微生物学检验实验：常见致病性真菌的实验诊断

1、常见致病性真菌的实验诊断常用真菌染色方法革兰染色（念珠菌）乳酸酚棉蓝染色（丝状真菌）墨汁负染（隐球菌）1菌落形态和镜下形态的观察(酵母样真菌)菌落呈现白色，奶酪样的类酵母菌落；菌体呈圆形或者卵圆形，革兰染色阳性增殖过程中容易形成假菌丝菌落形态和镜下形态的观察(隐球菌)2真菌鉴定常用方法念珠菌显色培养API鉴定试剂条YST鉴定卡念珠菌显色培养白色念珠菌绿色热带念珠菌蓝色光滑念珠菌粉红色API鉴定试剂条原理：API 32 C AUX 试验条是由32个含干燥碳水化合物的试验杯组成。只有能以该底物为碳源的酵母菌才能生长。测定结果是以与对照生长物的比较而得；鉴定结果参照分析图谱索引或鉴定软件。试验条的准

2、备记录菌株资料于盘的延长边沿部分(不记在盖上，以免错放)。从包装中取出试验条，置试验条于培养盒中接种物的制备制成浊度2McFarland.的均一菌悬液。菌悬液制备好后应立即使用打开一API C 培养基安瓿，转入250 l上述制备的菌悬液。用吸管轻轻混均，注意避免产生气泡。将API C培养基中悬浮液吸取135 l注入杯内。盒子盖上盖子，在29C 2C 孵育 24-48 小时ATB FUNGUS 3真菌药敏检测试剂条ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹孔。第一对不含任何抗真菌药物，用作阳性生长对照。另外的15对包含不同浓度的5种抗真菌药物，用于测定最小抑菌浓度（MIC）。 ATB FUNG

3、US 3 操作制备浊度相当于2 McFarland的悬浮液。转移20ul 该菌悬液到一ATB F2培养基的安瓿中。每个杯状凹孔中加入135ul 的 ATB F2培养基将一个盖子放在试条上。把试条放入一个气密容器或是一个装有吸潮纸的密闭罐里，在有氧条件下35C (+ 2C)的环境中培养。API鉴定结果判读培养48或72小时后(如果测定，尤其葡萄糖结果在48小时后仍不明确), 每个杯内生长状况与阴性对照的0杯比较。比对照更混浊者为阳性反应。记录于报告单。API鉴定条补充实验运用RAT 培养基大米琼脂吐温确认菌丝（菌丝体）或假菌丝（假菌丝体）的存在。芽管形成实验 将假丝酵母菌接种于0.20.5毫升的

4、人或者动物血清中，37度孵育1.54个小时，镜检观察有无芽管形成。 白假丝酵母菌（+） 热带假丝酵母菌（-）ATBFUNGS3药敏结果判断通过肉眼判读或是使用ATB仪器或mini API （参考使用者手册）自动判读来观察生长情况。ATBFUNGS3药敏结果判断浊度下降80%为微弱生长；浊度下降50%左右为明显减少2022/9/217酵母菌ETEST方法培养基RPMI+2%葡萄糖+MOPS+1.5% Bacto琼脂，pH 7.27.4接种量念珠菌：0.5 McFarland新生隐球菌：1 McFarland孵育条件念珠菌：35，2448h（光滑念珠菌和热带念珠菌需在48h再次确认）新生隐球菌： 35，4872判读方法两性霉素B：100%抑制氟胞嘧啶：90%抑制唑类：80%抑制卡泊芬净：80%抑制2022/9/218白念珠菌Etest判读100%抑制80%抑制对于氟康唑（FCA）, 伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC），最小抑菌浓度（MIC）对应的测试杯得分可以是“2”，“1”，或是“0”分。对于两性霉素B（AMB），最小抑菌浓度（MIC）应该判断为生长完全受抑制的测试杯的浓度（即得分为“0”的测试杯）ATBFUNGS3药敏结果判断小培养主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法和钢