蛋白质含量测定-双缩脲试剂法实验报告

1、生物化学卖脸掖告创作：欧阳道时间：2021.03. 06创作：欧阳道处名：学号：专业年级：俎别:生畅化学与分子生畅学卖殓教学中令实验名称蛋白质含量测定双缩腺试剂法实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、卖脸目的拿握玖缩腺测走血请总蛋勺的昱本原理、操 作；12拿握双缩豚试利的配制；熟悉血请总蛋勺的临床意义；了解玖缩腺比测定血请总蛋自的特A和注意事项二、卖絵虑理两分子尿素加热脱氣缩合成的玖缩腺（H2N-OC-NH-CO-NH2）,因分子内含有两个邻接的肽钱，往喊性涿液中可与Cu2+发生玖缩豚反应，生成紫红色络 合扬。22卷仓质分子令有大量筱此柏连的肽钱f-CO-NH-）,同样能准.喊

2、性条件下与Cu2+发生玖缩腺反应，生成的紫红色给合物，且亦540nm戏的吸光度与蛋勺质的含量在10120g/L范围内有良好的线性关糸。材料与方出：卖验材料:卖验试利：（D小牛血请；6.0mol/LNaOH涿液；玖缩腺试利：硫酸駙、酒石酸钾钠、碘化钾； 卷自质标准液（70g/L丿；0.9%NaCl；蒸馆水。3.12卖验器材：试管；烧杯；彖量瓶；加样枪；刻度狹管；玻痢棒;1100分光光度计；电子天平；水浴锅。3.2.卖验步骤f 取3支试管，做好榇记，按下表操作：加入杨（mljB（空自丿S ffe准丿U （待测丿小牛血请（1:10丿 -0.5蛋合质标准液（1：10丿-0.50.9%Nacl0.54.

3、04.04.00.9%Nacl0.54.04.04.0厂a各管混匀，观察各试管颜色;b.琦冬试管置于37C水浴锅中加热20min,观疼颜色；c将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光 幺计的样壮槽内，柱波长540nm,以空仓管调零，测S；和U管浹的光度；d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管。 依 擔 公 式 算 出 结 果：A血清总蛋白（g/L） = Hx蛋白质标准液浓度（g/L）As凹、结果与讨论：卖验现象：选取三支洁净无损的试管，从左往右依次加入0.9%氣化钠滚液、蛋勺质栋准液、才目应的小牛血请各0.5ml,分别命珞为B试管、S试管和U试管，再分别向三支试管内加入4ml的玖缩腺

4、试涿液均成蓝色透朗状。将三支试管放入37C水浴锅中加热20min,取出后，B试管呈淡蓝色，S试管和U试管均成渕紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色诛。(如图一丿图一水浴后三支试管颜色图二分光计读数4.2 .实验数抿测定次数管号: 平均吸光度二 0.184Orm?U0.1520.1510.1520.1517结果计算：代入公式：血请总蛋勺fg/L)=(Au/As)X養自质标准液浓度fg/L),得出结果：血请总蛋仓=57.493g/Lo4.3.结果讨论经杳闻脊料得：正帝成人血请总蛋自含量为6080g/L,而小牛血请总蛋自含量比正帝成人血请总、蛋自 含量略低一点，本次结果得出小牛血请总養自含量为 57.

5、493g/L,符合情况。4.3.1 .成功原因：本次忒验的试利混合水浴后出现了预期效果：B试管呈淡蓝色，S试管和U试管均成肉紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。B试管呈淡蓝色是因为B试 管中没有发生任何反应，所以呈现玖缩腺试利本来的淡 蓝色，而S试管和U试管呈况紫色是因为试刘中的養勺质和玖缩豚发生了玖缩豚反应而呈肉紫色。吸光度测试后得到的数擔，经计算后得到了预期 中的结果，是因为前面操作严谨。4.32谖差分析三次重复测文过程中出现了一些浮动数据，可能 是因为仪器本身存淮.的可允许的誤差施爾。第一次耆试使用分光光度计的时候得到了负值， 经查朗是因为放置柱其内的比色杯将磨面对准了通光 面，经调整

6、后，荻得了正确的数据。44课后复习題什么叫玖缩腺试刘？为什么要柱玖缩腺试4利 中加入酒石酸钾钠和碘化钾？答：玖缩腺试利是一个用于鉴走卷自质的分析化学 试利，遏到蛋勺质显紫色。它是一个喊性的含铜试液， 呈蓝色，由0.lg/ml JL範化钠或氢氣化钾、0.01g/ml硫 酸铜和酒石酸钾钠配制。硫酸铜、酒石酸钾钠的碱性涿 液中会生成紫红色络合杨，柱这种比例的碱性水涿液 中，本来形成的Cu(OH)2会与滚液中多余的OH形成 Cu(OH)42络离子，酒石酸钾钠的作用就是保护这种 络离子不彼析出麦为沉淀，向试利中加入碘化钾，可延 长试利的使用寿命。4.42试利配制过程中，为何NaOH要单独配制，最后加入？答：先单独加入NaOH嫁液是为了萤造_个喊性环 境確喊性环境下玖缩腺试刘B中的Cu2+与蛋自质肽键 络合产生颜色反应.如果先将玖缩腺试利A与玖缩豚试 利B混合，即NaOH与CuSO4涿液混堆.一起_，那么就会产 生Cu(OH)2沉淀，跖利就会失去作用，看不到效果,也就无 比判断是否存在蛋勺质.4.4.3.简述血请总蛋自测：t的临床意义。答：临屎上，当血请总卷自浓度阵低时，可能代 表：血请危、蛋勺浓度啥低、