内毒素的检测及意义

1、内毒素的检测及意义内毒素的检测及意义第1页内毒素基础知识仪器试剂简单介绍及试验原理临床检验关心问题132三大知识点内毒素的检测及意义第2页1892年,科学家Richard在研究霍乱弧菌时候,发觉革兰阴性菌细胞壁外膜中有一个不溶性成份,它能够引发人体发烧、休克、器官损害等病理表现，因其毒性效应和性质与外毒素有显著差异，就用内毒素这一术语来描述该物质。随即多年对革兰阴性菌细胞壁外膜超微结构技术和生物分析技术，证实内毒素是磷脂双分子层结构。内毒素发觉历史内毒素的检测及意义第3页内毒素组成O特异性抗原脂质A关键多糖内毒素的检测及意义第4页内毒素定义和危害内毒素（Endotoxin）是革兰阴性菌细胞壁外

2、膜脂多糖（LPS）成份，是革兰阴性菌生长时释放或死亡后裂解出来毒性产物，其中起主要致病作用是非结合游离脂多糖（FLPS）。内毒素能够直接作用于人体，激活组织内炎性细胞和炎症因子，造成机体发烧并产生全身性炎症反应，继而引发弥散性血管内凝血、休克、多脏器功效衰竭等严重病理生理症状，危及生命。定义危害内毒素的检测及意义第5页内毒素理化性质可滤过性：能够穿透滤过膜水 溶 性：LPSO-特异性Ag呈亲水性被吸附性：可被活性碳所吸附易被强酸、强碱和强氧化剂破坏耐 热 性：彻底灭活需250高温干烤一小时内毒素的检测及意义第6页人体内毒素起源内源性路径外源性路径注射药品及溶液开放性创伤烧伤骨折感染休克大手术术

3、后肝脏疾病内毒素的检测及意义第7页仪器试剂介绍及试验原理BET-24A细菌内毒素分析仪 天津大学天大天发科技有限企业生产人体液检测专用鲎试剂盒 湛江博康海洋生物制品有限企业生产内毒素的检测及意义第8页鲎 20世纪六十年代，大家发觉一个古老海洋生物，被称为“海洋活化石”鲎，它血液与内毒素接触后会发生特异性凝集反应，大家经过大量研究和试验从它血液中提取出了用来检测内毒素“鲎试剂”。内毒素的检测及意义第9页内毒素的检测及意义第10页鲎试剂创造 1968年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物试验室成功分离提取鲎血细胞并研制成能够检测

4、细菌内毒素鲎试剂，开辟了人类认识和检测内毒素新纪元！内毒素的检测及意义第11页试剂盒特点鲎试剂是唯一能够检测内毒素水平生物试剂采取更为准确动态浊度法进行检测鲎试剂盒由鲎试剂、I号II号检测前处理液、除菌除热原试管和采血管、吸头及检测用水组成精心设置血液前处理流程，有效去除血细胞和蛋白干扰，准确评定待测样本中内毒素水平采取内毒素国家工作标准品进行质控测评，确保检测结果准确无误采取国际通用内毒素活性单位（EU/ml）来准确衡量待测样本中内毒素致病效能内毒素的检测及意义第12页内毒素单位EU/ml1BET-24A采取国际通用内毒素活性单位EU/ml来表示检测出内毒素结果；2活性单位指是在生物试剂在检

5、测一些含有一些活性生物时，它测得是这种生物说是致病力，而不是这种生物重量；3不一样G菌释放内毒素活性不一样，而对临床最有诊疗价值是观察到内毒素致病力大小，所以内毒素水平用活性单位来表示更客观，更有科学意义。内毒素的检测及意义第13页试验原理 经过鲎试剂与内毒素溶液混合会发生凝集反应产生浊度改变，经过浓度时间反应曲线，得出待测样品内毒素浓度；内毒素的检测及意义第14页试验原理内毒素的检测及意义第15页试验原理 鲎试剂与内毒素反应是特异性“S”曲线，取光密度值为0.02点时作为反应终点时间，内毒素浓度与反应时间成反比内毒素的检测及意义第16页BET检测标本范围 尿 液胸腔积液血 液脑脊液透析液和透

6、析用水腹腔积液内毒素的检测及意义第17页检测内毒素方法定性检测凝胶法定量检测光度（浊度）法显色（比色）法动态浊度法终点浊度法动态显色法终点显色法内毒素的检测及意义第18页几个检测方法比较 凝胶法检测特点“限量”检测，是一个传统经典检测方法；凝胶法是以试管内反应物凝胶牢靠程度为判断标准，易受人为原因影响；限量检验最低检测限仅为0.035EU/ml，因供试品稀释倍数所限，轻易被供试品干扰，误差大。所以，凝胶法不适合在临床用于体液细菌内毒素检验；显色法检测特点显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生凝固酶使特定底物显色释放出呈色团多少而测定内毒素含量方法，依据产物颜色判断内毒素浓度。 此法试剂较

7、昂贵，操作较复杂，在一定范围之内灵敏度、特异性较高，但检测范围窄；内毒素的检测及意义第19页动态浊度法检测特点动态浊度法检测特点利用细菌内毒素在与鲎试剂形成凝胶过程中浊度动态改变定量测定细菌内毒素水平 动态浊度法法检测范围宽，检测范围为 0.005EU/ml 100EU/ml，应用范围广对样本内毒素含量能够定量检测，标准化程度高，适适用于临床体液细菌内毒素引发发烧及重症疾病早期诊疗检测内毒素的检测及意义第20页发烧原因快速辅助诊疗（ 1小时）内毒素定量检测临床意义早期判断革兰阴性菌感染情况（G菌所致）重症疾患早期诊疗帮助临床医生快速合理筛选适当抗生素判断抗感染治疗效果及预后肠源性内毒素血症预判

8、及评定内毒素的检测及意义第21页恶性肿瘤感染结缔组织GG+发烧发烧原因快速辅助诊疗病毒真菌等细菌内毒素的检测及意义第22页帮助临床医生快速筛选合理抗生素G内毒素头孢菌素类喹诺酮类碳氢霉烯类氨基糖甙类内毒素的检测及意义第23页内毒素的检测及意义第24页第82回日本泌尿器科学会 1994.4内毒素的检测及意义第25页内毒素检测与微生物培养关系内毒素检测微生物培养确定菌种菌种确定准确确定指导用药检测速度1h 快37天，慢评定病情轻重重疾早期预警阳性率80%20%内毒素的检测及意义第26页内毒素与血培养结果比较 科室 内毒素结果(EU/ml)血培养结果 脑外科 0.4808大肠埃希菌 ICU 0.21

9、36大肠埃希菌 ICU 0.5904鲍曼不动杆菌 ICU 0.1408鲍曼不动杆菌肾内科13.4727大肠埃希菌 肝移植科 2.1大肠埃希菌肝移植科16.8792大肠埃希菌内毒素超标,血培养阳性内毒素的检测及意义第27页内毒素与痰培养结果比较 科室内毒素结果(EU/ml)痰培养结果脑外科3.0096肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌 脑外科3.2064肺炎克雷伯菌脑外科 11.2776铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌 肾内科 1.8264肺炎克雷伯菌铜绿假单胞菌肾移植科10.204阴沟肠杆菌ICU8.0672大肠埃希菌肝移植科2.79鲍曼不动杆菌内毒素的检测及意义第28页BET和PCT(降钙素原)区分PCT本身无致病作用，而LPS能直接造成人体发烧及产生炎症反应PCT也是在以LPS为首炎症因子作用下刺激机体靶细胞产生PCT仅能判断是否是细菌感染，BET能判断是否为G菌感染，检测更精准对于一些肿瘤患者、新生儿及接收移植手术患者而言，如感染则检测PCT有制约，而BET对此毫无制约内毒素的检测及意义第29页分段区间解释00.035EU/ml 无显著内毒素血症0.035 0.1EU/ml 临床观察期0.1 1.0EU/ml 内毒素血症大于1.0EU/ml 重度内毒素血症内毒素的检测及意义第30页BET测得值影响原因有那些外源性内毒素侵入患者肝功效血细胞及免疫系