腺病毒载体工艺平台

1、 源兴基因药物研发中心腺病毒载体工艺平台介绍2022/9/121研发中心厂房及设备 源兴基因药物研发中心建筑面积1900多平方米，其中符合国家GMP要求的洁净厂房面积1600多平方米，包括原液生产车间、制剂生产车间、质量控制实验室以及研发实验室。 研发中心配置了NBS细胞罐、AKTA纯化系统、高速冷冻离心机、切向流超滤系统、二氧化碳培养箱、生物安全柜、分析型HPLC系统、PCR仪、电泳仪、酶标仪、超声波破碎仪、超声波西林瓶清洗机、隧道式灭菌烘箱、液体灌装加塞机、轧盖机、凝胶扫描成像系统、超纯水仪、多效蒸馏水机等仪器设备。 能够满足腺病毒载体药物研发、生产和质量控制的要求。 2022/9/122

2、2022/9/1232022/9/1242022/9/1252022/9/1262022/9/1272022/9/1282022/9/129研发中心生产系统组织图2022/9/1210研发队伍打造了一支技术过硬的研发队伍，能够保证工艺水平及产品质量稳定。历经多次新药申报，比较熟悉新药审评程序和规定，积累了较丰富的申报经验，能够比较顺利的解决有关问题。2022/9/1211管理制度建立了300多个SOP、SMP等标准程序和规章管理制度，按照GMP要求严格规范管理。2022/9/1212研发中心工艺平台研发中心工艺产业化平台是通用型腺病毒载体药物生产工艺和质量标准研究的药学技术平台，中试生产工艺水

3、平达到了国内同行业先进水平，可以在产量及质量上满足腺病毒载体药物临床前和临床用样品制备的要求。本工艺拥有自主知识产权，可作为腺病毒载体新药研发及生产的技术基础。5L细胞罐收获物经纯化后产量能达到E15VP/批，注射液制剂工艺达到了小容量水针1万支/批的生产能力。产品纯度大于98%，比滴度大于3.3%，各项质检结果都能达到FDA对腺病毒类生物制品的质量标准要求。 2022/9/1213研发中心已完成申报临床所需药学研究的品种品种代号研究单位研究时间治疗性重组HBV腺病毒疫苗CHB3源兴2004年3月至2005年11月治疗性HIV腺病毒载体疫苗H30源兴2005年12月至2007年8月治疗性重组腺

4、病毒EB病毒潜伏膜抗原疫苗LMP2CDC病毒病所委托源兴承担药学研究2007年9月至2008年10月2022/9/1214新药申报三方面研究内容 药学研究 药效研究 安全评价2022/9/1215药学研究主要内容 上游构建及鉴定 细胞/毒种研究及三级库建立 原液工艺研究 制剂工艺研究 检测方法及质量标准研究 稳定性研究 试制三批样品2022/9/1216细胞及毒种研究 细胞检定、传代稳定性研究 毒种检定、代次及遗传稳定性研究2022/9/1217建细胞库 原始细胞细胞来源于ATCC 主细胞库质量控制 工作细胞库质量控制细胞扩增细胞扩增2022/9/1218建毒种库 工作种子批病毒扩增 原始种子

5、批 主种子批鉴定检测质量控制质量控制病毒扩增2022/9/1219原液工艺流程、参数及技术指标Sepharose 6 Fast Flow 分子筛层析 回收率（3批平均）重组腺病 毒种子罐 收获物超滤浓缩液SOURCE 30Q 阴离子交换柱层析层析收集液原 液6000RPM离 心20min500K膜超滤浓缩10倍细胞种子细胞罐扩增5L罐细胞培养，病毒扩增：DO60%,37,pH7.2,耗糖40g/d接种病毒，MOI为20 H30产量（3批平均） 53% 460ml1.11015 VP2022/9/1220细胞罐工艺细胞复苏培养毒种制备罐细胞培养罐细胞染毒罐病毒培养纯化2022/9/1221细胞罐

6、葡萄糖消耗监控曲线图2022/9/1222细胞罐产毒浓度曲线2022/9/1223细胞罐病毒收获曲线2022/9/1224纯化工艺罐病毒收获液离心超滤浓缩离子交换层析酶切分子筛层析原液2022/9/1225纯化图谱2022/9/1226 制剂工艺流程图病毒保存液原 液半成品配制除菌分 装轧 盖灯 检贴 签 包装、贮存铝盖清洗、烘干胶塞灭菌西林瓶清洗、干烤检测检测2022/9/1227制剂处方筛选结果从以上结果可以看出，处方为最优，处方次之，处方最差，处方较差。于是将处方确定为处方。 不同处方贮存情况比较图0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E

7、+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+09012345678贮存时间（周）滴度（IU/ml）处方1处方2处方3处方42022/9/1228 质量标准及检测方法检 测 项 目 注 射 液 方 法 外观 （含可见异物） 符合药典相应规定 中国药典三部附录 B pH 值 7.08.0 中国药典三部附录 A 装 量 1.0 ml 中国药典三部附录 A 鉴别试验 符合相应的规定 PCR法 病毒颗粒数 1.01011 VP/ml (80-150%) UV法 比滴度 （IU/ Vp） 3.3% TCID50法 HPLC纯度 95% HPLC法 小鼠效力试验阳性率60%ELISPO

8、T法293细胞DNA 残留量 10ng/剂量 用地高辛试剂盒方法 （固相斑点杂交法） 牛血清白蛋白残留量 100ng/剂量 ELISA法 RCA 1RCA/31010 VPA549细胞检测法 （空斑法） AAV检测 不得检出 PCR法 293细胞蛋白残留量100ng/剂量 ELISA法 无菌试验 （含支原体） 阴性中国药典三部 附录 A和 B 细菌内毒素 10EU/剂量 中国药典三部附录 E 小鼠异常毒性试验 符合规定 中国药典三部附录 F 2022/9/1229HPLC纯度2022/9/1230免疫荧光检测2022/9/1231 稳定性研究试验结果 稳定性试验结果表明，在-80、-20和2-

9、8存放9个月，本品质量都保持稳定，而在37其质量有显著下降。 不同温度贮存情况图0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+090周1周2周3周4周5周6周2月3月6月9月贮存时间滴度（IU/ml）-80-2028372022/9/1232生物制品药学研究申报资料药品注册管理办法药学研究资料7.药学研究资料综述。8.生产用原材料研究资料：（1）生产用动物、生物组织或细胞、原料血浆的来源、收集及质量控制等研究资料；（2）生产用细胞的来源、构建（或筛选）过程及鉴定等研究资料；（3）种子库

10、的建立、检定、保存及传代稳定性资料；（4）生产用其它原材料的来源及质量标准。9.原液或原料生产工艺的研究资料，确定的理论和实验依据及验证资料。10.制剂处方及工艺的研究资料，辅料的来源和质量标准，及有关文献资料。11.质量研究资料及有关文献，包括参考品或者对照品的制备及标定,以及与国内外已上市销售的同类产品比较的资料。12.临床试验申请用样品的制造和检定记录（连续3批） 。13.制造和检定规程草案，附起草说明及检定方法验证资料。14.初步稳定性研究资料。15.直接接触制品的包装材料和容器的选择依据及质量标准。2022/9/1233样品试制条件要求药品注册现场核查管理规定 临床试验用药物应当在符合药品生产质量管理规范的车间制备。制备过程应当严格执行药品生产质量管理规范的要求。 样品的原始批生产记录与申报资料工艺一致。 必须通过药监局现场核查。2022/9/1234腺病毒产品药学研究的核心 生产工艺的可放大性及稳定性 样品必须用具有规模放大性、可稳定批量生产的工艺制备 检验方法经过验证 产品质量必须通过中检所复核2022/9/1235腺病毒产品药学研究的关键点 建立毒种产业化应用标准和评估方法 比滴度 SFDA要求腺病毒制品比滴度3.3%。 产量 单细胞产