耗耗标准溶溶液的体体积；mmlm鱼粉粉样品的的质量；g56.1与11.000mlNNaOHH标准滴滴定溶液液C（NNaOHH）=11.0000mool/LL相当当的以mmg表示示的KOOH的质质量。mmg五、乳清粉粉中

13、乳糖糖的测定定1 试剂与与溶液1.1酒石石酸铜甲甲液：334.6639ggCuSSO4溶于水水，加入入0.55ml浓浓H2SO4，稀释释到5000mll。 酒石酸铜乙乙液：1173gg酒石酸酸钾钠，加加50ggNaOOH，稀稀释到5500mml。11.2 氢氧化化钠溶液液c(NNaOHH)= 1mool/LL1.3硫酸酸铁溶液液 550g/L1.4高锰锰酸钾标标准滴定定溶液cc（1/5 KKMnOO4）=00.1mmol/L2 步骤：称2g样品品（准确确到0.00002g）于于2000ml烧烧杯中，加加50mml水，电电炉加热热到800，加酒酒石酸铜铜甲液110mll，加NNaOHH（1mmo

14、l/L）55ml，搅搅拌后放放置到室室温，用用水定容容于2550mll容量瓶瓶中，摇摇匀，静静止1hh后干过过滤。吸吸取滤液液25.00mml于三三角瓶中中，加225mll酒石酸酸铜甲液液，再加加25mml酒石石酸铜乙乙液，在在电炉上上加热并并煮沸22minn（要保保证在33minn内煮沸沸），取取下过滤滤，并用用水洗涤涤沉淀445次次，之后后将滤纸纸及沉淀淀物（CCu2O）一一起放入入三角瓶瓶中，加加入硫酸酸铁（550g/L）225mll，再加加25mml水，用用玻璃棒棒搅拌并并微热到到看不到到Cu22O的红红色为止止，然后后用高锰锰酸钾标标准滴定定溶液(c（11/5 KMnnO4）=00.

15、1mmol/L)的的标准溶溶液滴定定到呈微微红色为为终点。同同样条件件做空白白3.结果的的表示和和计算：乳糖含量按按下式计计算Cu2O=（V-V0）C71.54由Cu2OO的质量量查表求求乳糖的的质量mm乳：样品中乳糖糖的含量量:乳糖糖%=mm乳/m样1000式中： mm乳样品品中乳糖糖的质量量；gm样-样品的的质量；V-样样品消耗耗KMnnO4的体积积；mllV0-空白消消耗KMMnO44的体积积；mll71.544常数；CKMnnO4标准溶溶液的浓浓度，mmol/L六、油脂TTBA值值的测定定方法原理：油脂受到光光、热、空空气中氧氧的作用用，发生生酸败反反应，分分解出醛醛、酸之之类的化化合

16、物。丙丙二醛就就是分解解产物的的一种，它它能与硫硫代巴比比妥酸(TBAA)作用用生成粉粉红色化化合物，在在5322nm波波长处有有吸收高高峰，利利用此性性质即能能测出丙丙二醛含含量，从从而推导导出油脂脂酸败的的程度。试剂2.1硫代代巴比妥妥酸(TTBA)水溶液液：准确确称取TTBA 0.2288gg溶于水水中，并并稀释至至1000ml（如如TBAA不易溶溶解，可可加热至至全溶澄澄清，然然后稀释释至1000mll），相相当于00.022moll/L；2.2 三氯乙乙酸混合合液：准准确称取取三氯乙乙酸（分分析纯）7.5g及 0.1g EDTA，用水溶解，稀释至100.00ml；2.3 氯仿（分分析

17、纯）；2.4 丙二醛醛标准溶溶液：称称取0.3155g 11，1，33，3-四乙氧氧基丙烷烷，溶解解后稀释释至10000.00mml，此此溶液每每ml相相当于丙丙二醛1100g，置置于冰箱箱内保存存。准确确吸取110mll，稀释释至1000.000mll，此溶溶液每mml相当当于丙二二醛100微克(g)，备备用。操作步骤3.1标准准曲线的的绘制准确吸取每每ml相相当于丙丙二醛110g的标标准溶液液0.00、0.1、00.2、00.3、00.4、00.5、00.6mml置于于纳氏比比色管中中，加水水至总体体积为55ml，加加入5mml TTBA溶溶液，然然后按样样品测定定步骤进进行，测测得光密密

18、度绘制制标准曲曲线。3.2样品品测定：准确称取融融化均匀匀的油脂脂样品55.0gg，置于于1000ml具具塞三角角瓶内，加加入500.0mml三氯氯乙酸混混合液，振振摇半小小时（保保持油脂脂融溶状状态，如如冷结可可在700水浴上上略微加加热使之之融化后后继续振振摇）用用双层滤滤纸过滤滤，除去去油脂。滤滤液重复复用双层层滤纸过过滤一次次。准确移取上上述滤液液5.00ml置置于255ml比比色管内内，加入入5.00 mllTBAA溶液，混混匀，加加塞，置置于900水浴内内保温440miin，取取出，冷冷却1hh，移入入小试管管内，离离心5mmin，上上清液倾倾入255ml纳纳氏比色色管中，加加入5

19、.0mll氯仿，摇摇匀，静静置，分分层，吸吸出上清清液于5532nnm波长长比色，对对照标准准曲线得得到微克克数（同同时作空空白试验验）。计算丙二醛含量量（mgg/kgg）按下下式计算算 丙丙二醛含含量（mmg/kkg）=式中:C-从标标准曲线线查得丙丙二醛的的微克数数(ugg) m样品品质量（gg）七、呕吐毒毒素(DDON)的检测测ELIISA法法测试前请仔仔细阅读读本说明明在28冷藏不要冻冻结1.简介 DONN毒素脱氧瓜萎镰镰菌醇（DDON，）是是单端孢孢菌素烯烯烃中的的一种，它它通常是是由生长长在谷类类物品（如如小麦、玉玉米、大大麦和秣秣草）霉霉菌镰红红菌素生生成的。脱脱氧瓜萎萎镰菌醇醇

20、的毒性性效应包包括：呕呕吐、不不想进食食、胃肠肠炎、腹腹泻、免免疫抑制制和血液液病。研究表明猪猪对脱氧氧瓜萎镰镰菌醇很很敏感。当当脱氧瓜瓜萎镰菌菌醇含量量1pppm时，它它们就拒拒绝进食食。其毒毒性也会会对其他他物种产产生毒性性效应，各各种物种种对脱氧氧瓜萎镰镰菌醇的的敏感性性各不相相同。研研究表明明脱氧瓜瓜萎镰菌菌醇会使使已加工工食物发发生问题题，包括括使可吃吃的谷类类制品产产生臭味味、对生生面团质质量产生生负面影影响。因因此，精精确测定定可能含含有脱氧氧瓜萎镰镰菌醇的的食物和和食品就就现得十十分重要要。FDDA（美美国食品品和药品品管理局局）已经经制定了了脱氧瓜瓜萎镰菌菌醇含量量的强制制标

21、准。美国食品药药物管理理局已经经颁布的的DONN毒素建建议限量量如下：适用对象限量物质人1 ppmm麦制品(面面粉、麸麸和胚芽芽)反刍动物牛牛肉饲养的牛和和鸡10 pppm 在在500%的食食入量(全食入量量时为55ppmm)所有谷物及及其副产产品猪5 ppmm 在20%的食入入量(全食入量量时为11ppmm)所有谷物及及其副产产品所有其它动动物5 ppmm 在40%的食入入量(全食入量量时为22ppmm)所有谷物及及其副产产品2.方法原原理本测试盒的的测试原原理是一一种竞争争性的直直接酶联联免疫吸吸附剂测测试方法法（ELLISAA），可可准确检检测出样样品中pppm级级的DOON毒素素。样品

22、品和标准准控制液液中游离离的DOON毒素素与轭合合物中的的DONN毒素竞竞争抗体体结合位位置。清清洗后，加加入底物物，底物物与轭合合物反应应出现兰兰色，兰兰色越深深表明DDON毒毒素越少少。将其其置于微微型孔阅阅读器中中可读出出透光度度，以控控制标准准液的透透光度作作标准曲曲线，将将样品的的透光度度与标准准曲线比比较计算算出样品品中DOON毒素素的准确确浓度。 3.贮存要要求本试剂盒存存放在228时，可可以一直直使用到到标签上上注明的的到期日日期。4.试剂与与仪器4.1已提提供的材材料48个包被被了抗体体的孔。48个红色色标记的的混合孔孔。5瓶1.55ml浓浓度为00、0.25、00.5、11

23、、3 ppmmDONN毒素控控制标准准液(黄黄色标签签) 。1瓶DONN毒素-HRPP轭合物物溶液(兰色标标签)。1瓶24mml底物物溶液(绿色标标签)。4.2需要要但未提提供的材材料1 提取材材料：蒸馏水或去去离子水水。100mll量筒150mll的具塞塞三角瓶瓶滤纸样品收集具具塞试管管漏斗粉碎机称量为525克克的秤带450nnm滤光光片的微微型孔阅阅读器200ll移液器器200ll吸咀纸巾或等效效的吸水水材料计时器防水记号笔笔洗瓶移液器用的的试剂槽槽蒸馏水或去去离子水水C（1/22H2SO4）=11moll/L的的硫酸终终止液5.注意事事项本测试盒不不使用时时应在228下存放放。不要使用过

24、过期的测测试盒。不要把不同同测试盒盒中的试试剂混合合使用。遵守正确的的移液技技术，包包括取液液前先用用该液润润洗一次次。放置时间与与本说明明不一致致时，可可能会出出现错误误的结果果。测试盒应先先恢复到到室温状状态(118330)后才才开始使使用。避免测试盒盒在室温温下长时时间放置置。不要使测试试盒冻结结。待测样品的的pH值值应为668。酸酸碱过大大的样品品应进行行调整。应应将包括括样品提提取液在在内的所所有废液液和实验验器皿进进行处理理（如同同已被DDON毒毒素污染染一样）。应应始终穿穿戴手套套和其它它防护服服。为了避免交交叉污染染，每个个样品应应使用清清洁的吸吸咀和玻玻璃器皿皿，并在在样品之

25、之间彻底底清洗所所有的玻玻璃器皿皿。6.程序性性的提示示底物：底物物随时可可用，底底物为清清亮的浅浅兰色，如如果变成成了深兰兰，则弃弃去。使使用时，只只倒出所所需量到到试剂槽槽中，未未用完的的不要再再倒回试试剂瓶中中。不使使用时应应盖住试试剂槽，以以避免光光的照射射。7.操作步步骤7.1样品品制备和和提取1.待测样样品应按按公认的的采样技技术采集集。样品品应磨碎碎并充分分混合后后再提取取。测试试前，将将样品在在288存放。2.将300ml硫硫酸缓缓缓注入110000ml水水中，冷冷却摇匀匀，配成成的硫酸酸(C（11/2HH2SO4）=11moll/L)终止液液。3.取1份份代表性性样品。研研磨

26、样品品至至少少有755%的样样品通过过20目目的筛子子，颗粒粒尺寸大大约相当当于细的的速溶咖咖啡。4.将100克研磨磨过的样样品加入入50mml 水水或去离离子水中中，用手手或震荡荡器剧烈烈混合115分钟钟。 5.将静置置2-33分钟，使使一些物物质沉淀淀下来。6.用滤纸纸过滤出出至少55ml的的提取液液。收集集该滤液液即为样样品的待待测液。7.2测试试程序测试前应将将所有的的试剂恢恢复至室室温（118330）。1.从箔包包中取红红色标记记的混合合孔，放放在孔架架上。2.取同样样数量的的包被了了抗体的的孔。把把暂不使使用的孔孔放回到到箔包中中，并重重新密封封，以保保护抗体体。在带带子的一一端标

27、上上“1”，然后后放到孔孔架上，将将有标记记的一端端放在左左边。不不要在孔孔的里面面和底部部写标记记。3.在使用用之前摇摇动试剂剂瓶，混混合每种种试剂。4.从兰色色标签的的瓶内吸吸取1000l轭合合物加到到每个红红色标记记的混合合孔内。 5.每次使使用新吸吸咀，吸吸取1000l控制制标准溶溶液和样样品液按按下列顺顺序加到到红色标标记的混混合孔内内6 用移移液器吸吸入、排排出3次次使孔内内溶液彻彻底混合合，吸取取1000l加到到相应的的包被了了抗体的的孔内，在在平的表表面上将将板前后后滑动确确保充分分混合110220秒钟钟，不要要溅出试试剂，混混合后于于室温下下（188300）放置55分钟。弃弃

28、去红色色标记孔孔。7倒掉包包被了抗抗体孔内内的溶液液。在每每个孔内内加满蒸蒸馏水或或去离子子水，再再倒出，如如此重复复5次，将将板朝下下，在吸吸水材料料上拍击击以去除除所有的的水滴。8从绿色色标签试试剂瓶中中倒出所所需量的的试剂到到绿色试试剂槽中中。9用移液液器和新新吸咀，吸吸取1000l底物物加到每每个孔内内，在平平的表面面上将板板前后滑滑动确保保充分混混合100200秒钟。10混合合后放置置2.55分钟。11从试试剂瓶中中倒出所所需量的的硫酸(C（11/2HH2SO4）=11moll/L)终止液液到试剂剂槽中。12吸取取1000l终止止液加到到每个孔孔内，在在平的表表面上将将板前后后滑动确

29、确保充分分混合。13用干干净的布布擦净板板底，将将板置于于微型孔孔阅读器器于4550nmm滤光片片下读数数。由于于气泡会会影响结结果，应应削除溶溶液中气气泡。应应在加入入红色终终止剂后后20分分钟内完完成读数数。14用LLog/loggit软软件计算算结果。8.特性参参数检出限：00.1 ppmm(100次阴性性样品的的平均值值加2倍倍标准偏偏差)。定量检测限限：0.25 ppmm(以标标准曲线线的最低低浓度点点表示)。定量范围：0.225-22.5 pppm(大大于2.5 pppm时时,见样样品制备备和提取取程序)八、黄曲霉霉毒素的的测定EELISSA法测试前请仔仔细阅读读本说明明在28冷藏

30、不要冻冻结1.简介 黄曲霉霉毒素黄曲霉毒素素是一种种剧毒且且致癌的的物质，它它是由黄黄曲霉菌菌和寄生生曲霉菌菌A的某某些菌株株产生的的。黄曲曲霉毒素素有四种种类型：B1，BB2，GG1和GG2。黄黄曲霉毒毒素B11是毒性性最大且且最常有有的。最最容易产产生黄曲曲霉毒素素污染的的物质是是谷物、花花生、棉棉子、高高梁和大大多数的的树果。动物食入过过量黄曲曲霉毒素素的影响响从慢性性健康直直到死亡亡，已经经证明黄黄曲霉毒毒素能引引起肝损损坏或癌癌症、降降低奶和和蛋的产产出、免免疫抑制制和干扰扰再生效效率。美国食品药药物管理理局已经经规定了了食品和和饲料中中最大黄黄曲霉毒毒素限量量。因此此，准确确测定黄

31、黄曲霉毒毒素的含含量，对对于监测测可能发发生黄曲曲霉毒素素污染的的食品和和饲料的的质量来来说，是是非常重重要的。测测试程序序包括仔仔细的采采样、化化学提取取、卫生生学评价价和定量量分析。美国食品药药物管理理局已经经颁布的的黄曲霉霉毒素限限量如下下：适用对象限量物质人20ppbb除牛奶外的的所有食食品所有动物20ppbb所有饲料（下下列除外外）除外：种牛，种猪猪，成熟熟的家禽禽100pppb谷物育肥期的猪猪（1100磅磅）200pppb谷物育肥期的菜菜牛300pppb谷物育肥期的菜菜牛、猪猪、家禽禽300pppb棉籽粉2.方法原原理本测试盒的的测试原原理是一一种竞争争性的直直接酶联联免疫吸吸附剂

32、测测试方法法（ELLISAA），可可准确检检测出样样品中pppb级级的黄曲曲霉毒素素。样品品和标准准控制液液中游离离的黄曲曲霉毒素素与轭合合物中的的黄曲霉霉毒素竞竞争抗体体结合位位置。清清洗后，加加入底物物，底物物与轭合合物反应应出现兰兰色，兰兰色越深深表明黄黄曲霉毒毒素越少少。将其其置于微微型孔阅阅读器中中可读出出透光度度，以控控制标准准液的透透光度作作标准曲曲线，将将样品的的透光度度与标准准曲线比比较计算算出样品品中黄曲曲霉毒素素的准确确浓度。 3.贮存要要求本试剂盒存存放在228时，可可以一直直使用到到标签上上注明的的到期日日期。4.试剂与与仪器4.1提供供的材料料4.1.11 448个

33、包包被了抗抗体的孔孔。4.1.22 448个红红色标记记的混合合孔。4.1.33 44瓶1.5mll浓度为为0、55、155、500ppbb黄曲霉霉毒素控控制标准准液(黄黄色标签签)（甲甲醇溶液液的处理理，见注注意事项项）。4.1.44 11瓶7mml黄曲曲霉毒素素-HRRP轭合合物溶液液(兰色色标签)。4.1.55 11瓶244mlKK兰 eq oac(,R)底物溶溶液(绿绿色标签签)。4.1.66 11瓶322ml红红色 (红色标标签)。4.2需要要但未提提供的材材料4.2.11 提取材材料：70%甲醇醇溶液100mll量筒150mll的具塞塞三角瓶瓶滤纸样品收集具具塞试管管漏斗 粉碎机机

34、4.2.33 称量为为5225克的的秤4.2.44 带4550nmm滤光片片的微型型孔阅读读器4.2.55 2000l移液液器4.2.66 2000l吸咀咀4.2.77 纸巾或或等效的的吸水材材料4.2.88 计时器器4.2.99 防水记记号笔4.2.110 洗瓶4.2.111 移液器器用的试试剂槽4.2.112 蒸馏水水或去离离子水4.2.113 硫酸终终止液CC（1/2H2SO4）=11moll/L5.注意事事项5.1 甲甲醇易燃燃，其容容器应密密闭并远远离热、火火花、明明火和烟烟。如果果吞下或或吸入蒸蒸气，它它是有毒毒的。应应避免与与皮肤接接触。5.2 本本测试盒盒不使用用时应在在288

35、下存放放。5.3 不不要使用用过期的的测试盒盒。5.4 不不要把不不同测试试盒中的的试剂混混合使用用。5.5 遵遵守正确确的移液液技术，包包括取液液前先用用该液润润洗一次次。5.6 放放置时间间与本说说明不一一致时，可可能会出出现错误误的结果果。5.7 测测试盒应应先恢复复到室温温状态(1830)后才才开始使使用。5.8 避避免测试试盒在室室温下长长时间放放置。5.9 不不要使测测试盒冻冻结。5.10应应将包括括样品提提取液在在内的所所有废液液和实验验器皿进进行处理理（如同同已被黄黄曲霉毒毒素污染染一样）。应应始终穿穿戴手套套和其它它防护服服。5.11为为了避免免交叉污污染，每每个样品品应使用

36、用清洁的的吸咀和和玻璃器器皿，并并在样品品之间彻彻底清洗洗所有的的玻璃器器皿。5.12待待测样品品的pHH值应为为688。酸碱碱过大的的样品应应进行调调整。关关于pHH值的调调整，请请与Neeogeen代表表或技术术服务部部门联系系。6.程序性性的提示示K-兰底物物随时可可用，底底物为清清亮的浅浅兰色，如如果变成成了深兰兰，则弃弃去。使使用时，只只倒出所所需量到到试剂槽槽中，未未用完的的不要再再倒回试试剂瓶中中。不使使用时应应盖住试试剂槽，以以避免光光的照射射。7.操作步步骤7.1样品品制备和和提取待测样品应应按公认认的采样样技术采采集。样样品应磨磨碎并充充分混合合后再提提取。测测试前，将将样

37、品在在288存放。按按以下程程序进行行：1 将77份分析析级甲醇醇与3份份蒸馏水水或去离离子水混混合配成成70%的甲醇醇溶液。2 将330mll硫酸缓缓缓注入入10000mll水中，冷冷却摇匀匀，配成成硫酸(C（11/2HH2SO4）=11moll/L) 的终终止液。取1份代表表性样品品。研磨磨样品至至至少有有75%的样品品通过220目的的筛子，颗颗粒尺寸寸大约相相当于细细的速溶溶咖啡。把5克研磨磨过的样样品加入入到255ml 70%的甲醇醇中，然然后用力力摇动115分钟钟。用滤纸过滤滤出至少少5mll的提取取液。该该滤液即即为样品品的待测测液。该待测液即即可用于于测试。7.2测试试程序测试前

38、应将将所有的的试剂恢恢复至室室温（118330）。1.从箔包包中取红红色标记记混合孔孔，放在在孔架上上。2.取同样样数量的的包被了了抗体的的孔。把把暂不使使用的孔孔放回到到箔包中中，并重重新密封封，以保保护抗体体。3.在使用用之前摇摇动试剂剂瓶，混混合每种种试剂。4.从兰色色标签瓶瓶内吸取取1000l轭合合物加到到每个红红色标记记的混合合孔内。弃弃去吸咀咀。5.每次使使用新吸吸咀，吸吸取1000l控制制标准溶溶液和样样品液按按下列顺顺序加到到红色标标记的混混合孔内内 6.用移液液器吸入入、排出出3次使使孔内溶溶液彻底底混合，吸吸取1000l加到到相应的的包被了了抗体的的孔内，在在平的表表面上将

39、将板前后后滑动确确保充分分混合110220秒钟钟，不要要溅出试试剂，混混合后于于室温下下（188300）放置22分钟。7.倒掉包包被了抗抗体孔内内的溶液液。在每每个孔内内加满蒸蒸馏水或或去离子子水，再再倒掉，如如此重复复5次，将将板朝下下，在吸吸水材料料上拍击击以去除除所有的的水滴。8.从绿色色试剂瓶瓶中倒出出所需量量的试剂剂到试剂剂槽中。9.用移液液器和新新吸咀，吸吸取1000l底物物加到每每个孔内内，在平平的表面面上将板板前后滑滑动确保保充分混混合100200秒钟。10.混合合后放置置1.55分钟。11.从试试剂瓶中中倒出所所需量的的硫酸(C（11/2HH2SO4）=11moll/L)终止

40、液液到试剂剂槽中。12.用移移液器吸吸取1000l终止止液加到到每个孔孔内，在在平的表表面上将将板前后后滑动确确保充分分混合。13.用干干净的布布擦净板板底，将将板置于于微型孔孔阅读器器于4550nmm滤光片片下读数数。由于于气泡会会影响结结果，应应削除溶溶液中气气泡。应应在加入入终止液液后200分钟内内完成读读数。14.用LLog/loggit软软件计算算结果。8.特性参参数检出限：22ppbb(100次阴性性样品的的平均值值加2倍倍标准偏偏差)。定量检测限限：5pppb(以标准准曲线的的最低浓浓度点表表示)。定量范围：5-550 pppb(大于550 pppb时时应稀释释)九、鱼粉中中组胺

41、的的测定 原原理简介介:鱼粉粉中组胺胺用三氯氯乙酸提提取，之之后调PPH=99，将游游离的组组胺用正正戊醇提提取出，之之后再用用HCll反萃取取，用偶偶氮试剂剂显色。组胺+三氯氯乙酸盐盐（溶于于水）PHH=9组胺胺（溶于于正戊醇醇）HCll-正正戊醇（组组胺溶于于稀HCCl）1试剂与溶溶液1.1偶氮氮试剂的的配制甲液：称取取0.55g对硝硝基苯胺胺，加55ml盐盐酸（11+1）溶溶解，再再加水释释到2000mll，置冰冰箱中（228度度）保存存。乙液：亚硝硝酸钠溶溶液5gg/l，临临用现配配甲液5mll、乙液液40mml混合合后立刻刻使用。2三氯乙酸酸 1000 gg/L1.3氢氧氧化钠 25

42、50g/L1.4盐酸酸 1mool/LL1.5正戊戊醇 分析析纯6碳酸氢钠钠溶液 500g/LL1.7磷酸酸组胺（SSigmma公司司）2.步骤 2.1样品品处理 称取取13克鱼鱼粉于具具塞三角角瓶内，加加入255.0mml三氯氯乙酸（100g/L）每隔30分钟摇动一次，提取3小时，过滤，取滤液2.00ml或1.00ml于15ml试管内，加氢氧化钠（250g/L）5滴，振荡一下，再加5ml正戊醇振荡2分钟，静止分层（如出现乳化现象可滴加2-3滴无水乙醇），用移液枪小心吸取上清液（正戊醇层）于50ml分液漏斗内，下层沉淀再下层沉淀再分别用正戊醇5ml、3ml、3ml反萃取3次。将正戊醇全部收集到

43、50ml分液漏内,分别用盐酸(1mol/L)6 ml、6 ml、3 ml反萃取3次,收集水相（下层）于20ml刻度试管内，用水定容至刻度(20.00ml)，摇匀，吸取1.00ml（或2.00ml）盐酸提取液于10 ml比色管中，加入碳酸氢钠溶液（50g/L）3.0ml摇匀，振荡下加入偶氮试剂3.0ml，用水定容到刻度，室温下显色10min，用1cm比色皿于480nm下测定吸光度。2.2标准准曲线称取磷酸组组胺样品品（Siigmaa公司）22.76671mmg，置置于1000mll容量瓶瓶内，用用水溶解解并定容容到刻度度，此液液组胺含含量为110ugg/mll，分别别取此标标液0.00、11.0

44、00、2.00、44.000、6.00mml于55支100ml比比色管内内，各加加盐酸（11moll/L）11.0mml，振振荡，用用水定容容到刻度度，摇匀匀后放置置10mmin（室室温下），用用1cmm比色皿皿于4880nmm下测吸吸光值。参比液：试试剂空白白3计算鱼粉中组胺胺按下式式计算公公式：组胺（mg/100g）= C*1100 组胺（mg/100g）=(m/255.0)*(11.000/155.0)*10000实例：鱼粉粉2.334555，取三三氯乙酸酸提取液液1.000mll，吸光光度A=0.2257标准曲线:A=00.01123880*CC+0.013310计算: CC =(A-

45、00.01131)/0.01223800=199.700ug组胺=(119.770*1100)/(2.334555/255)*(1.00/155)*10000=3315mmg/1100gg=31150pppm应用：进口白鱼粉粉：组胺胺100mg/1000g(11-5mmg/1100gg)进口水产级级蒸汽鱼鱼粉1100mmg/1100gg(500mg/1000g)优质国产鱼鱼粉1150mmg/1100gg(500-1550mgg/1000g)新鲜度差的的鱼粉(国产,进口)组胺22003400mg/1000g用于乳猪料料的鱼粉粉 组胺胺1000mgg/1000g十、挥发性性盐基氮氮的测定定(VBB

46、N)原理简介:蛋白质质分解时时，氨基基酸脱胺胺基生成成氨，氨氨基酸脱脱羧基生生成胺，氨氨与胺(挥发性性的胺)在碱液液(氧化化镁)中中被蒸发发出来，用用硼酸吸吸收，用用标准盐盐酸反滴滴定，测测出其含含量。1试剂与溶溶液1.1氧化化镁溶液液 10gg/L2.步 骤骤称取5-110g样样品于2250mml具塞塞三角瓶瓶内，加加入1000.00ml水水，振荡荡30mmin，过过滤，取取虑液110.000mll，按粗粗蛋白蒸蒸馏操作作，但加加入的碱碱为氧化化镁溶液液（100g/LL）7-10mml。3.计算：挥发性盐基基氮（VVBN）（mmg/1100gg）按下下式计算算VBN（mmg/1100gg）=

47、 CC（V-V0）*114/m*（110/1100）*1000实例:鱼粉粉样品88.67706gg，VHCCl=00.02200mmol/L V=33.933ml V00=0.15mml VBN=00.02200*14* (33.933-0.15)/88.67706*(100/1000)*1000=122.1mgg/1000g应用：新鲜度好的的鱼粉VVBN1550mgg/1000g（1180-3500 mgg/1000g）乳猪料鱼粉粉VBNN4.1砂 分 %1.01.1-22.02.1赖 氨 酸 %4.84.4-44.84.3蛋 氨 酸 %1.71.5-11.71.5总 钙 %2.0-55.0

48、2.0-55.02.0-55.0总 磷 %1.0-33.51.0-33.51.0-33.5粗 灰 分 %1818-20020.11镜 检掺含有掺含有掺害3.3新鲜鲜度指标标挥发性盐基基氮VBBN mmg/1100gg80100100-1180组胺（mgg/1000g）5051-11001012000油脂酸价(mgkkOH/gg)3.05.05.1-77.0丙二醛（mmg/kkg油）2.04.04.1-55.0口感具有新鲜鱼鱼粉香味味，无臭臭，无油油哈，无无氨味具有新鲜鱼鱼粉香味味，无臭臭，无油油哈，无无氨味具有鱼粉香香味，但但有轻度度异味3.3卫生生指标：符合GGB1330788-20001的

49、的规定包装、运输输及贮存存4.1鱼粉粉中不得得掺入其其它非鱼鱼粉物质质，若加加入抗氧氧化剂应应说明4.2不得得用装过过有害物物质的废废旧包装装袋装鱼鱼粉4.3包装装应符合合运输、保保质、保保量的要要求，防防止污染染。品质判断指指南5.1鱼粉粉质量好好坏主要要看二个个方面：其一，是是否掺假假，掺杂杂？其二二，鱼粉粉的新鲜鲜度如何何？特别别是白鱼鱼粉鲜度度好坏，价价格相差差几千元元。5.2识别别真假鱼鱼粉的主主要手段段为镜检检+化学学定性检检查5.3鱼粉粉的新鲜鲜度指标标很多，不不能仅凭凭一个指指标的好好坏就下下结论，这这些指标标中：油油脂酸价价，丙二二醛含量量或TBBA值反反映的是是鱼粉中中脂肪

50、变变质的情情况（被被氧化、水水解），而而组胺、挥挥发性盐盐基氨（VVBN）反反映的是是鱼粉蛋蛋白质变变质的情情况，在在实际中中要具体体问题具具体分析析，但不不论指标标数据如如何，口口感是最最真实最最有效的的方法，好好的鱼粉粉口感为为鱼粉的的香味，逐逐渐地溶溶化，最最后仅剩剩下很少少的鱼骨骨头，而而差的鱼鱼粉口感感臭味，氨氨味，油油哈味及及其它异异味。5.4 鱼鱼粉的其其它指标标，灰分分的正常常值为115-220%，钙钙磷比为为2：11。若灰灰分低于于13%，而磷磷高（11.5-2.00%），钙钙低（22-3%），说说明掺入入大量的的鱼溶浆浆及生产产过程的的废液，若若盐份太太高说明明鱼不新新鲜有

51、假假，若砂砂分高则则说明捕捕鱼的船船在浅海海作业或或是捕虾虾的副产产品。三 乳猪猪料用次次粉范围本标准规定定了山东东六和集集团乳猪猪料用次次粉的质质量指标标及分级级标准 本本标准适适用于山山东六和和集团公公司内部部质量判判定及采采购要求求规范用文件件性引NY/T2211-19992 饲饲料用次次粉 山东六六和集团团检测方方法汇编编要求3.1感观观要求粉状，粉白白色至浅浅黄色，具具有小麦麦的香味味，无发发酵味，无无霉变味味，无结结块，无无异味，色色泽新鲜鲜一致3.2理化化指标项目指 标A级B级水 分分 %1212灰 分分 %22.5四氯化碳浮浮选物%0.513.3卫生生指标 符合GB113077

52、8-220011要求3.4仓储储时间夏季（5月月-100月）不不适超过过10天天，如发发现有发发酵、霉霉变之现现象应立立即停止止作用。3.5不得得掺入小小麦以外外其它物物质，若若加入抗抗氧化剂剂，防霉霉剂时应应做相应应说明包装、运输输及储存存4.1包装装袋不得得使用装装过有害害有毒物物质的旧旧包装袋袋（如化化工产品品）。4.2包装装袋必须须符合保保质、保保重、安安全运输输的要求求，不得得破损，防防止污染染。品质判断指指南5.1影响响次粉质质量的关关键因素素是新鲜鲜度，到到货感观观检查及及水分高高低决定定次粉用用途及贮贮存时间间，品管管人员要要每天巡巡仓，查查看次粉粉是否发发热，发发酵，发发霉，

53、结结块。5.2有发发酵，发发霉气味味的次粉粉不适宜宜做乳猪猪料。5.3次粉粉掺假大大部分掺掺滑石粉粉，用四四氯化碳碳浮选法法很容易易识别。5.4若灰灰分高（大大于2%）还应应做镜检检，看是是否掺有有稻谷壳壳。四 乳猪猪料用膨膨化玉米米范围本标准规定定了乳猪猪料用膨膨化玉米米的质量量指标及及分级标标准本标准适用用于山东东六和集集团乳猪猪料用膨膨化玉米米质量判判定及采采购要求求规范性引用用文件SB/T1100777-119922 水水貂配合合饲料山东六和集集团检测测方法汇汇编要求3.1原料料要求膨化玉米所所用原料料玉米应应符合乳乳猪料用用玉米BB级以上上要求,自然干干玉米或或双筒烘烘干的玉玉米.3

54、.2感观观要求粉碎前外观观呈条状状，小块块装，内内部有大大量气孔孔，粉碎碎后的粉粉末具有有烤玉米米的香味味，容重重较轻,不应有有烧焦及及生玉米米的味道道,不可可见碎玉玉米。3.3理化化指标准准糊化度770%水 分10%包装与贮存存玉米膨化后后应尽快快使用，未未用完的的用袋装装好，扎扎紧口，防防止受潮潮，防止止污染五 乳猪猪料用膨膨化大豆豆范围本标准规定定了乳猪猪料用膨膨化大豆豆的质量量指标及及分级标标准本标准适用用于山东东六和集集团乳猪猪料用膨膨化大豆豆质量判判定及采采购要求求规范性引用用文件NY/T1131-19889 饲饲料用大大豆粕山东六和集集团检测测方法汇汇编要求3.1 原原料要求求膨

55、化大豆所所用大豆豆应符合合NY1135-19999饲饲料用大大豆中中二级品品以上的的规定，水水分小于于13%，粗蛋蛋白大于于35%，杂质质小于11%，大大豆外观观圆形椭椭圆形黄黄色籽粒粒，无青青豆，无无异味，无无发霉3.2膨化化大豆的的感观要要求外观为油状状黄色，有有气孔的的小粒，有有很浓的的烤大豆豆的香味味，无生生大豆味味3.3理化化指标脲酶活性：PH增增值法0.005(330)，定定量小于于0.225水 分分： 12.5%蛋白溶解度度： 70%包装与贮存存膨化大豆应应用编织织袋包装装，生产产的成品品应尽快快用完。六 乳清清粉1 范围本标准规定定了乳猪猪料用的的乳清粉粉质量指指标及分分级标准

56、准本标准适用用于山东东六和集集团乳猪猪料用乳乳清粉质质量判定定及采购购要求2 规范性性引用文文件GB50009.7785 食食品中还还原糖的的测定方方法山东六和集集团检测测方法汇汇编3 要求3.1感观观要求色泽呈乳白白色 ,有乳清清的香甜甜味和奶奶香味,有吸潮潮性,不不可有酸酸味等异异味.无无结块，色色泽新鲜鲜一致3.2理化化指标项 目指 标A级B级 乳 糖 %大于标称含含量966% 粗 蛋 白 %11-13311-133 水 分 %55 盐 分 %33 灰 分 %993.3卫生生指标 符合GB1130778-220011要求4 包装与与贮存乳清粉应防防潮保质质，贮存存期3个个月并应应尽快用用

57、完。5 品质质判断指指南5.1乳清清粉分甜甜乳清粉粉和酸乳乳清粉, 甜乳乳清粉质质量佳,酸乳清清粉质量量差,乳乳猪料宜宜用甜乳乳清粉.5.2乳清清粉吸潮潮性强, 贮存存在干燥燥通风的的地方,在搬运运和贮存存时要小小心破碎碎,取样样洞要及及时用不不干胶封封闭.5.3乳清清粉含大大量的乳乳糖并易易和蛋白白质发生生美拉德德反应引引起变色色,在贮贮存时如如温度高高或贮存存时间长长,乳清清粉发生生结块变变色(黄黄褐色),说明明已变质质.5.4乳清清粉贮存存时间33个月并并应尽快快用完5.5灰分分和酸度度是衡量量乳清粉粉质量的的重要项项目, 甜乳清清粉灰分分正常值值在6-8.55%,若若灰分大大于111%

58、说理理是经中中和的酸酸乳清粉粉或乳清清再制粉粉. 七 血浆浆蛋白粉粉1 范围本标准规定定了乳猪猪料用血血浆蛋白白粉的质质量指标标及分级级标准本标准适用用于山东东六和集集团乳猪猪料用血血浆蛋白白粉质量量判定及及采购要要求2 规范性性引用文文件GB50009.119420003 保保健食品品中免疫疫球蛋白白IgGG的测定定3 要求3.1感观观要求色泽呈灰白白色、浅浅黄白色色，具有有肉香味味的粉末末，无异异味、无无结块、无无霉变。3.2理化化指标项 目指 标A级B级水 分 %55蛋 白 %7070盐 分 %57灰 分 %1012赖氨酸 %6.56.0IgG %1715水 溶 性性合格合格3.3卫生生

59、指标 符合GB1130778-220011要求4.包装、运运输及贮贮存4.1血浆浆蛋白粉粉中不得得掺入其其它非血血浆蛋白白粉物质质，若加加入抗氧氧化剂应应说明4.2不得得用装过过有害物物质的废废旧包装装袋装血血浆粉4.3包装装应符合合运输、保保质、保保量的要要求，防防止污染染。5.品质判判断指南南：5.1血浆浆蛋白粉粉的加工工工艺及及原血的的鲜度对对质量影影响很大大，不是是采用喷喷雾干燥燥工艺而而是卧式式塔烘干干的IggG（免免疫球蛋蛋白）基基本失活活。若原原血的鲜鲜度差则则色泽偏偏红，若若加入过过多的抗抗凝剂，则则灰份高高。5.2生产产乳猪料料用血浆浆蛋白粉粉的原血血宜采用用鲜猪血血。5.3

60、血浆浆蛋白粉粉应易溶溶于水中中，其水水溶液呈呈弱凝胶胶状，若若反之，则则品质差差或掺假假。5.4血浆浆蛋白粉粉的掺假假物为：大豆分分离蛋白白、大豆豆浓缩蛋蛋白、大大豆组织织蛋白、大大豆蛋白白粉、大大豆粉、乳乳清粉、奶奶粉、血血粉等物物质，进进货检验验时应注注意识别别。5.5血浆浆蛋白粉粉的评审审十分必必要，需需技术与与原料部部门派人人对其实实地考察察。八 乳猪猪料用油油脂1 范围本标准规定定了乳猪猪料用油油脂的质质量指标标及分级级标准本标准适用用于山东东六和集集团乳猪猪料用油油脂质量量判定及及采购要要求2 规范性性引用文文件山东六和集集团检测测方法汇汇编3 要求3.1感观观要求鱼油：色泽泽为橙