初始污染菌检测

1、初始污染菌检测2022/9/31第1页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一参考标准中华人民共和国药典2005版 附录 微生物限度检查法ISO 11737-1:2006 Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 1: Determination of a population of microorganisms on productsGB/T 19973.1 /ISO 11737-1:1995 医疗器械的灭菌 微生物方法 第一部分：产品上微生物总数的估计GB 15980-1995 一次性使用医疗

2、用品卫生标准2022/9/32第2页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一检测环境及检验量应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行一般供试品的检验量为310个独立包装的同批次供试品。（见ISO 11737-1:2006 A8.1）2022/9/33第3页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一实验材料及设备营养琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液滤器、微孔滤膜（孔径0.45微米，直径50mm）、量筒、剪刀、镊子、培养皿过滤装置、电子天平、压力蒸汽灭菌器、生化培养箱等2022/9/34第4页，共15页，2022年，5月20日，2

3、0点23分，星期一主要步骤采样供试液制备培养菌落计数2022/9/35第5页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一供试液的制备用？ml 氯化钠-蛋白胨缓冲液浸提？小时（包括最内层包装的内壁）-所需供试液的用量和浸提时间需验证处理方法：振动、冲洗、擦拭法、袋蠕动、超声、涡旋混合、搅拌2022/9/36第6页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一举例振动小型医疗器械可以投入无菌的自封袋中，加入缓冲液充分振动。另外，用缓冲液冲洗内包装袋的内壁。并与产品缓冲液相混。2022/9/37第7页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一梯度稀释1ml1ml1

4、ml1ml1ml1ml1ml1ml供试液9mlNacl9mlNacl1:101:1001:10002022/9/38第8页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一转至培养基膜过滤法适用于微生物浓度较低的悬液平板倾注适用于微生物浓度较高的悬液平板涂布适用于微生物浓度较高的悬液螺旋涂布2022/9/39第9页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一薄膜过滤法2022/9/310第10页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一培养药典中的培养条件： 细菌 30-35 48h 霉菌、酵母菌 23-28 72h 必要时，可适当延长培养时间至5-7天2022

5、/9/311第11页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一菌落计数计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。菌落特征： 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色） 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。 大小差异很大。2022/9/312第12页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一计数方法的验证回收率验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验

6、的回收率。A 试验组 供试液+试验菌（50100cfu）B 菌液组 试验菌（50100cfu）C 供试品对照组 D缓冲液对照组 缓冲液+试验菌（50100cfu）(A-C)/B70% D/B70%2022/9/313第13页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一菌落计数报告规则平板法选取细菌、酵母菌平均菌落数在30300之间、霉菌平均菌落数在30100之间的稀释级作为报告菌落数的依据。1）如只有1个稀释级平均菌落数符合上述规定，则将稀释级的菌落数乘以稀 释倍数报告。2）如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数稀释

7、倍数 比值= 低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值2但不超过5时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再进行检查，必要时，应进行方法的重新验证。3）如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。4）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数2022/9/314第14页，共15页，2022年，5月20日，20点23分，星期一菌落计数报告规则薄膜过